2023年全国硕士研究生考试考研英语一试题真题(含答案详解+作文范文)_第1页
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1、纳豆激酶(Nattokinase,NK)是由纳豆芽孢杆菌[Bacill us subtilis(natto.var)]分泌产生的一种具有强烈纤溶作用的丝氨酸碱性蛋白酶。NK的纤溶机制为:①直接作用于交联纤维蛋白,对纤维蛋白原不敏感,不易引起出血倾向;②能够激活体内t-PA,可以温和、持续的发挥纤溶作用;③NK可水解纤溶酶原激活剂的1型抑制剂(PAI-1),使其失活,PAI-1的失活可直接使纤溶作用增强。与目前临床上常用的血栓治疗药物链激

2、酶(SK)、尿激酶(u-PA)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)等相比,纳豆激酶具有溶栓效果明显;不易引起出血,安全性能好;能抗胰酶水解,经消化道吸收,不被破坏等优点。因此,将纳豆激酶开发成新型口服溶栓药将具有广泛的市场前景。 本研究采用诱变育种的方法选育纳豆激酶高产菌株;以紫外、微波为单因素分别对出发菌株BN3撑6进行诱变,确定紫外诱变的最佳条件为40W紫外灯、30cm照射时间20s,此条件下致死率为98.4%、突变率0.7%

3、,该条件下诱变得到正突变株YSBN8、YSBN362;微波诱变最佳条件为菌悬液浓度10<'4>个/mL,作用时间5秒,此时致死率为99.2%,突变率为2.5%,该条件下得到正突变株YSBN411、YSBN467、YSBN484,YSBN497。相同培养条件下测得上述六突变株的产酶活性分别为出发菌株的128%、130%、118.7%,184.7%,143.3%和124.1%,其中YSBN467的固体发酵产酶活性为2200IU/g,是出发菌

4、株的1.84倍;对其连续传代五次考察产酶能力差异,结果证明其遗传性状稳定。同时,实验还研究了诱变菌株的筛选方法——牛奶.琼脂板法,该法在诱变选育纳豆菌时能够大大减少工作量,科学可行。 实验还对琼脂粉、纤维蛋白平板法、纤维蛋白平板法、琼脂糖-纤维蛋白平板法测定纳豆激酶活性的特点进行了比较研究;确定采用琼脂粉-纤维蛋白平板法测定纳豆激酶活性;该法具有溶圈明显、易于测量、机械强度好、操作简便、成本低等优点,适用于纳豆菌的选育及纳豆激酶

5、发酵工艺优化中对纳豆激酶的测定,通过实验确定该法的具体操作为:①琼脂粉.纤维蛋白平板法Ⅰ:将自制纤维蛋白原溶液与1.2%琼脂粉溶液分别置于55℃水浴中恒温15min,等体积混合,迅速摇匀后倒平板,每板中倒入15mL;②琼脂粉.纤维蛋白平板法Ⅱ:将自制纤维蛋白原溶液与等体积1.2%琼脂粉溶液混合,共热至沸,倒板。测定酶活的条件:取酶液10μl点板,25℃,放置16h,测量溶圈的垂直直径并以直径积表示溶圈面积。实验确定该法的测定下限为55I

6、U/mL,精确测定范围为326.6~2200(IU/mL)。本实验研究了突变菌株YSBN467的最适液体发酵产酶条件,单因素考察后设计正交试验,确定了该菌株的最适摇床发酵条件为:麦芽糖1%,大豆蛋白胨2%,CaCl<,2>、K<,2>HPO<,4>、KH<,2>PO<,4>各0.02%;接种量4%,温度为30℃,初始pH为6.5,培养基装液量为20mL(/100mL三角瓶),接种量4%,摇床转速为120r/min。在最适摇床发酵条件下,

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