癌钙调蛋白-鱼精蛋白截短体融合蛋白的基因构建与表达.pdf

1、背景：
　　癌钙调蛋白(omcomodulin,OM)是二十世纪七十年代末Macmanus从大鼠肝癌组织中提取出的一种小分子蛋白，有研究表明OM有促进神经生长的作用，并且有加大神经生长因子促进视神经生长的作用。
　　目的：
　　体外拼装癌钙调蛋白(OM)/鱼精蛋白截短体（tp）融合基因,将其克隆至原核表达载体pET22b,并在大肠杆菌BL21中诱导表达癌钙调蛋白/鱼精蛋白截短体融合蛋白。
　　方法：
　　从

2、大鼠腹腔巨噬细胞中提取细胞的总RNA，设计引物扩增癌钙调蛋白基因，并在其3’端引入鱼精蛋白截短体（tp）的编码基因，经PCR扩增获得OM/tp融合基因，将目的基因克隆至中间载体PUC57中,提取质粒PUC57-OM/tp,并测序鉴定。将克隆后的基因亚克隆至原核表达载体pET22b中,提取质粒PET22b-OM/tp,测序鉴定。质粒构建成功后，在大肠杆菌BL21中化学诱导表达，表达产物经过SDS-PAGE及Western-blot验证。<

3、br>　　结果：
　　琼脂糖凝胶电泳获得目的基因（OM/tp），大小与预期的目的基因大小一致，目的基因克隆后，菌检PCR获得长度在500bp左右的阳性克隆,与预期大小一致。抽提质粒酶切后与载体PET22b连接转化大肠杆菌感受态细胞DH5a，菌检PCR获得长度在500bp左右OM/tp的阳性克隆，与预期大小一致。抽提质粒PET22b-OM/tp,经测序后与预期的序列一致。不同浓度的IPTG诱导表达后，细菌裂解上清中均出现大小约为18