家蚕核型多角体病毒BmNPV orf90基因的功能研究.pdf

1、家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus,BmNPV）是核型多角体病毒属的典型代表，近年来，对BmNPV基因功能的探索从未停止，但仍有很多基因的功能未知。BmNPV orf90（Bm90）基因是BmNPV基因组中一个未知功能的保守基因，本文以Bm90基因为研究对象，深入研究该基因在整个病毒感染周期中对病毒复制、转录及组装等方面的影响。
　　利用λRed重组系统和Bac-to-Bac系统构

2、建带有多角体基因（polh）和增强型绿色荧光蛋白基因（egfp）的野生型病毒WtBacmid-polh-egfp、Bm90基因缺失型病毒Bm90ko-polh-egfp-Bacmid及 Bm90基因回补型病毒Bm90re-polh-egfp-Bacmid。将3种重组病毒分别转染家蚕卵巢细胞BmN，病毒滴度测定发现Bm90基因缺失型病毒的滴度值为零，即Bm90基因缺失使病毒失去了产生侵染性子代病毒粒子的能力。收集转染重组病毒48 h后的B

3、mN细胞进行透射电镜观察，进而分析Bm90基因缺失对子代病毒粒子组装的影响，电镜观察结果发现在野生型和回补型病毒转染的BmN细胞中存在大量的子代病毒粒子及病毒发生基质，而Bm90基因缺失型病毒转染的BmN细胞中没有子代病毒粒子及其他典型的杆状病毒感染症状出现，表明Bm90基因是子代病毒粒子组装的必需基因。qPCR分析结果发现野生型与回补型病毒的复制水平在12 h到96 h不断增加且两者差异不显著；而Bm90基因缺失型病毒的复制水平在12

4、 h到48 h不断增加，与野生型和回补型病毒复制水平相当，但48 h后Bm90基因缺失型病毒复制水平保持不变且显著低于野生型和回补型病毒的复制水平（P<0.05），表明Bm90基因不是病毒复制的必需基因，但显著影响病毒的复制水平。qRT-PCR分析结果显示Bm90基因的缺失使家蚕核型多角体病毒BmNPV早期基因lef-3、晚期基因vp39和极晚期基因p10的转录水平均具有显著性的下调(P<0.05)，表明Bm90基因在病毒周期中对其他病