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文档简介
1、首次从构建的家蚕蛹cDNA文库中克隆分析得到一条基因,并将该基因命名为Bm-LOC778477。Bm-LOC778477基因的ORF长为564bp,编码187个氨基酸残基,该蛋白理论分子量和等电点分别为21.26kDa和8.94。Bm-LOC778477基因位于家蚕基因组连续框架Scaffold001541,由3个内含子和4个外显子组成,内含子/外显子切割位点的边界顺序符合Chambon法则。生物信息学分析表明,Bm-LOC778477
2、基因位于W染色体,同时,该基因启动子区含有起始子等核心启动子元件。 构建了pGEX-4T-1-Bm-LOC778477重组质粒,转化于E.coliRosetta((DE3)感受态细胞,IPTG诱导重组菌表达,SDS-PAGE分析表明GST-Bm-LOC778477融合蛋白以包涵体形式存在。包涵体用8M尿素溶解,复性后的蛋白进行亲和层析,凝血酶酶切和再纯化。经质谱鉴定分子量正确的Bm-LOC778477的蛋白免疫新西兰大白兔制备多
3、克隆抗体,多克隆抗体经ProteinA柱纯化,间接ELISA测定纯化后的抗体(1mg/ml)效价为1:6,400。 分析家蚕EST数据库,表明Bm-LOC778477基因在家蚕五龄幼虫第三天的血淋巴、家蚕五龄幼虫后端丝腺和蛹期有表达。利用免疫印迹技术在家蚕蛹中能检测到Bm-LOC778477蛋白,同时间接ELISA法检测表明,Bm-LOC778477蛋白在Bm5细胞中有明显的信号。免疫细胞化学表明,Bm-LOC778477蛋白在
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