镉诱导下活性氧自由基、细胞内钙离子和细胞凋亡三者间的关系.pdf

1、本文通过正常细胞(HL-7702)和肿瘤细胞(Raji)的体外实验，研究镉诱导下活性氧自由基(ROS)堆积，细胞内钙离子变化和细胞凋亡之间的关系。细胞凋亡水平通过Hoechst33258染色实验来检测。细胞内钙离子变化和细胞内活性氧自由基堆积分别采用荧光染料Flu-3/AM和DCFH-DA染色后通过流式细胞仪检测荧光强度来获得。 在实验中我们加入了可以专一螯合细胞外钙离子的EGTA(20mM)和能进入细胞内螫合细胞内钙离子的B

2、APTA-AM(10μM)处理细胞，以研究在镉离子诱导下细胞内浓度明显上升的钙离子主要来源细胞内还是细胞外；通过加入BAPTA-AM(10gM)和可以清除细胞内ROS的NAC(15mM)后检测细胞凋亡率变化，以进一步研究细胞内钙离子和ROS堆积在细胞凋亡途径中的作用。 本实验结果发现HL-7702和Raji细胞在用镉处理以后细胞凋亡率会明显上升，在提高了细胞凋亡水平的同时，细胞内钙离子浓度和ROS堆积也明显增加。当细胞内钙离子

3、和ROS被清除以后，细胞凋亡率也显著下降。BAMTA/AM可以降低了由镉诱导产生的细胞钙离子升高(P<0.001)，ROS积累增加(P<0.001)和细胞凋亡水平升高(P<0.001)等效应。EGTA可以降低了由镉离子诱导产生的细胞内钙离子升高(P<0.01)，ROS积累增加(P<0.001)但是不能降低细胞凋亡水平。以上结果证明了由镉诱导的细胞内钙离子上升的钙离子主要来源细胞内(HL-7702细胞中约占78％，Raji细胞中约占59％

4、)，另外少部分来源细胞外。实验结果同时显示，在镉离子的诱导下细胞凋亡和ROS堆积(HL-7702细胞中r=0.8781；Raji细胞中r=0.6919)和细胞内钙离子浓度上升(HL-7702细胞中r=0.9073；Raji细胞中r=0.8692)均呈显著正相关。而ROS堆积和细胞内钙离子浓度上升也呈显著jF相关(HI-7702细胞中r=0.8619；Raji细胞中r=0.9061)。 通过本实验我们可以得出两个结论：1)在镉离