HIV-1感染者PBMCs、CD3+T细胞和CD8+T细胞PD-1表达对p38 MAPK及NF-κB磷酸化水平的影响.pdf

目的：通过研究人类免疫缺陷病毒-1（human immunodeficiency virus-1,HIV-1）感染者外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells,PBMCs）、CD3+T细胞和CD8+T细胞程序性死亡因子1（programmed death1,PD-1）表达水平的差异性以及其与核因子κB（Nuclear factor kappa B,NF-κB）、p38分裂原激活的蛋白激酶（p38 Mitogen Activated Protein Kinase,p38 MAPK）信号通路磷酸化水平的相关性，探讨PD-1表达对PBMCs、CD3+T细胞和CD8+T细胞活化及效应功能的影响。　　方法：募集HIV-1感染者39例，分为典型艾滋病患者组（Typical AIDS patients,TPs）15例和HIV-1携带者组（Carriers,CRs）24例，另取9例健康志愿者（Healthy donors,HDs）血液作为健康对照，已获得知情同意书。用淋巴细胞分离液常规分离获得PBMCs，细胞计数后调整细胞浓度至1×107个/ml，分为A、B、C三管，每管100μL细胞悬浮液。A管为检测PBMCs、CD3+T细胞和CD8+T细胞上PD-1的表达：加入适量CD3、CD8、PD-1抗体；B管为检测PBMCs、CD3+T细胞和CD8+T细胞PD-1和p38 MAPK的表达：加入刺激剂刺激，经固定破膜后，加入适量CD3、CD8、PD-1和p38 MAPK抗体；C管为检测PBMCs、CD3+T细胞和CD8+T细胞PD-1和 NF-κB的表达：加入刺激剂刺激，经固定破膜后，加入适NF-κB磷酸化水平：TPs组的PBMCs上PD-1的表达频率显著高于HDs组与CRs组（P<0.05, P<0.05）；TPs组和HDs组PBMCs中p38 MAPK的表达频率显著高于CRs组（P<0.05,P<0.05）；TPs组PBMCs中NF-κB的表达频率显著低于HDs组与CRs组（P<0.05,P<0.05）；HIV-1感染者PBMCs中PD-1、p38 MAPK与CD4计数存在负相关关系（P<0.05,P<0.05）；NF-κB与CD4计数存在正相关关系（P<0.05）；p38 MAPK与PD-1的表达存在正相关关系（P<0.05）；NF-κB与PD-1的表达存在负相关关系（P<0.05）。　　2.HIV-1感染者CD3+T细胞上PD-1的表达水平及p38 MAPK、NF-κB磷酸化水平：TPs组PBMCs中CD3+T细胞PD-1的表达频率与CRs组、HDs组比较显著升高（P<0.05, P<0.05）；TPs组和HDs组CD3+T细胞中p38 MAPK的表达频率显著高于CRs组（P<0.05, P<0.05）；TPs组、CRs组和HDs组三组的CD3+T细胞中NF-κB的表达频率没有显著差异（P＞0.05, P＞0.05,P＞0.05）；相关性分析表明，HIV-1感染者CD3+T细胞中PD-1、p38 MAPK与CD4计数存在负相关关系（P<0.05,P<0.05）；CD3与CD4计数存在正相关关系（P<0.05）；NF-κB与CD4计数没有相关性（P＞0.05）；HIV-1感染者CD3+T细胞中p38 MAPK与PD-1的表达存在正相关关系（P<0.05），NF-κB与PD-1没有相关性（P＞0.05）。　　3. HIV-1感染者CD8+T细胞上PD-1的表达水平及p38 MAPK、NF-κB磷酸化水平：TPs组PBMCs中CD8的表达频率显著高于CRs组和HDs组CD8的表达频率（P<0.05,P<0.05）；CRs组PBMCs中CD8的表达频率显著高于HDs组（P<0.05）；TPs组CD8+T细胞中PD-1的表达频率与CRs组、HDs组比较显著升高（P<0.05,P<0.05）；TPs组CD8+T细胞中p38 MAPK的表达频率显著高于CRs组（P<0.05）；TPs组和CRs组CD8+T细胞中NF-κB的表达频率显著低于HDs组（P<0.05,P<0.05）；TPs组CD8+T细胞中NF-κB的表达频率显著低于CRs组（P<0.05）；HIV-1感染者CD8+T细胞中CD8、PD-1、p38 MAPK与CD4计数存在负相关关系（P<0.05,P<0.05,P<0.05）；NF-κB与CD4计数存在正相关关系（P<0.05）；HIV-1感染者CD8+T细胞中p38 MAPK与PD-1的表达存在正相关关系（P<0.05）；NF-κB与PD-1存在负相关关系（P<0.05）。　　结论：在慢性HIV-1感染过程中，PD-1可能通过正向调控p38 MAPK磷酸化参与调节PBMCs、CD3+T细胞和CD8+T细胞的应答过程；PD-1可能通过负向调控NF-κB磷酸化参与了调节PBMCs和CD8+T细胞的应答过程。