水稻纹枯病菌PG的分离纯化、理化性质及Rspg1基因的克隆与表达.pdf_第1页
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文档简介

1、水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)产生的多聚半乳糖醛酸酶(PG)是一个重要的致病因子。本研究以丙酮法提取病菌PG粗蛋白，后依次经DEAESepharose Fast Flow离子交换柱、Phenyl-Sepharose6 Fast Flow疏水柱、SephadexG-75凝胶柱和DE52离子交换柱层析，获得具有较高活性的PG纯化蛋白。该PG蛋白分子量为39.81kD，等电点为4.58；含有糖基(含糖量为1.48％)而不

2、含脂类物质，是一种糖蛋白；蛋白部分含有α-氨基，但不含芳香族氨基酸。经测定，这种PG蛋白在pH4-12范围内均有活性，但pH5时活性最大；对热(≥40℃)不稳定，100℃下水浴20min活性完全丧失；对紫外线、氯仿、胰蛋白酶和蛋白酶K均敏感，处理后活性分别下降60.0％、48.3％、65.0％和68.3％。
　　 根据GenBank中立枯丝核菌PG基因序列(FJ544455、FJ544456、DQ848983)特征设计特异引物，

3、通过PCR技术获得水稻纹枯病菌多聚半乳糖醛酸酶全长基因Rspg1。该基因大小为1395bp，推测含有5个内含子(57bp、57bp、59bp、66bp、61bp)，其序列与玉米纹枯病菌pg1基因(FJ544456)相似性达99％。
　　 以pET-28a(+)为载体、IPTG为诱导物，将Rspg1基因转入Escherichia coliBL21(DE3)进行表达。结果表明，在IPTG诱导下，含有Rspg1基因的转化菌培养破碎上清

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