白藜芦醇激活H9c2心肌细胞ERK1-2信号转导通路抗氧化应激损伤的机制研究.pdf

1、目的
　　 培养H9c2心肌细胞建立氧化应激模型,同时选择并选用ERK1／2途径作为研究对象,利用ERK1／2通路特异性阻断剂UO126进一步探讨可能的作用机制,观测白藜芦醇对心肌细胞抗氧化应激损伤的保护及机制。
　　 方法
　　 通过传代方法培养H9c2心肌细胞。实验分为以下5组:正常对照组、过氧化氢(H2O2)组、白藜芦醇+H2O2组、白藜芦醇+UO126+H2O2组、UO126+H2O2组。实验终止后,在倒

2、置相差显微镜下观察H9c2心肌细胞形态及变化,测定乳酸脱氢酶(LDH)的释放及超氧化物歧化酶(SOD)的活性,采用硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛(MDA)含量,采用流式细胞仪来检测心肌细胞的凋亡。采用Western-blot测定ERK1／2蛋白的表达。
　　 结果
　　 1.1.H2O2组较对照组LDH活性显著增加(998.084±23.07vs477.11±17.78,P<0.05),MDA活性也显著增加(32.054±

3、1.76vs7.42±1.51,P<0.05),SOD活性显著降低(15.43±4.52vs35.03±2.17,P<0.05),比较两组差异具有统计学意义。
　　 2.白藜芦醇+H2O2组较H2O2组,LDH活性显著降低(617.34±11.23vs998.08±23.07,P<0.05),MDA活性也显著降低(16.334±1.68vs32.05±1.76,P<0.05),SOD活性显著增加(29.03±3.18vs15.4

4、3±4.52,P<0.05),比较两组差异具有统计学意义。
　　 3.凋亡率结果显示,空白对照组细胞生长良好,凋亡率极低为6.73±2.38。H2O2组出现大量凋亡细胞,其凋亡率为56.2±4.73,与空白对照组相比差别有统计学意义(P<0.05)；白藜芦醇+H2O2组其凋亡率显著降低为38.17±3.08,与H2O2组相比差别有统计学意义(P<0.05)。
　　 4.UO126+H2O2组比较对照组LDH活性显著降低(

5、658.19±21.38vs998.08±23.07,P<0.05),MDA活性也显著降低(20.01±3.16vs32.05±1.76,P<0.05),SOD活性显著增加(22.33±1.78vs15.43±4.52,P<0.05),比较两组差异具有统计学意义。而白藜芦醇+UO126+H2O2组与UO126+H2O2组的LDH、MDA、SOD活性比较,均无显著性差异。
　　 5.H2O2可显著上调ERK1／2的表达,白藜芦醇+

6、H2O2组可显著下调H2O2所致的ERK1／2表达,上述差异均具有统计学意义:而白藜芦醇+UO126+H2O2组与白藜芦醇+H2O2组比较,ERK1／2表达无差异。
　　 结论
　　 1.H2O2可以诱导H9c2心肌细胞发生氧化作用,并发生细胞凋亡；
　　 2.白藜芦醇可以拮抗H2O2所致的H9c2心肌细胞氧化作用,抑制H2O2所致的H9c2心肌细胞凋亡,对H9c2心肌细胞有保护作用；
　　 3.白藜芦醇