海洋细菌PD--2抑藻活性研究及群体感应基因zlb I敲除方法的建立.pdf

1、海洋细菌PD2抑藻活性研究及群体感应基因zlbI敲除方法的建立学位论文完成日期：塑壁：笙型指导教师签字：答辩委员会成员签字：荔方摘要海洋细菌PD2抑藻活性研究及群体感应基因zlbI敲除方法的建立摘要海洋环境中的溶藻细菌是一类对海洋微藻生长具有抑制作用，能裂解或直接杀死藻细胞的细菌。研究溶藻细菌的功能与机制是藻菌作用关系的热点问题，对探讨赤潮的生物治理等关键科学问题具有重要的指导意义。本文以一株微藻共栖细菌Rhodobacteraceae

2、strainPD2为研究对象，探明了它释放的抑藻物质和作用方式，确定了其群体感应基因，并建立了利用同源重组技术敲除群体感应基因的方法。主要研究内容包括：对微藻共栖细菌RhodobacteraceaestrainPD2的培养条件进行了优化实验，通过对比不同条件下的细菌密度、抑藻活性，获得最适的培养温度和培养基添加成分。结果表明采用Zobell2216E加葡萄糖培养基，30oC的条件下培养细菌密度和抑藻活性最高。利用基于生物传感器的双层琼脂

3、法对PD2产生的AHLs信号分子的种类进行了初步研究，发现该菌至少可以产生3种AHLs分子，并与标准品比较，其中可能存在新种类的A_HLs。应用之前实验获得的最适培养条件对具有抑藻效果的微藻共栖细菌PD2进行大规模的发酵培养，利用各种化学分离纯化手段与生物活性示踪方法(生物自显影)对其代谢产物中的抑藻活性物质进行分离和纯化，运用一维核磁共振(1HNMR、13CNMR、DEPT)、质谱(ELrMS)等现代波谱分析技术对该抑藻化合物的分子量

4、和结构进行了鉴定。通过与己知文献的对比，抑藻化合物分子式确定为C12HloN20S，分子量为230051383，结构式命名：(4，5dihydrothiazol2一y1)(1H—indol一3y1)methanone。通过扫描电镜观察发现抑藻物质可以使藻细胞壁裂解，从而抑制其宿主东海原甲藻的生长。通过对PD2的全基因组序列进行分析，发现了两对群体感应(1uxVR)M源基因，命名为zlaI／R和zlbI／R。为了探明该细菌群体感应的调控功