家蚕核型多角体病毒(BmNPV)lef-12基因的功能分析.pdf

1、晚期表达因子12(lateexpressionfactor12，LEF-12)是昆虫核型多角体病毒(nuclearpolyhedrosisvirus，NPV)基因组中普遍存在的转录调控因子。研究结果表明LEF-12可影响病毒基因的表达，但其在家蚕核型多角体病毒(BmNPV)基因组中的功能还不清楚。为了研究LEF-12的生物学功能，我们通过Red重组技术敲除了BmNPV的lef-12基因，构建了lef-12缺失型病毒lef12-ko-Ba

2、cmid，再利用Bac-to-Bac系统将lef-12基因补回到病毒基因组中，构建了补回型病毒lef12-re-Bacmid。然后将野生型病毒wtBacmid、lef12-ko-Bacmid和lef12-re-BacmidDNA分别转染家蚕BmN细胞，发现三种病毒转染的细胞内均可产生具有感染活性的病毒粒子，但是病毒滴度测定结果显示lef12-ko-Bacmid的病毒产量比wtBacmid下降了3倍左右，而lef12-re-Bacmid基

3、本上恢复到了野生型病毒的水平，表明lef-12基因的缺失可能会延缓病毒的发病时间。此外，我们进一步研究了lef-12基因敲除对病毒基因组的复制和病毒基因转录的影响。结果发现lef-12基因缺失后，BmNPVDNA复制没有受到明显影响，说明lef-12不是病毒基因组复制的必需基因;对病毒早期基因lef-3的转录水平也没有明显变化，但病毒晚期基因vp39和极晚期基因p10的转录水平均明显低于野生型和补回型病毒(p＜0.05)。晚期蛋白VP3