miR-3065-5p和miR-1307-5p在肝癌细胞中的功能研究.pdf

1、肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是一种常见的恶性肿瘤，多发于成人，肝癌的发生、发展和转移是一个复杂的过程，受多个因子和基因的调节。微小核糖核酸RNA(MicroRNA，miRNA)是一类长度在19-24个核苷酸范围内的内源性非编码RNA，miRNA能够通过与靶基因mRNA3' UTR互补结合来抑制翻译或者促进mRNA降解，从而调控相关基因的表达。大量研究报道称miRNA在许多肿瘤细胞中都存在差异性表达

2、，并且在肿瘤的发生发展中都可能发挥着重要的作用。实验室前期的研究发现一定浓度的脐带间充质干细胞(Umbilicalcord-derived mesenchymal stem cells，UC-MSCs)条件培养基能够抑制肝癌细胞HepG2的增殖，并且通过高通量测序技术，分析了UC-MSCs条件培养基共培养后HepG2 miRNAs的差异表达谱，找到了一些可能相关的miRNAs。其中miR-3065-5p和miR-1307-5p在UC-M

3、SCs条件培养基处理HepG2后表达水平显著上调。
　　本研究通过qRT-PCR检测了三种肝癌细胞系(HepG2、MHCC97-L、MHCC87-H)和正常肝细胞系L02中miR-3065-5p的表达是否存在差异;结果显示，相较正常肝细胞L02，miR-3065-5p在肝癌细胞系中的表达明显下调，接下来我们通过体外合成miR-3065-5p质粒转染三种肝癌细胞，结果发现过表达miR-3065-5p能够显著抑制三种肝癌细胞的增殖、侵

4、袭、克隆形成能力。此外，我们通过生物信息学预测到SATB1可能是miR-3065-5p的相关靶基因，通过双荧光素酶报告基因实验进一步检测了预测的可靠性，实验结果显示SATB1与miR-3065-5p存在互补结合位点。qRT-PCR与Western blot结果显示过表达的miR-3065-5p能够显著抑制SATB1表达水平。最后通过体外合成siRNA干扰SATB1在肝癌细胞中的表达，结果显示，干扰SATB1后也能显著抑制肝癌细胞的增殖，