26099.家蚕核型多角体病毒多角体单克隆抗体的制备与鉴定_第1页
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1、江苏大学硕士学位论文家蚕核型多角体病毒多角体单克隆抗体的制备与鉴定姓名：倪爱民申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：王文兵20100607江苏大学硕士学位论文ABSTRACTObjectives：Toprepare、screenandidentifythemonoclonalantibodies(McAb)againstBombyxmoriNuclearpolyhedrosisvirus(BmNPV)Polyhedrin

2、(Polh)andtoprovidetheeffectiveantibodiesfortheadvancestudyofBmNPVMethods：Inthestudy，theBmNPVPolyhedrinparticleswerepurifiedbydifferentialcentrifugationThen，BaLb／cmicewereimmunizedwiththepurifiedPolyhedrinparticleswhichwe

3、renotfullyemulsifiedwithFreund’SadjuvantThespleencellsofimmunizedBaLb／cmicewerefusedwithSP2|0cellsusingPEG一4000ThehybridomacellsecretingMcAbagainstBmNPVPolyhedrinwerescreenedbyindirectELISAPositiveclonesweresubclonedbyli

4、miteddilutionandoneclonewerescreenedoutandnamedasD7ThecharacteristicsoftheMcAbwereidentifiedbyChromosomeStabilityAssayofHybridoma，IsotypeIdentificationofMcAb，ELISA，WesternBlottingandSOonResults：Duringfourmonths，thehybird

5、omacellcallstablysecreteMcAbofBmNPVPolyhedrinafterserialpassagesandthreetimesfreezingandrevivalThechromosomeofhybridomacelllinessecretingMcAbWascountedandfoundthatthenumberis99“108，andchromosomesofthemyelomacelllineonlyi

6、stheaverageof55，thisdemonstratethathybridomacelllinesobtainedonthegeneticpointAftersubtypeidentificationofMcAb，displayedD7belongstoIgG2asubclassandkappatypeTheMcAbELISAtitersfromasciteswere1：1061：107westernblottinganalys

7、isshowedthattheMcAbspecificallyreactedwiththepeptidesofBmNPVPolyhedrinTheMcAbshowednoCROSSreactivitytoAcNPVPolyhedrin、ClbiNPVPolyhedrinandEoNPVPolyhedrin，butcrossreactivitytoApNPVPolyhedrinandPCrNPVPolyhedrinAnotheraseri

8、esofrecombinants‘‘BacmidPolyhedrinfragmentEGFP’’havebeensuccessfullyconstructed，layingthefoundationforidentificationoftheepitopesoftheMcAbConclusions：AhybridomacellstrainwhichCansecretemonoclonalantibodyagainstBmNPVPolyh

9、edrinWasgeneratedbyusingcellfusiontechnologyTheMcAbWasdevelopedandit’ScharacteristicsWasidentifiedThepreparationoftheMcAbofBmNPVPolyhedrinCanprovideafoundationforthevirusresearch，abasisfordevelopmentrapiddiagnosticordete

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