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简介：1被称为卵磷脂的磷脂分子是（）A磷脂酰胆碱B磷脂酰乙醇胺C磷脂酰丝氨酸D鞘氨醇2生物膜的各种成分中不属于双亲性分子的是（）A磷脂B胆固醇C跨膜蛋白D膜周边蛋白3最简单的糖脂分子是（）A脑苷脂B神经节苷脂C单半乳糖基甘油二酯D三半乳糖基甘油二酯4人体中多数细胞膜，其脂类与蛋白质含量相比A脂类含量高很多B蛋白质含量高很多C脂类和蛋白质含量大致相等D仅含有脂类，不含有蛋白质5最简单的磷酸甘油酯是（）A磷脂酸B磷脂酰胆碱C磷脂酰乙醇胺D磷脂酰丝氨酸E鞘氨醇6生物膜是指（）A细胞膜的另一种说法B除线粒体膜以外的各种膜的总称C内膜系统的膜D细胞膜、细胞内膜和线粒体膜的总称7下列生物膜中蛋白质/脂类比值最大的是（）A神经髓鞘B人红细胞膜C内质网膜D线粒体外膜E线粒体内膜8下列膜脂分子在膜中含量最多的是（）A磷脂酰胆碱B磷脂酰乙醇胺C磷脂酰丝氨酸D鞘磷脂9膜脂中最为重要的脂类是（）A脂肪酸（）A是双亲媒性分子B跨膜区是Α螺旋或Β筒C可跨膜一次或多次D因为与膜的疏水区非共价结合，因此较容易去除19关于细胞膜上糖类的不正确的叙述是（）A质膜中糖类主要分布在膜的外表面B主要以糖蛋白和糖脂的形式存在C糖蛋白和糖脂上的低聚糖侧链从膜的胞质面伸出D糖蛋白中的糖链对蛋白质及膜的性质影响很大20脂锚定蛋白与脂双层的结合是通过何种化学键实现的（）A共价键B离子键C氢键D静电作用21红细胞中的血影蛋白是一种（）A跨膜蛋白B膜周边蛋白C脂锚定蛋白D以上都不是22膜周边蛋白与脂双层的结合通常不包括下列化学键中的（）A共价键B离子键C氢键D静电作用23下列膜蛋白中通过改变离子强度等较温和的条件就能从膜上溶解下来的是（）A跨膜蛋白B膜周边蛋白C脂锚定蛋白D三种蛋白都很难从膜上去除24细胞膜有能量交换、物质运输、信息传递三种主要功能，这些功能与组成膜的哪种物质有直接关系（）A磷脂B糖类C蛋白质D胆固醇25被称为脑磷脂的磷脂分子是（）A磷脂酰胆碱B磷脂酰乙醇胺C磷脂酰丝氨酸D鞘氨醇26磷脂酰胆碱多分布在细胞膜的（）A在脂双层的内外两层大致相当B主要分布在脂双层内层C主要分布在脂双层外层

简介：细胞生物学研究中的激活剂和抑制剂细胞生物学研究中的激活剂和抑制剂ANANDIKADHALIWALPHDANANDIKADOTDHALIWALATGMAILDOTCOMRUTGERSUNIVERSITY,NEWJERSEY,UNITEDSTATES译者译者王秀英博士王秀英博士MARYATLABOMEDOTCOM美国新泽西州普林斯顿合原研究有限责任公司SYNATOMRESEARCHDOIHTTP//DXDOIORG/1013070/MMCN3185日期日期更新20131019原始版20130427引用引用实验材料和方法20133185介绍介绍细胞生物学研究细胞结构、生理特性及细胞功能。它涉及到对细胞器、细胞与周围环境间相互作用、生命周期、分化及死亡的研究。细胞生物学与遗传学、分子生物学、发育生物学和生物化学等其它生物学领域是密切相关的。图1真核细胞骨架。肌动蛋白纤维显示为红色，微管为绿色，核为蓝色。肌动蛋白染色使用的是罗丹明鬼笔环肽，微管使用的是连接有ALEXA488的抗Α微管蛋白着色剂，DNA则使用的是HOECHST染料。对于细胞生物学领域的研究者而言，为了更加全面地理解细胞的功能、细胞的信号传递以及控制细胞命运、功能及表型的胞内机制，抑制剂与激活剂是至关重要的研究工具。许多抑制剂和激活剂都被广泛用于研究细胞动力学及功能。这里我们对真核细胞中各种细胞生物学研究如细胞内吞、分泌、粘附、细胞骨架动力学、内质网和高尔基体研究中常用的抑蛋白ALDRICH综合症蛋白（WASP）家族成员）并抑制ARP2/3复合物的活化。该分子阻断肌动蛋白丝的组装。同样抑制PIP2诱导的肌动蛋白聚合反应EC504ΜM。抑制依赖于肌动蛋白的细胞功能（迁移、运输、吞噬、内褶）。ALDRICH,TOCRISBIOSCIENCEMYCALOLIDEB（C52H74N4O17）肌动蛋白它选择性地将F肌动蛋白彻底解聚成G肌动蛋白。与肌动蛋白以11的摩尔比进行结合（KD1320NM）。溶于DMSO、甲醇或异丙醇。抑制肌动球蛋白ATP酶。111213,SANTACRUZBIOTECHNOLOGY,ENZOLIFESCIENCENOCODAZOLE（C14H11N3O3S）微管抑制微管的动态变化并促使微管解聚。与Β微管蛋白结合并阻止两个链间二硫键中任意一个的形成。在DMSO的溶解度达10MG/ML。有丝分裂抑制剂。将细胞周期阻滞在G2/M期。抑制各种癌症相关的激酶，包括ABL、CKIT、BRAF、MEK1、MEK2和MET。14151617,SIGMAALDRICH,TOCRISBIOSCIENCE,CELLSIGNALINGTECHNOLOGY,EMD4BIOSCIENCES长春碱（C46H58N4O9H2SO4）微管解聚微管。与微管蛋白结合并诱导其自缔形成螺旋形聚合体，抑制微管组装。溶于水和甲醇。通过阻断有丝分裂纺锤体的形成将细胞周期阻滞于G2/M期。在一些肿瘤细胞系中诱导凋亡。抑制自噬体的成熟。181619,SIGMAALDRICH,TOCRISBIOSCIENCE,EMD4BIOSCIENCES,SANTACRUZBIOTECHNOLOGY。秋水仙碱（C22H25NO6）微管与微管蛋白结合并阻止其聚合在乙醇中溶解度达50MG/ML，在水中溶解度可达100MM，DMSO中溶解度可达100MM。有丝分裂抑制剂。在一些正常的及癌症细胞系中诱导凋亡202122,SIGMAALDRICH,TOCRISBIOSCIENCE,EMD4BIOSCIENCES长春新碱（C46H56N4O10微管能与微管蛋白结合并抑制微管形成的吲哚生物溶于甲醇和水。延迟细胞周期的进232425,SIGMAALDRICH,TOCRISBIOSCIENCE,

简介：本文格式为本文格式为WORD版，下载可任意编辑版，下载可任意编辑1细胞生物学和答案细胞生物学和答案安徽大学20062007学年第一学期细胞生物学考试试卷（A卷）一、名词解释题（每题3分，共30分）1．内膜系统（ENDOMEMBRANESYSTEM）指在布局、功能及发生上紧密相关的，由膜围绕的细胞器或细胞布局，主要包括内质网、高尔基体、溶酶体、过氧化物酶体、核膜、胞内体和分泌泡等。2．驱动蛋白KINESIN在神经元突触运输中，察觉两种马达蛋白，其中驱动蛋白可利用ATP水解释放的能量向（＋）极运输小泡；而胞质动力蛋白那么驱动向（－）极的运输。3．CASPASE家族CASPASE活性位点是半胱氨酸CYSTEINE，裂解靶蛋白位点是天冬氨酸残基后的肽键，因此称为CYSTEINEASPARTICACICSPECIFICPROTEASE，即CASPASE4．受体是一种能够识别和选择性结合某种配体（信号分子）的糖蛋白，当与配体结合后，通过信号转导作用将胞外信号转换为胞内化学或物理的信号，以启动一系列过程，最终表现为生物学效应。本文格式为本文格式为WORD版，下载可任意编辑版，下载可任意编辑3它弥漫整个细胞质的空间，与外侧的细胞膜和内侧的核膜存在确定的布局联系，以保持细胞特有的外形，并与细胞运动有关。也可以这样回复从广义上讲，细胞骨架包括细胞质骨架、细胞核骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。从狭义上讲，细胞骨架即为细胞质骨架，包括微管、纤丝两大类纤维成分。细胞生物学试卷A卷共5页第1页二、填空题（每空1分，共20分）1．根据靶细胞上受体存在的部位，可将受体分为细胞内受体和细胞外观受体。前者受胞外亲脂性信号分子激活，主要代表为甾类激素和甲状激素；后者受胞外亲水性，主要代表为神经递质、生长因子、局部化学递质和大多数激素。2．内质网的特征酶是葡萄糖6磷酸酶、高尔基体的特征酶是糖基转移酶、过氧化物酶的特征酶是尿酸氧化酶；3．细胞是由英国学者在1665年察觉的。细胞学说是由德国的植物学家和动物学家共同提出的。4．离子通道一般可分为电压门通道；配体门通道；压力激活通道3种类型期合成的。6．小分子物质的跨膜转运主要有被动运输和主动运

简介：细胞生物学课程论文题目线粒体通透性转换与细胞凋亡线粒体通透性转换与细胞凋亡的研究进展的研究进展班别学号姓名成绩线粒体是细胞生命活动控制中心，它不仅是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心，而且是细胞凋亡调控中心。研究表明细胞色素C从线粒体释放是细胞凋亡的关键步骤”1。释放到细胞质中的细胞色素C在DATP存在的条件下能与凋亡蛋白酶活化因子1APOPTOSISPROTEASEACTIVATINGFACTORL，APAF一1结合¨1，使其形成多聚体，并促使半胱天冬蛋白酶与其结合形成凋亡小体APOPTOSOME，现已能确定半胱天冬蛋白酶即CASPASE在凋亡过程中是起着必不可少的作用。细胞凋亡的过程实际上是CASPASE不可逆有限水解底物的级联放大反应过程。目前，至少有10多种CASPASE被发现，CASPASE分子间的同源性很高，结构相似，都是半胱氨酸家族蛋白酶，根据功能可把CASPASE基本分为2类一类参与细胞的JJNR；另一类参与细胞凋亡。CASPASE家族一般以酶原的形式存在，并具有半胱氨酸激活位点和底物裂解位点。细胞色素C在DATP存在的条件下与凋亡蛋白酶活化因子1APOPTOSISPROTEASEACTIVATINGFACTOR1，APAF一1结合形成的多聚体主要与CASPASE一9结合形成凋亡小体。其结果是CASPASE一9被激活，激活的CASPASE9能够激活其他的CASPASE如CASPASE一3等，从而诱导凋亡。3．2线粒体释放凋亡诱导因子凋亡诱导因子线粒体释放凋亡诱导因子凋亡诱导因子AIFAPOPTOSISINDUCINGFACTOR，AIF是一种主要的凋亡效应蛋白，在体外它可以诱导染色质凝聚以及DNA大规模片段化的形成。激光共聚焦荧光显微镜和电子显微镜观察显示，在正常的细胞内，AIF定位于线粒体，被线粒体外膜保留在膜间隙，并与热休克蛋白60HEATSTOCKPROTEIN60，HSP60共同定位于线粒体，HSP60被线粒体内膜保留于基质。当细胞受到诱导凋亡的刺激，如癌基因抑制药物神经酰胺等作用时，AIF而不是HSP60由线粒体转位至细胞核。这表明仅仅是线粒体外膜成为有通透性的蛋白。AIF由线粒体至细胞核的再分配，可以被BCL一2阻止，BCL一2特异性地保护线粒体膜稳定性，从而阻止AIF由线粒体转位至细胞核。CASPASE的广谱抑制物N一苄氧羰基一缬氨酸一丙氨酸一门冬氨酰氟甲基酮NBENZYLOXYCARBONYLVALALAASPFLUOROMETHYLKETONE，ZVAD．FMK不能阻止AIF的转位。ATP的过度消耗可以引起AIF转位至细胞核，神经酰胺加速AIF的转位。3．3线粒体释放线粒体释放SMACSMAC／DIABLODIABLOSMACSMACTHESECONDMITOCHONDRIADERIVEDACTIVATOROFCASPASE又称为DIABLODIRECTIAPBINDINGPROTEIN，是一种线粒体蛋白，能够促进细胞凋亡，它通过拮抗或中和一种或几种凋亡抑制蛋白IAP家族成员而发挥其促凋亡作用¨0|。当细胞受到紫外线或1一射线照射时，SMAC／DIABLO由线粒体进入细胞质，SMAC／DIABLO的这种位移可被BCL一2抑制。可见，BCL一2除了通过抑制细胞色素C的释放来抑制凋亡以外，还可以通过抑制SMAC／DIABLO的位移而抑制凋亡。SMAC／DIABLO由线粒体移位至细胞质，依赖于细胞色素C的释放，即首先细胞色素C从线粒体释放至细胞质。然后SMAC／DIABLO才从线粒体释放，发生位移。与细胞色素

简介：第一章1细胞生物学在生命科学中所处的地位，以及它与其他学科的关系1）地位以细胞作为生命活动的基本单位，探索生命活动规律，核心问题是将遗传与发育在细胞水平上的结合。2）关系应用现代物理学与化学的技术成就和分子生物学的概念与方法，研究生命现象及其规律。1．根据细胞生物学研究的内容与你所掌握的生命科学知识，客观、恰当地评价细胞生物学在生命科学中所处的地位，以及它与其他学科的关系。答细胞生物学是一门从细胞的显微结构、超微结构和分子结构的各级水平研究细胞的结构与功能的关系，从而探索细胞生长、发育、分化、繁殖、遗传、变异、代谢、衰亡及进化等各种生命现象规律的科学。生命体是多层次、非线性、多侧面的复杂结构体系，而细胞是生命体的结构与生命活动的基本单位，有了细胞才有完整的生命，一切生命现象的奥秘都要从细胞中寻找答案。许多高等学校在生命科学的教学中，将细胞生物学确定为基础课程。细胞生物学、分子生物学、神经生物学和生态学并列为生命科学的四大基础学科。细胞生物学与其他学科之间的交叉渗透日益明显。2．通过学习细胞学发展简史，你如何认识细胞学说的重要性答18381839年，德国植物学家施莱登和德国动物学家施旺提出一切动植物都由细胞发育而来，并由细胞和细胞产物所构成；每个细胞作为相对独立的单位，但也与其他细胞相互影响。1858年VIRCHOW对细胞学说做了重要的补充，强调细胞只能来自细胞。细胞学说的提出对于生物科学的发展具有重大意义。细胞学说、进化论、孟德尔遗传学称为现代生物学的三大基石，而细胞学说又是后二者的基石。对细胞结构的了解是生物科学和医学分支进一步发展所不可缺少的。3．试简明扼要地分析细胞生物学学科形成的客观条件，以及它今后发展的主要趋势。答（1）细胞生物学学科形成的客观条件细胞的发现（16651674）1665年，胡克发表了显微图谱（MICROGRAPHIA）一书，描述了用自制的显微镜（30倍）观察栎树软木塞切片时发现其中有许多小室，状如蜂窝，称为“CELLAR”。1674年，荷兰布商列文虎克自制了高倍显微镜（300倍左右），观察到血细胞、池塘水滴中的原生动物、人类和其他哺乳动物的精子。细胞学说的建立（18381858）18381839年，德国植物学家施莱登和德国动物学家施旺两人共同提出细胞学说，1858年VIRCHOW对细胞学说进行了补充。细胞学的经典时期各种主要的细胞分裂形式和细胞器被相继发现，构成了细胞学的经典时期。（2）细胞生物学与分子生物学包括分子遗传学与生物化学相互渗透与交融是总的发展趋势。4当前细胞生物学研究的热点课题中你最感兴趣的是哪些为什么染色体DNA与非组蛋白的相互作用关系细胞增殖、分化、凋亡的相互关系及其调控细胞信号转导研究细胞结构体系的装配第二章RNA在核中合成和加工蛋白质在细胞质中合成细胞分裂二分或出芽有丝分裂或减数分裂内膜无独立的内膜有,分化成细胞器细胞骨架无普遍存在呼吸作用和光合作用酶的分部质膜线粒体和叶绿体（植物）核糖体70S（50S＋30S）80S（60S＋40S）5细胞的结构与功能相关是细胞生物学的一个基本原则，你能否提出更多的论据来说明之答成熟红细胞丧失了细胞核，却含有很多血红蛋白，细胞呈双面凹的圆饼状，它不需分裂﹑分化，所以可以无细胞核；血红蛋白多及其圆饼状形状（相对表面积大，有助于物质交换）能更好地执行气体交换功能。第三章1举例说明电子显微镜技术与细胞分子生物学技术的结合在现代细胞生物学研究中的应用。超薄切片技术（固定包埋切片染色）一般用于细胞超微结构观察负染色技术观察亚细胞结构，甚至病毒，具有一定的背景清除效果冷冻蚀刻技术形成断面，便于观察胞质中的细胞骨架纤维及其结合蛋白电镜三维重构技术前提是能形成蛋白质衍射晶体易构建三维结构扫描电镜技术通常在观察前镀一层金膜，立体感强但局限于观察物体表面应用举例见基因的分子生物学2光学显微镜技术有哪些新发展它们各有哪些突出优点为什么电子显微镜不能完全代替光学显微镜相差微分干涉显微镜技术观察活细胞成为可能，增加的光程差使图像立体感更强荧光显微技术其特异性检测所需的观察物质，能排除其他环境干扰，精确定位激光扫描共焦显微镜技术改变纵向分辨率，不同切面构成的图像，经叠加形成三维结构荧光共振能量转移技术主要用于观测两种蛋白是否直接作用及作用的强弱不可取代的原因观察非超微结构的需要，观察活细胞及其正常生理反应的需要，对一般

简介：目录索引目录索引第一章第一章细胞生物学概述细胞生物学概述第二章第二章细胞概述细胞概述第三章第三章细胞的分子基础细胞的分子基础第四章第四章细胞膜细胞膜第五章第五章细胞连接与细胞外基质细胞连接与细胞外基质第六章第六章内膜系统内膜系统第七章第七章线粒体线粒体第八章第八章核糖体核糖体第九章第九章细胞骨架细胞骨架第十章第十章细胞核细胞核第十一章第十一章细胞的分裂细胞的分裂第十二章第十二章细胞周期细胞周期第十三章第十三章细胞分化细胞分化第十四章第十四章细胞的衰老和死亡细胞的衰老和死亡第十五章第十五章个体发育中的细胞个体发育中的细胞附录附录名词解释名词解释第二节第二节原核细胞和真核细胞原核细胞和真核细胞原核细胞与真核细胞的比较特征原核细胞真核细胞细胞大小较小，1ΜM～10ΜM较大，10ΜM～100ΜM细胞核根本区别）无核膜、核仁（拟核）有核膜、核仁（真核）DNA环状双链，不与组蛋白结合线状双链，与组蛋白结合成染色质细胞壁不含纤维素、主要由肽聚糖组成不含肽聚糖，主要由纤维素组成细胞器无（除核糖体外）有核糖体70S80S内膜系统无复杂细胞骨架无有转录与翻译转录与翻译同时进行转录在核内，翻译在胞质中进行细胞分裂无丝分裂有丝分裂，减数分裂第三章第三章细胞的分子基础细胞的分子基础概述1．原生质细胞中的生命物质，由细胞质（包括质膜）和细胞核组成。2．元素组成主要元素CHON4种少量元素SPNAKCACLMGFE8种微量元素CUZNMNCOIBRFSISRBA10种3．分子组成无机化合物水、无机盐有机化合物糖、脂、维生素、蛋白质（酶）、核酸。细胞的小分子物质细胞的小分子物质一、水水是细胞内最重要的无机小分子，占细胞总重量的70。大多数代谢过程都需要水参与。二、无机盐占细胞总重量的19左右，以离子形式存在。维持细胞内的渗透压和酸碱平衡。作为酶的辅助因子。三、有机小分子是细胞代谢过程中的中间产物，也是构成生物大分子的基本单位。主要包括单糖、脂肪酸、氨基酸、核苷酸。单糖脂肪酸功能1、构成细胞膜的主要成分。2、能量

简介：智慧树知到医学细胞生物学章节测试答案第一章1、构成生物体的基本结构和功能单位是。A细胞膜B细胞器C细胞核D细胞E细胞质正确答案细胞2、医学细胞生物学的研究对象是（）。A生物体细胞B人体细胞C人体组织D人体器官E人体系统正确答案人体细胞3、（）为细胞超微结构的认识奠定了良好的基础。A组织培养技术B高速离心装置C光学显微镜的应用D电子显微镜的应用E免疫标记技术正确答案氨基酸2、DNA分子是由（）组成的。A磷酸B核糖C脱氧核糖D碱基E己糖正确答案磷酸,脱氧核糖,碱基3、关于细胞中无机盐的功能，描述有误的是（）。A是细胞含量最多的物质B维持细胞内外渗透压C维持细胞酸碱平衡D是细胞的主要能量来源E不能与蛋白质结合正确答案是细胞含量最多的物质,是细胞的主要能量来源,不能与蛋白质结合4、关于细胞大小和形态，描述正确的是（）。A人体最大的细胞是卵细胞B人卵细胞是已知最大的细胞C不同种类的细胞，其大小有差异D细胞的大小形态与细胞的功能有关E真核细胞一般比原核细胞大正确答案人体最大的细胞是卵细胞,不同种类的细胞，其大小有差异,细胞的大小形态与细胞的功能有关,真核细胞一般比原核细胞大

简介：21春学期（1709、1803、1809、1903、1909、2003、2009、2103）细胞生物学在线作业试卷总分100得分100一、单选题共25道试题,共50分1下列（）不属于真核生物基因表达调控的范畴。A复制水平的调控B转录水平的调控CRNA加工水平的调控D翻译水平的调控答案A2在下列细胞结构中不存在CA2ATPASE的是（）。A线粒体膜B内质网膜C细胞膜D核膜答案D3动物细胞中CAMP的主要生物学功能是活化（）。A蛋白激酶CB蛋白激酶AC蛋白激酶KDCA2激酶答案A4正常细胞培养的培养基中常需加入血清，主要是因为血清中含有（）。A氨基酸B核酸C生长因子D维生素答案C5下面有关核仁的描述错误的是（）。A核仁的主要功能之一是参与核糖体的生物合成BRDNA定位于核仁区内C细胞在M期末和S期重新组织核仁D细胞在G2期，核仁消失答案D6下列没有细胞壁的细胞是（）A支原体B细菌C蓝藻D植物细胞13细胞学的经典时期是指（）。A1665年以后的25年B18381858细胞学说的建立C19世纪的最后25年D20世纪50年代电子显微镜的发明答案C14在下列激酶中，除（）外，都能使靶蛋白的丝氨酸或苏氨酸磷酸化。A酪氨酸蛋白激酶B蛋白激酶KC蛋白激酶CD都不对答案A15在第一次减数分裂中（）。A同源染色体不分离B着丝粒不分离C染色单体分离D不出现交叉答案B16在英国引起疯牛病的病原体是（）。A朊病毒（PRION）B病毒（VIRUS）C立克次体D支原体答案A17关于细胞周期限制点的表述，错误的是（）。A限制点对正常细胞周期运转并不是必需的B它的作用是细胞遇到环境压力或DNA受到损伤时使细胞周期停止的“刹车“作用，对细胞进入下一期之前进行“检查”。C细胞周期有四个限制点G1/S、S/G2、G2/M和M/G1限制点D最重要的是G1/S限制点答案A18下列由奢侈基因编码的蛋白是（）。A肌动蛋白B膜蛋白C组蛋白D血红蛋白答案D19目前认为支原体是最小的细胞，其直径约为（）

简介：细胞生物学细胞生物学以细胞为研究对象，应用近代物理学、化学、实验生物学及分子生物学的技术和方法，从细胞整体水平、亚显微水平和分子水平三个层面来研究细胞的结构及其生命活动规律的科学。医学细胞生物学医学细胞生物学以细胞生物学和分子生物学为基础，研究和探讨人体细胞的结构、功能、发生、发展、成长、衰老、死亡的生命活动规律及其发病机理和防治的科学。膜内在蛋白膜内在蛋白又称膜整合蛋白质或镶嵌蛋白。占膜蛋白总量的7080，其部分镶嵌于膜中，以非极性氨基酸与脂双层膜脂疏水区共价紧密结合，不易从膜上分离下来，跨膜蛋白也属此列。膜外在蛋白膜外在蛋白他们不直接与脂双层疏水部分直接相连，而通过静电作用、离子键、氢键与脂分子极性头部或膜整合蛋白质分子亲水部分相互作用间接结合。主要分布在膜的内在表面，为水溶性蛋白质。细胞外被细胞外被存在于细胞表面的覆盖物，富含糖类，也称糖萼。一般指与质膜相连的糖类物质，是质膜中糖蛋白和糖脂向外延伸的寡糖部分。脂筏模型脂筏模型脂筏是指质膜外层富含胆固醇和鞘磷脂，富集而形成有序脂相的微结构域，是一种动态结构。脂筏像一个蛋白质停泊的平台，其上载有蛋白质，与膜信号转到有密切关系。①许多蛋白质聚集于脂筏，便于相互作用②脂筏提供蛋白质一个有利于构象变化的环境，形成有效构象。通道蛋白通道蛋白由A螺旋构成的介导被动运输的跨膜蛋白，其形成亲水G蛋白蛋白一种鸟嘌呤核苷酸结合蛋白，是由Α、Β、Γ三个亚基组成的异三聚体的可溶性的膜蛋白。是一种具有GTP酶活性，在细胞信号通路中起信号转换器或分子开关作用的蛋白质NONO信号信号NO合成酶NOS催化精氨酸生成NO和瓜氨酸的信号。NOS活性受CA2/钙调蛋白调控。NO是脂溶性的，血管内皮细胞和神经细胞是NO主要生成细胞。NO功能,激活可溶性GC，刺激CGMP合成，引发多种生物学效应。受体酪氨酸蛋白激酶受体酪氨酸蛋白激酶本身具有激酶活性，是单次跨膜蛋白，配体与受体结合导致受体二聚化，二聚体内彼此相互磷酸化胞内断落氨酸残基。内膜系统内膜系统指位于细胞质内在结构、功能、乃至发生上相联系的膜性细胞结构的总称。包括内质网，高尔基复合体，溶酶体等细胞器和胞质内膜性转运小泡。信号肽信号肽指新合成的蛋白质端带有的由1530个疏水氨基酸组成的肽段，能被SRP识别并引导蛋白质在合成过程中转移至内质网膜上，最后被信号肽酶水解。蛋白质糖基化蛋白质糖基化指单糖或寡糖与蛋白质共价结合成糖蛋白的过程。包括N连接的糖基化和O连接的糖基化。起始转移序列起始转移序列位于多肽链内的一段疏水区段，具有与N端信号肽同样的功能，只是不能被信号肽酶切除，从而成为膜蛋白的Α螺旋跨膜结构。终止转移序列终止转移序列肽链上的一段特殊序列，与内质网膜的亲和力很

简介：国外医学输血及血液学分册2004年第27卷第5期NK细胞的免疫生物学特性王荷花综述韩明哲审校【摘要】人类NK细胞是机体抗肿瘤和抗病毒感染的天然免疫细胞，有自发的细胞毒功能，近1O年来人们发现NK细胞的识别也具有特异性。NK细胞表达多种受体，按受体识别的分子可分为HLAI类分子特异性受体、非HLAI类分子特异性受体和共受体三大类，功能上划分为活化性受体和抑制性受体两类，这些受体对NK细胞的功能有重要的调节作用。本文就NK细胞受体的特点和功能作一综述，并探讨开发NK细胞新型潜在细胞免疫治疗的价值。【关键词】自然杀伤细胞；受体；细胞免疫治疗人类NK细胞由骨髓造血干细胞发育而来，约占外周血淋巴细胞的10～15，免疫表型特点为CD3一CD56，因细胞胞体大、胞浆量多、电镜下观察胞内含有致密颗粒，故又称为大颗粒淋巴细胞。NK细胞的发育成熟非胸腺依赖性，也无抗原特异性受体的表达，因此最初被认为是一种天然免疫细胞，具有天然的和淋巴细胞因子活化的细胞毒活性、分泌有免疫调节功能的细胞因子以及抗体依赖性细胞介导的细胞毒活性。早期人们发现NK细胞杀伤的靶细胞常有HLAI类分子表达水平的下调I1，另外NK细胞也能介导排斥同种异体的正常骨髓细胞_2。近来随着NK细胞受作者单位300020天津，中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院433综述体的不断发现及其对NK细胞功能调节的研究，使人们认识到NK细胞识别功能的特异性，有利于开发新的细胞免疫治疗。1NK细胞受体NK细胞表达多种不同的受体，按其识别的配体可分为三大类3HLAI类分子特异性受体、非HLAI类分子特异性受体和其他受体，根据受体的结构特点又可划分为免疫球蛋白样超家族受体和C型凝集素超家族受体两大家族I4。1．1HLAI类分子特异性受体这一大类受体识别的配体是HLAI类分子，它包括免疫球蛋白样超家族受体杀伤细胞免疫球蛋白样受体KILLERCELLIMMUNOGLOBULINLIKERECEPTORS，KIR23DRUKERBJ。SAWYERSCL，KANTARJIANH，ETA1．ACTIVITYOFASPECI．CINHIBITOROFTHEBETABLTYROSINEKINASEINTHEBLASTCRISISOFCHRONICMYELOIDLEUKEMIAANDACUTELYMPHOBLASTICLEUKEMIAWITHTHEPHILADELPHIACHROMOSOME．NENGLJMED，2001，34410381042．24KANTARJIANH，SAWYERSC，HOCHHAUSA，ETA1．HEMATOLOGICANDCYTOGENETICRESPONSESTOIMATINIBMESYLATEINCHRONICMYELOGENOUSLEUKEMIA．NENGLJMED，2002，346645652．25TALPAZM，SILVERRT，DRUKERBJ，ETA1．IMATINIBINDUCESDURABLEHEMATOLOGICANDCYTOGENETICRESPONSESINPATIENTSWITHACCELERATEDPHASECHRONICMYELOIDLEUKEMIA；RESULTSOFAPHASE2STUDY．BLOOD，2002，9919281937．26SAWYERSCL。HOCHHAUSA，FELDMANE。ETA1．IMATINIBINDUCESHEMATOLOGICANDCYTOGENETICRESPONSESINPATIENTSWITHCHRONICMYELOIDLEUKEMIAINMYELOIDBLASTCRISISRESULTSOFAPHASE1STUDY．BLOOD，2002，9935303539．27KANTARJIANHJORGEC，O’BRIENS，ETA1．HIGHRATESOFEARLYMAJORANDCOMPLETECYTOGENETICRESPONSESWITHIMATINIBMESYLATETHERAPYGIVENAT400MGOR800MGORALLYDAILYINPATIENTSWITHNEWLYDIAGNOSEDPHILADELPHIACHROMOSOMEPOSITIVECHRONICMYELOIDLEUKEMIAINCHRONICPHASE．PROCAMSOCCLINONCO1．2002。21261AABSTR．28DRUKERBJ，FORTHEIRISINTERNATIONALRANDOMIZEDIFNVS．STI571STUDYGROUPSTI571GLEEVEC／GLIVECIMATINIBVERSUSINTERFERONIFN一CYTARABINEASINITIALTHERAPYFORPATIENTSWITHCMLRESULTSOFARANDOMIZEDSTUDY．PROCAMSOCCLIN0NC。2002，21LAABSTR．29DRUKERBJ。SAWYERSCL，CAPDEVILLER，ETA1．CHRONICMYELOGENOUSLEUKEMIA．HEMATOLOGY，AMSOCHEMATOLEDUCPROGRAM2001，87112．3O0’BRIENSG，VALLANCESE，CRADDOCKC．ETA1．PEGINTRONANDST1571COMBINATIONEVALUATIONSTUDYPISCESINCHRONICPHASECHRONICMYELOIDLEUKAEMIA．BLOOD，2001。98846ASUPPL1，ABSTR．31DRUKERB，KANTARJIANH，TALPAZM，ETA1．APHASEISTUDYOFTHECOMBINATIONOFGLEEVECIMATINIBMESYLATEWITHLOWDOSEARAC．BLOOD，2001，98845ASUPPL1，ABSTR．32BRIANJ．DRUKER．IMATINIBALONEANDINCOMBINATIONFORCHRONIEMYELOIDLEUKEMIA．SEMINARSINHEMATOLOGY，2003，4015058．收稿日期2004一O4一O1本文编辑罗幼平IL￡}}维普资讯HTTP//WWWCQVIPCOM国外医学输血及血液学分册2004年第27卷第5期HLAI类分子特异性活化性受体KIR和CD94／NKG2C、E、H的结构共同点是受体胞质尾短，无ITIM基序，受体活化信号的转导需DAP12_1。DAP12胞质尾含有由YXXL／I氨基酸序列组成的2个ITAMIMMUNORECEPTORTYROSINEACTINGMOTIF基序。NK细胞活化性受体的集结导致YXXL序列中酪氨酸快速而短暂的磷酸化，随后募集并活化蛋白酪氨酸激酶SYK或ZAP70转导活化信号，使NK细胞活化。虽然NCR目前尚未明确配体，但与单克隆抗作用的研究发现其信号转导类似于上述途径，其中NKP46和NKP30的信号转导通过含经典ITAM的信号转导肽CD3链，NKP44则与DAP12结合。NKG2D活化信号的转导由DAP10介导，与DAP12不同，DAP10分子胞质尾无ITAM结构，但含有一个YXXM氨基酸序列，其酪氨酸磷酸化后与PI一3亚单位P85结合，启动活化信号的转导口。因此，NKG2D活化信号的转导途径完全不同于NK细胞HLAI类分子特异性活化性受体。3NK细胞功能的调节很显然，NK细胞的功能受其表达的抑制性受体和活化性受体转导的负性信号和活化信号之间平衡机制调节。NK细胞表达的受体中，HLAI类分子特异的抑制性受体转导抑制NK细胞活化的负性信号，NCR、NKG2D和HLAI类分子特异的活化性受体转导活化信号，共受体则协同NK细胞功能的活化。对同一NK细胞表达的HIAI类分子特异性受体而言，虽然识别相同或相似HIAI类分子的KIR和CD94／NKG2抑制性受体和活化性受体都能与相应的配体结合，但通常抑制性受体与HLAI类分子结合的亲和力显著高于活化性受体N。另外，仅少数NK细胞克隆同时表达识别相同HLAI类分子同种型的活化性受体和抑制性受体，通常大多数NK细胞克隆表达的是不同HLA1分子同种型的抑制性受体。所以，在正常情况下，NK细胞的抑制性受体与自身正常细胞表达的HLAI类分子结合后，转导抑制该NK细胞活化的负性信号，导致启动NK细胞活化的早期阶段分子失活，从而阻止NK细胞的活化，即NK细胞以转导负性信号占优势。这也就阻止了NK细胞对宿主自身正常细胞的杀伤作用，避免自身免疫反应的发生。病理情况下，当NK细胞识别自身HIAI类分子水平下调或丢失的肿瘤细胞、病原体感染的细胞时，抑制性受体与HIAI类分子作用水平减低或不能与之结合，导致抑制NK细胞活化的信号减弱或缺乏，则启动活化性受体转导的活化信号，使该NK细胞活化，发挥细胞毒功能，裂解靶细胞。若该靶细胞同时表达MLCA／MLCB分子，可激活不同信号转导途径的活化性受体NKG2D，进一步增强NK细胞的活化信号，提高宿主的疾病防御能力。综上所述，NK细胞通过表达多种受体的调节方式，整合抑制性受体和活化性受体转导的负性信号和活化信号，使机体能够区分自身正常细胞和HLA1分子水平下调或丢失的异常细胞，从而阐明了NK细胞免疫监视“丢失自我”MISSINGSELF假说的机制。4NK细胞的免疫治疗应用NK细胞识别“自己”和“非己”的特性，调节NK细胞的活性，可能为免疫治疗提供新的途径。理论上阻断抑制性受体与MHCI类分子的相互作用，解除对NK细胞活化的抑制，能够有效增强NK细胞的抗肿瘤效应。KOH等N实验研究证明，采用单克隆抗体封闭同基因小鼠NK细胞抑制性受体或者过继性MHCI不相合异基因NK细胞净化骨髓和自体骨髓移植后的维持治疗，有效提高了白血病小鼠长期无白血病复发存活率，同时对造血重建无明显影响。这一效应同样能在病毒感染如巨细胞病毒感染时巨细胞病毒能够编码MHCI类分子样类似物以逃逸免疫系统的杀伤发挥作用。在异基因造血干细胞移植中ALLOSCT，供一受者问NK细胞识别的特异性主要指抑制性受体识别的特异性，即两者抑制性受体识别的配体是否相合，另外由于移植预处理的作用使受者NK细胞基本被清除，所以移植后主要存在的是供者NK细胞的同种反应性，即指受者MHCI类基因不编码供者所有NK细胞抑制性受体识别的MHCI类分子。因此，此NK细胞亚群KIR抑制性受体不能与受者MHCI类分子结合，从而阻断抑制信号的转导，有利于供者NK细胞的活化，增强移植后抗残留肿瘤细胞的功能。RUGGERI等发现在白血病患者HLA半相合干细胞移植后，供一受者方向KIR一配体不相合的受者体内可检测到供者同种反应性NK细胞克隆，并证明供一受者方向KIR一配体不相合有利于患者的长期无病生存，同时防止急性移植物抗宿主病GVHD的发生。小鼠移植模型证明供者同种反应性NK细胞不仅能够有效清除残留白血病细胞，而且分别通过进一步清除受者预处理残留的T细胞和抗原递呈细胞，促进植入以及阻止AGVHD。后来GIEBEL等223在白血病患者无关供者造血干细胞移植中也证明供一受者方向KIR表位不相合有助于患者的无病生存，减少Ⅲ～Ⅳ度AGVHD的发生。实际上，同种反应性NK细胞主要攻击受者造血细维普资讯HTTP//WWWCQVIPCOM

简介：午晓群等NKG2D真核表达载体的构建及其对YT细胞生物学功能的影响第L2期分子与细胞免疫学NKG2D真核表达载体的构建及其对YT细胞生物学功能的影响①许晓群张建⑦④张彩游力张建华刘金生王郡甫高春义田志刚⑦山东省医学科学院基础医学研究所，济南250062885中国图书分类号92．12文献标识码A文章编号100X20O5120885．04摘要目的建立NK细胞受体NKG2D真核表达载体，通过转染NK细胞系YT，初步探讨NKG2D分子对YT细胞系杀伤功能的增强作用。方法用RTPCR方法从NK92细胞中调取NKG2D基因片段，克隆到PGEM．TEASY载体并对克隆的DNA片段进行序列分析。用限制内切酶EEORI和BAMHI消化PCEM．TEASY／NKG2D重组质粒，分离NKG2D片段，并插入真核表达质粒PEGFPN1的相应限制酶位点，酶谱分析鉴定重组表达载体PEGFPN1／NKG2D。然后经脂质体介导转染CHO细胞和YT细胞。应用荧光显微镜观测、WESTERNBLOT方法和免疫组化染色对转染细胞内PEGFPNI／NKG2D的表达进行鉴定，MTR方法观察YT细胞对肿瘤细胞的杀伤功能。结果RTPCR扩增获得650BP基因片段，经DNA序列分析证明所获得的DNA序列与文献报道的NKG2D序列一致。转染的CHO细胞在荧光显微镜下发出强绿色荧光，WESTERNBLOT分析显示重组蛋白能特异地与抗人NKG2D单克隆抗体结合；免疫组化检测显示，转染的CHO中有棕色颗粒，证明所构建的NKG2D真核表达载体可以在细胞中表达；转染NKG2D真核表达载体的YT细胞对乳腺癌细胞具有更强的杀伤效果。结论所获得的表达NKG2D分子的真核表达载体，通过转染YT细胞，初步鉴定所表达NKG2D分子具有生物学功能，可以提高NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。关键词NKG2D受体；NK细胞；基因转染；真核表达CONSTRUCTIONOFNKG2DEUKARYOTICEXPRESSIONVECTORANDEFECTONYTCELLBIOLOGICALFUNCTIONXU‰，ZHANGJ／AN，ZHANGCAI，YOU12，ZHANGANHNA，删J／NSHENG，WANGJUNFU，GAOCHUNYI，TIANZHIGANG．INSTITUEOFBASICMEDICINE，SHANDONGACADEMYOFMEDICALSCIENCE，J／NAN250062，CHINAABSTRACTOBJECTIVETOESTABLISHNKCELLRECEPTORNKG2DEUKARYOTICEXPRESSIONVECTORANDINVESTIGATEONTHECYT0CITYOFNKCELLFINYTTRAECTEDWITHNKG2D．METHODSANKG2DGENEFRAGMENT，WITHALENGTH0FABOUT650BP，WASAMPLIFIEDFROMTHENK一92CEILLINEBYRTPCRANDWASSEQUENCEDBYCLONEDTOPNIDPGEMTEASY．THERECOMBINANTPLMIDPCTEASY／NKG2DWASDIGESTEDWITHECOR工ANDBAMH工，THENNKG2DFRAGMENTWASISOLATEDANDINSERTEDINTOTHECORRESPONDINGRESTRICTIONSITEONEUKARYOFIEEXPRESSIONVECTORPEGFPN1．THELIPOFECTINWASUSEDTOTRANSECTMCOMBIMNTEUKARYO6EEXPRESSIONPLASMIDINTOTHECHOANDYRCELLS．THEEXPRESSIONLEVELOFNKG2DGENEINTMECTEDCHOCEILSWASDETECTEDBYFLUORESCENCEMICROSCOPY，WESTERNBLOTANDIMMUNOHISTOEHOMICALSTAINING．RESULTSTHENGTHOFEDNAFRAGMENTAMPLIFIEDBYRTPCRWASCONSISTENTWITHTHAT0FNKG2D．DNASEQUENCING0FPGEMTEASY／NKG2DREVEALEDTHATTHECLONEDDNASQUENCEWASIDENTICALTOTHAT0FREPORTEDNKG2D．THEEENFLUORESCENCECOULDBESEENINTRANSFECTEDCHOCELLSUNDERFLUORESCCNEEMICROSCOPE．WESTERNBLOTANDIMMUNOHISTOCHEMICALSTAI,DETECTIONSHOWEDTHATNKG2DEXPRESSEDINTRANSFECTEDCELLS．TRANSFECTEDYTCELLSHAVESTRONGEREYTOTOXICITYAGAINSTTUMORCEIL．CONDUSIONNKG2DEUKARYOAEEXPRESSIONVECTORSHOWEDBIOLOGICALFUNCTIONBYTRANSFEETEDINTONKCEILLINEYTANDCOULDINCREASEYTCYTOLYFIEACTIVITY．KEYWORDSNKG2DRECEPTOR；NKCEIL；GENETRANSFECFION；EUKARYOFICEXPRESSIONNKG2D是近年来发现的表达于NK细胞、NKT细胞、7KI细胞及CD8细胞等效应细胞表面的NK细胞受体，是NK细胞识别靶细胞的一种主要结构“。由于肿瘤细胞不表达或低表达MHC．I①本文受国家自然科学基金项目30371302、3047152和山东省自然科学基金资助项目YMCZ4资助②山东大学药学院，济南250012③通讯作者作者简介许晓群1975年一，男，硕士，助理研究员，主要从事基因工程和分子免疫学研究。类分子，使得肿瘤特异性MHC限制性细胞毒性T细胞CTL不能发挥作用。在这种情况下，识别非MHC．I类分子的NKG2D在介导NK细胞识别并溶解肿瘤细胞及感染细胞的免疫应答中可能发挥关键作用L2】。近年来，对于NK细胞的分化发育、识别杀伤和功能调节的分子机制的研究日益引起重视。我们旨在构建NKG2D基因的真核表达载体并转染NK细胞系，为进一步研究NKG2D如何在NK细胞中发挥效应功能及其肿瘤生物治疗的应用提供一种研究工具。维普资讯HTTP//WWWCQVIPCOM午晓群等NKG2D真核表达载体的构建及其对YR细胞生物学功能的影响第12期ECORLBAMHLIECORLIBAMHLECORI_PG．FPNN／NKG2D535BPIFEGFP／KANNEOR／／HIE．1⋯1D川R图1重组质粒PEGFP．N1／NKG2D构建示意图№．1SCHEMATICCONSTRUCTIONOFPLASMIDPEGFPN1／NKG2D图2重组质粒PEGFPN1／NKG2D的酶切鉴定№．2RESTRICTIVEENZYMEDIGESTIONANALYSISOFRECOMBINANTPLASMIDPEGFP．N1／NKG2DNOTE1．NKG2DGENEFR,TNONT；2．PEGFPNI／NKG2DDIGESTEDWITHECORIANDBANLHI3．PCEM．TEASY／NKG2DDIGESTEDTHECORIANDBAMHI；4．1KBDNAMARKER．图3GFP在CHO中的表达200№．3EXPRESSIONOFGFPINCHOS200NOTECHOSTRANSFECTEDBYPEGFPNI／NKG2DAFTER24HOURS．KDA6050402520一L5一88728图4WESTERNBLOT鉴定NKG2D重组蛋白№．4ANALYSISOFRECOMBINANTPROTEINNKG2DBYWESTERNBLOTNOTE1．PRESTAINEDPROTEINLADDER；2．NONTRANDECTEDCHOS；3．CHOSTLDBFTEDBYPEGFPNI／NKG2D．AB图5免疫组化染色检测NKG2D在CHO中表达200№．5DETECTIONOFNKG2DEXPRESSIONINCHOSBYILI,DNUNOHISTOCHEMICALSTALG200NOTEA．CHOTRANSFECTEDBYEMPTYPLASMID；B．CHOTRANDECTEDBYPEG}3NI／NKG2D．图6NKG2D对YT细胞杀伤OMDA231乳腺癌细胞的影响№．6INFLUENCEOFNKG2DONYT曲AGAINSTOMDA231CELLS2．3NKG2D真核表达载体转染的CHO细胞中NKG2D表达水平的鉴定①绿色荧光鉴定将重组质粒PEGFPN1／NKG2D转染CHO细胞继续培养24、．旌一譬鬻辨。踟∞鲫加加一O／0一鲁I3L蓉；U维普资讯HTTP//WWWCQVIPCOM