丹参注射液拮抗腹膜纤维化的大鼠模型及人腹膜间皮细胞的机理研究.pdf

1、目的：通过研究不同浓度丹参制剂对脂多糖致腹膜纤维化大鼠模型及体外培养人腹膜间皮细胞的转化生长因子(TGF-β1)、金属蛋白酶(MMP9)、组织金属蛋白酶抑制剂(FIMP-1)、白介素(IL-6)等表达的影响，探讨丹参注射剂对脂多糖致腹膜纤维化影响的部分作用机理。
　　 方法：动物实验分为正常组、模型组、丹参小剂量组、丹参中剂量组、丹参大剂量组等5组。模型组按脂多糖0.6mg/kg体重分别在实验开始的3、5、7、9天进行腹腔注射；

2、药物组按照丹参的不同浓度(6ml、12ml、24ml)加入每升腹透液中取20ml腹腔注射，每日1次，同时按照脂多糖0.6mg/kg体重分别在实验开始的3、5、7、9天同步进行腹腔注射。饲育28天行PET观察通透性情况，取腹透液、血液理化检查，取腹膜进行免疫组化学检查和扫描电镜进行观察，比较各组间的差异，分析不同浓度丹参的作用。
　　 细胞培养：无菌手术取人大网膜进行消化获取间皮细胞，电镜和免疫组化进行鉴定，培养传代至第三代进行实

3、验。观察细胞活力，药物刺激24小时后培养液上清夜检测指标，包括细胞培养上清相关蛋白及酶的浓度测定，TGF-β1，MMP9、TIMP1免疫组化检测，逆转录链式反应(RT-PCR)检测相关细胞因子的表达，并用透射电镜观察细胞的超微结构。
　　 结果：丹参注射液可以改善腹膜纤维化大鼠的透析效能，但各组比较无显著性差异(P>0.05)；各组问超滤量及钾水平无统计学差异；实验组、模型组2小时腹透液蛋白增加与正常组相比有统计学差异(P<0.

4、05)，但实验组和模型组以及实验各组间没有差异。光镜下模型组，腹膜间皮细胞变为圆形、柱形，间皮细胞有脱落，间皮下基质明显增厚，可见大量成纤维样细胞及单核、巨噬细胞浸润，且有纤维素样物质沉积；丹参低剂量组腹膜纤维结缔组织增生变厚伴有炎细胞浸润；中剂量组较低剂量组纤维增生略重并伴少量炎细胞浸润；大剂量组纤维结缔组织增生不明显，炎细胞浸润较少。电镜下显示间皮细胞脱落，微绒毛脱失，细胞器损伤，丹参中剂量组在维持细胞结构完整，减轻细胞器损伤方面优

5、于其他各组。
　　 免疫组织化学检测TGF-β1、TIMP-1结果显示：丹参中剂量组在各组中表达最弱，与正常组差异不明显，与模型组相比差异有统计学意义；在丹参低剂量和大剂量组表达逐渐增强，与正常组和模型组比较均有统计学意义；与正常组相比，腹膜组织TGF-B1、TIMP-1含量在模型组显著升高，在丹参中剂量组中明显下降，但丹参中剂量组IL-6、MMP9则表达上调，与其他各组相比有统计学意义。
　　 细胞培养：培养的腹膜间皮

6、细胞经高糖干预后，丹参低、中、高组间皮细胞MTT还原能力与正常组比较显著降低(P<0.05)，与模型组比升高明显(P<0.05)；间皮细胞增殖活性丹参中剂量组显著高于丹参低剂量组和丹参高剂量组(P<0.01)。细胞培养液上清液中TGF-β1的含量发生明显变化，模型组与实验组较正常组显著升高(P<0.05)；丹参组低、中、高组显著低于模型组(P<0.05)，丹参组之间比较，丹参中剂量组显著低于丹参高、低剂量组(P<0.05)。FN方面，高

7、糖和脂多糖作用后，与正常组相比，模型组与实验组细胞培养液上清液中FN的含量显著性增加(P<0.05)，丹参高、中、低剂量组分别为与模型组相比无统计学意义(P>0.05)，丹参中剂量组较丹参高、低剂量组相比能明显抑制MC的FN生成(P<0.05)。
　　 结论：丹参注射液可以显著改善脂多糖致大鼠腹膜纤维化后大鼠腹膜的透析效能，有效的抑制致纤维化细胞因子TGF-β1、TIMP-1的表达，上调MMP-9水平，减轻细胞外基质的沉积，对脂