慢病毒简介

慢病毒载体概况的基因结构慢病毒载体历史与构建重组慢病毒的产生慢病毒在中枢神经系统中的应用慢病毒在造血干细胞系统中的应用慢病毒在眼科疾病治疗中的应用慢病毒载体概况慢病毒是逆转录病毒科亚科之一，分为灵长类和非灵长类慢病毒。灵长类慢病毒包括，，猴免疫缺陷病毒（），非灵长类慢病毒包括猫免疫缺陷病毒（），牛免疫缺陷病毒（），马免疫缺陷病毒（）等，其中研究最为透彻。研究表明慢病毒核蛋白质前整合复合物具有噬核特性，病毒基因组运输至细胞核，从而使慢病毒可以感染和在非有丝分裂细胞中复制。这一特性是慢病毒成为基因治疗的转移载体。的基因结构为双链病毒，共有个基因。基因编码病毒的核心蛋白，包括基质蛋白、衣壳蛋白、核衣壳蛋白。基因编码病毒复制所需的酶，如反转录酶、整合酶、蛋白酶。基因编码病毒的包膜糖蛋白，决定病毒感染宿主的靶向性。编码的蛋白调节、、的表达水平。编码的蛋白参与转录的控制。个辅助基因、、、编码的蛋白则作为毒力因子参与宿主细胞的识别和感染。两端为长末端重复序列()，内含复制所需的顺式作用元件。编码病毒的基本结构调节基因慢病毒载体历史与构建第一代来源的慢病毒载体以及构建的三质粒系统为代表，该系统由包装质粒、包膜质粒及载体质粒种质粒组成。包装质粒是前病毒基因组’端由巨细胞病毒早期启动子取代，’由序列取代。包装成分分别构建在两个质粒上，一个表达和，另一个表达。载体质粒携带了’端，和全部’端非翻译区域，另外还带有应答元件（）。包膜表达质粒使用水疱性口炎病毒糖蛋白基因()用来代替了原病毒的基因。第二代来源的慢病毒载体年等将包装质粒上的、、和基因(即辅助基因)敲除从而得到的其他方面与第一代载体系统一致。第三代来源的慢病毒载体为减少复制型病毒的产生，可通过减少辅助质粒与载体质粒的同源性，或者将和编码序列隔离分散在不同的质粒上。这样的包装系统由四质粒代替原有的三质粒包装系统。质粒一携带了编码序列及质粒二包含了编码的序列质粒三是载体质粒质粒四表达。自身失活型（）慢病毒载体载体的构建是在原病毒载体基础上删除了病毒’端的区增强子和启动子序列的片段。该区域出现突变则在载体转录后，其’会因为缺失所需要的启动子和增强子序列而无法复制出完整长度的病毒基因组。重组慢病毒的产生常用瞬时转染法，即将包膜质粒，包装质粒和载体质粒共转染人胚肾细胞直接产生生产细胞。最后慢病毒分泌到培养基中进行培养而得到大量载体慢病毒。慢病毒在中枢神经系统中的应用()重组病毒载体已被用于研究各种发育神经生物学中的基础问题，以及各种神经退行性疾病的发病机理和治疗。慢病毒载体能转导分裂的细胞，如神经元，并介导中枢神经系统（）细胞在体内和体外基因治疗或报道基因而作为神经生物学研究的有价值的工具。慢病毒整合前复合物与核孔相互作用进入细胞核分裂的细胞，其中的前病毒整合到宿主细胞的基因组并进行主动运输。此功能是为什么慢病毒在有丝分裂后的细胞在中枢神经系统的基因转移载体的主要原因。()’()’自身失活型（）慢病毒载体’端的区启动子发生失活突变后，在逆转录过程中转移至’。这样的载体整合入靶细胞，将不会产生完整长度的载体，因此命名为“自身失活型载体”。()为了增加基因在脑中的传递，新一代的慢病毒载体包含，一个来自区约的区域，从而增加了原病毒进入核，也提高了在大脑中的转导效率。()慢病毒载体系统的另一个特征是携带病毒微粒的表面蛋白，包含受体和共受体，从而改变或扩大的细胞类型的范围，使得该载体可以结合并且进入。这个模型涉及取代的包膜糖蛋白与另一种病毒的包膜糖蛋白，如疱疹性口腔炎病毒糖蛋白（）。产生高滴度的慢病毒载体的稳定的包装细胞系的发展受到表达的毒性的阻碍。因此，大多数人使用三质粒系统。:()()(’():μ转染收集和集中的病毒上清滴定慢病毒载体慢病毒在造血干细胞系统中的应用造血干细胞（）具有自我更新和分化为血液及免疫系统中各种成熟细胞的能力，许多疾病如遗传性、代谢性和感染性疾病或恶性肿瘤等有望通过基因治疗的方法得到纠正。目的基因转移后，可随着的自我更新和分化在体内长期表达，因此是较理想的基因转移靶细胞。研究表明，假构型载体可不经过对的预刺激就能有效地将基因转移到人早期干细胞并能在重度联合免疫缺陷()鼠骨髓中稳定地长期表达，等构建假构型载体，以绿色荧光蛋白（）作为标记基因，将新鲜分离的人脐血细胞在无血清及细胞因子培养基中转染小时，然后植入经亚致死量照射的非肥胖型糖尿病重度联合免疫缺陷()鼠，可在受鼠脾脏、骨髓及外周血的长期表达。人造血祖细胞的分离慢病毒载体的制备慢病毒载体转导细胞分析转人细胞的小鼠慢病毒在眼科疾病治疗中的应用视网膜细胞基因转导的主要目的是研究视网膜细胞的发病机制或逆转视网膜疾病。目前，慢病毒和腺病毒载体在被用于研究和纠正的视网膜变性性疾病的基因治疗。()()()载体携带绿色荧光蛋白（）基因其通过巨细胞病毒（）启动子的表达，可以在视网膜上得到高效和持久的基因的表达（图）。此外，基因表达被限制在感光体细胞中，是更有效的视紫红质子。视网膜下注射巩膜方法()玻璃体方法大眼睛的玻璃体手术治疗大鼠和小鼠视网膜下腔的基因传递猴视网膜基因传递基因传递至玻璃体空间转染效率谢谢大家！