家蚕BmLHep 59蛋白的表达和亚细胞定位.pdf

1、肝细胞癌相关抗原-59(Hepatocellularcarcinoma-associatedantigen59，Hep59)，属于哺乳动物中一类含有的大约100个氨基酸残基的保守结构域家族，目前发现的这类蛋白主要存在于真核生物细胞中，大多为假想蛋白。 从本实验室家蚕蛹期cDNA文库中克隆得到一条全长为1061bp的基因序列，其NCBI登录号为DN985181，其开放阅读框(ORF)为681bp，编码226个氨基酸残基，预测分子量

2、为26.1kD，等电点为7.89。将该预测的氨基酸序列进行生物信息学分析，发现存在一个和Hep59高度同源的保守结构域，并且N末端不太可能存在信号肽，具有较强的亲水性。 通过PCR扩增目的基因完整ORF框，经过EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切，将该基因重组到带有His-标签的融合表达载体pET28at(+)后转化TG1中质粒扩增，再转化到EcoliRosetta(DE3)菌中表达分析，SDS-PAGE检测在29.9kD处有特异性条带出