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文档简介
1、目的:肺癌是世界上死亡率最高的恶性肿瘤,其中非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌总数85%左右。已有大量文献报道白介素-6(IL-6)是NSCLC中关键的肿瘤促进细胞因子。前期研究发现雌激素主要通过雌激素受体β(ERβ)在NSCLC的进展中起重要促进作用。已有研究证实雌激素与 IL-6信号通路相互作用,协同促进乳腺癌、卵巢癌等雌激素靶器官肿瘤的进展。但在雌激素非靶器官肺癌中雌激素和 IL-6有无相互作用还未见报道,雌激素是否能够调节NSCL
2、C细胞IL-6的分泌还不得而知。本研究首先检测ERβ与IL-6在NSCLC组织中的表达和相关性,然后在体外实验中探讨NSCLC中雌激素对IL-6分泌的调控及其可能的机制,为NSCLC内分泌和免疫治疗策略提供新的理论基础和方向。
方法:本课题分两部分进行研究:
第一部分在人NSCLC组织中检测ERβ和IL-6的表达,分析其表达相关性和共表达与临床病理特征的关系。应用组织芯片技术和免疫组化方法,检测2012年2月-201
3、4年2月我院手术的103例NSCLC肿瘤组织和98例癌旁正常肺组织中 ERβ和 IL-6的表达。应用卡方检验分析 ERβ和 IL-6表达与NSCLC临床病理特征的相关性,用Spearman等级法分析ERβ和IL-6之间表达的相关性。
第二部分在体外实验探讨NSCLC中雌激素通过ERβ对IL-6分泌的影响及其可能的机制:1.NSCLC细胞系A549分别给予不同浓度梯度(1nM,10nM,100nM)17β-雌二醇(17β-est
4、radiol,E2,ER配体)处理,用ELISA法检测细胞培养上清中IL-6的含量,以探讨IL-6分泌是否与雌激素浓度相关;2.将NSCLC细胞系A549分为7组:空白对照(con)组、E2组、PPT(ERα特异性激动剂)组、DPN(ERβ特异性激动剂)组、氟维司群(Fulvestrant,Ful,雌激素抑制剂)组、E2+Ful组、DPN+Ful组,ELISA法检测细胞培养上清中IL-6的含量,Western-blot检测细胞内IL-6
5、表达,以探讨雌激素通过ERβ调节IL-6分泌和表达;3.将NSCLC细胞系A549分为6组处理:空白对照(con)组、E2组、Ful组、E2+Ful组、E2+IL-6组、 E2+Ful+IL-6组,检测细胞增殖(CCK8),以探讨雌激素上调IL-6分泌对细胞增殖能力的影响;4.将NSCLC系A549分为6组处理:con组、E2组、Ful组、E2+Ful组、E2+Ful+MAPK抑制剂(U0126)组、 E2+Ful+PI3K(LY294
6、002)抑制剂组,Western-blot分别检测t/pMAPK、t/pAkt的表达,ELISA法检测细胞培养上清中IL-6的含量,以探讨雌激素上调IL-6分泌的可能机制。
结果:通过组织芯片-免疫组织化学技术检测发现:NSCLC中ERβ表达阳性率为91.3%(94/103),癌旁正常肺组织中ERβ表达阳性率为57.1%(56/98),NSCLC中ERβ显著过表达。在NSCLC中IL-6表达阳性率为89.3%(92/103),
7、癌旁正常肺组织中IL-6表达阳性率为42.9%(42/98);NSCLC中IL-6显著过表达。NSCLC中ERβ1、IL-6共表达阳性率为82.5%(85/103),显著高于癌旁正常肺组织中ERβ、IL-6共表达阳性率22.4%(22/98)。Spearman等级法分析ERβ与IL-6表达有正相关性,尤其在肺鳞癌中ERβ表达与IL-6表达有显著相关性。
在体外实验中发现:1. NSCLC细胞系A549给予不同浓度梯度E2,细胞
8、培养上清中IL-6的含量随E2浓度的增加而增加,E2诱导的促IL-6分泌作用可被其受体阻断剂氟维司群(ful)阻断,提示雌激素能够促进肿瘤细胞分泌IL-6;2.E2、DPN促进细胞内IL-6蛋白的表达和培养液中IL-6分泌,E2+Ful、DPN+Ful组细胞内IL-6表达和上清IL-6分泌较E2、DPN组明显下降,同时发现PPT组IL-6蛋白的表达和培养液中IL-6分泌与对照组无明显差异,提示雌激素通过ERβ调节IL-6分泌和表达;3.
9、细胞增殖的能力在E2组中较对照组明显增强,E2+IL-6组细胞增殖能力较E2组增强,加入Ful后E2的促进增殖作用被抑制,提示雌激素可能通过上调IL-6分泌促进细胞增殖;4. pMAPK、pAkt在E2组表达升高,在E2+Ful、E2+Ful+MAPK抑制剂、 E2+Ful+Akt抑制剂组中下降,同时发现培养液上清中IL-6的含量在E2+Ful、E2+Ful+MAPK抑制剂、 E2+Ful+Akt抑制剂组下降,提示雌激素通过ERβ激活M
10、APK和Akt通路上调IL-6分泌。
结论:在这项研究中发现,ERβ与IL-6在NSCLC组织中存在过表达,ERβ表达与IL-6的表达在NSCLC组织中具有正相关。雌激素能够通过ERβ促进NSCLC细胞IL-6分泌,进而促进NSCLC细胞增殖,其机制可能与激活MAPK和Akt信号通路有关,因此认为ERβ可能通过激活IL-6免疫信号通路而在NSCLC发生发展中发挥重要作用,这可能是雌激素促进NSCLC进展的重要机制之一,更进一步
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