前体淋巴母细胞淋巴瘤-急性淋巴母细胞白血病发生细胞的研究.pdf

1、目的：通过急性T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat，探讨分离鉴定白血病干细胞的方法；初步探讨分离及鉴定原代前体淋巴母细胞淋巴瘤/急性淋巴细胞白血病干细胞的方法。方法：流式细胞分析方法，检测Jurkat细胞的分子表型；应用CD34免疫磁珠分选CD34+细胞；单克隆培养方法获得CD34-细胞；RT-PCR法分别对CD34+和CD34-单克隆细胞检测CD34基因和肿瘤干细胞相关基因的表达；体外软琼脂克隆和SCID小鼠体内成瘤实验，检测CD34+

2、和CD34-细胞的克隆形成和致瘤能力；流式细胞分选方法，对原代急性淋巴细胞白血病中不同分子表型细胞进行分选及RT-PCR法检测急性淋巴细胞白血病中常见的染色体异位。 结果：Jurkat的细胞表型均符合分化的T淋巴细胞特点；在Jurkat细胞群中可以分出CD34+CD38+CD7+和CD34-CD38+CD7+两群分化程度不同的细胞；体外培养和SCID小鼠体内致瘤实验显示CD34+细胞可通过CD34表达逐渐减弱的方式向CD34-细

3、胞分化，而这一分化过程是不可逆的；CD34+和CD34-克隆细胞在造血干细胞相关基因Wnt1，Bmi1，Lef1，ABCG2和端粒酶逆转录酶基因的表达上没有差异；CD34+和CD34-细胞均可在体外无限增殖，形成单克隆细胞株，软琼脂克隆形成能力无显著差别；CD34+和CD34-细胞在SCID小鼠体内的致瘤能力无差异。 结论：磁珠细胞分选方法可以有效分选阳性表达细胞；Jurkat细胞系中的所有细胞均具有T细胞免疫表型，提示Jurk

4、at细胞系的肿瘤发生细胞应为已定向分化的表型为CD34+CD38+CD7+的T淋巴细胞祖细胞，而非造血干细胞；在Jurkat细胞系中一部分CD34+细胞向CD34-细胞分化，而另一部分则维持CD34的表达，这提示Jurkat中的CD34+细胞具有干细胞特点，即存在自我复制、有限分化和无限增殖的能力，但并不意味着其下游分化的CD34-细胞不具有无限增殖能力和致瘤能力。CD34+向CD34-细胞的转化是一个CD34的表达逐渐减弱的过程。Ju