茶毛虫核型多角体病毒多角体蛋白基因（polh）的表达、抗体制备及检测利用.pdf

1、杆状病毒是一类基因组为双链环状的DNA病毒，其主要感染节肢动物特别是鳞翅目，双翅目和膜翅目昆虫的一类病毒。杆状病毒科分为核型多角体病毒属(NPV)和颗粒体病毒属(GV)。现已发现的杆状病毒以NPV为主，核型多角体病毒根据病毒粒子中所含核衣壳数量的多少，从形态学上可分为单粒包埋型和多粒包埋型。杆状病毒是调节昆虫种群密度的重要病原因子，它作为一种生物杀虫剂，具有病原特异性较高、安全性好、害虫不易产生抗性，且能在田间长期控制害虫种群等诸多优点

2、而成为生物防治研究中的热点，具有广阔的应用前景。茶毛虫(EuproctispseudoconspersaStrand)是茶树上的主要害虫之一，茶毛虫核型多角体病毒对茶毛虫具有高的致病性，已在大田中批量用于防治茶毛虫。本文选择茶毛虫核型多角体病毒的多角体蛋白基因(polyhedringene)进行表达，利用表达产物制备其抗体，并将抗体应用于定量检测茶毛虫病毒，为茶毛虫核型多角体病毒农药检测提供一种方法，也为其它杆状病毒定量检测探索一条途径

3、。结果研究如下： 1.采用生物测定法测定了茶毛虫病毒对茶毛虫2龄幼虫的毒力，幼虫死亡率(y)对浓度的对数值(x)毒力回归曲线方程为：y=1.3952x-1.7737，相关系数r=0.9975(p＜0.01)。 2.以EupsNPV基因组DNA为模板，PCR扩增出全长为741bp的ph基因编码区片段。将Ep-ph编码区插入pET-28-a表达载体中，构建了原核表达载体pET-28-a-Ep-ph，转化大肠杆菌BL21(DE

4、3)，在IPTG诱导下进行了高效的表达。采用传统的割胶方法纯化目的融合蛋白作为抗原，免疫新西兰大白兔，制备了EupsNPV的ph抗体，测得的抗体效价为6.4×104。 3.对多克隆抗体的特异性进行Westernblotting检测，表明制得的抗体特异性良好。间接ELISA检测茶毛虫病毒样品并绘制了标准曲线，OD495值(y)对病毒浓度的对数值(x)的标准曲线方程为：y=0.4152x-0.8229，相关系数r=0.9897(p＜