家蚕核型多角体病毒Bmorf60基因的功能分析.pdf

1、杆状病毒已经在世界上广泛地应用于生物杀虫剂,并且作为载体在昆虫细胞以及虫体上表达了许多外源基因。目前,家蚕核型多角体病毒Bombyx morinucleopolyherovirus(BmNPV)已经成功地在表面展示系统上得到了应用。此外,杆状病毒在基因治疗上具有很大的潜在应用价值。这些应用使得杆状病毒感染的分子机理具有重大的研究意义。BmNPV的全基因组序列的测定,为单个基因功能研究的广泛开展提供了基础。Bmorf60是杆状病毒特有的基

2、因,但其功能还不清楚。本文中对Bmorf6D基因的功能开展了初步研究。
　　 1.序列搜索分析发现,Bmorf60的同源基因存在于所有的groupⅠ和部分groupⅡ核型多角体病毒基因组中,但在双翅目、膜翅目核型多角体病毒和颗粒体病毒基因组中不存在。groupⅠ病毒Autographa californica multiplenucleopolyhedrovirus(AcMNPV)orf74是Bmorf60的同源基因。该基因表达

3、的产物是包涵体源病毒(occlusion-derived virus,ODV)粒子的一个结构蛋白。groupⅡ病毒Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus(HaNPV)ory68是Bmorf60的另一个同源基因。但是,orf68表达的产物却不是HaNPV ODV粒子的结构蛋白。这些研究结果表明,Bmorf60在BmNPV生活周期中可能起着特殊的生物学功能。
　　 2.在含有BmNPV b

4、acmid的大肠杆菌E.coli中,得到了Bmorf60敲除的bacmid病毒。Bmorf60基因敲除的bacmid感染细胞后,与野生型bacmid相比,BV产量大幅下降,接着,将Bmorf60基因补回到相对应的区域得到拯救bacmid,BV产量得到恢复。用vBm60-null,vBm-wt和vBm60-repair转染BmN细胞不同时间点的荧光显微观察,结果显示vBm60-null比vBm-wt和vBm60-repair在BmN细胞中