霍乱毒素B亚基乙肝表面抗原中蛋白融合基因在家蚕核型多角体病毒载体系统中的表达研究.pdf

1、现有的乙肝基因工程疫苗(含S抗原)接种后,约10%接种者为免疫无应答者,而使用增加了PreS2抗原的中蛋白疫苗(含S和PreS2抗原)可减少免疫无应答者的出现.霍乱毒素B亚基(CTB)具有很强的免疫原性,能刺激机体产生粘膜IgA和血清IgG抗体.它在免疫佐剂、口服疫苗与多肽疫苗的研究中具有越来越重要的作用.为了获得能够口服吸收的并能引起免疫应答的融合蛋白,该研究利用基因工程方法,将霍乱毒素B亚基乙肝中蛋白融合基因在家蚕杆状病毒载体表达系

2、统中进行了表达.首先将霍乱毒素B亚基与乙肝中蛋白基因的重组到转移载体pBacPAK8,获得含有霍乱毒素B亚基与乙肝中蛋白融合基因的重组转移载体pBacPAK-CTB-HBM,并与已线性化的病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,筛选出重组病毒BacPAK-CTB-HBM.将重组病毒BacPAK-CTB-HBM以10pfu/细胞感染家蚕家蚕培养细胞和幼虫,Western印迹方法表明表达产物大小约为43kD.用ELISA法测定表达产

3、物的抗原性,结果显示:家蚕培养细胞的胞内表达产物具有明显的抗原反应性,重组病毒BacPAK-CTB-HBM感染的家蚕培养细胞第48 h的表达量最高,量约1.61ug/mL;BacPAK-CTB-HBM感染的家蚕蛹血淋巴也具有明显的抗原反应性,第120h的表达量最高,量约15.27ug/mL.将表达产物免疫动物后,用ELISA法测定表达产物的免疫原性,结果显示:在口服初免方式中,连续摄入六周后,停止摄入后四周开始检测抗体.融合蛋白组有60