鞘内罗哌卡因伍用右美托咪定通过抑制脊髓神经元和星形胶质细胞活化协同调控慢性炎性痛大鼠的痛觉过敏.pdf

背景：慢性疼痛是长期困扰人类的顽疾，严重影响患者的生活质量。神经阻滞技术用于治疗某些顽固性疼痛，如幻肢痛、带状疱疹后神经痛及复杂区域疼痛综合征等效果显著。随着局麻药更新换代，左旋布比卡因、罗哌卡因（）等低毒高效的局麻药相继应用于临床，但高浓度局麻药在产生强效镇痛的同时所造成的运动阻滞也给患者日常生活造成不便。虽然低浓度罗哌卡因具有“感觉—运动分离阻滞”的特性，但低浓度较大剂量的单独用药，随之增加神经并发症也倍受关注。因此，现代疼痛治疗多采用联合用药的策略，以两种或两种以上药物相互作用（协同或叠加）为基础，以减少用药剂量，达到更好地镇痛效应，并减少相关并发症。前期研究表明，右美托咪定（）其可有效延长术后鞘内镇痛的时间，且并未观察到神经并发症和其他不良反应的发生，提示鞘内应用右美托咪定可能与局麻药产生一定协同或叠加效应，但作用机理近乎空白，亟需开展研究。我们的前期研究表明，神经元—星形胶质细胞相互作用是参与慢性炎性痛维持和发展的重要环节，故本研究拟在大鼠神经慢性炎性痛模型上，综合应用超微结构形态学、计算机三维重塑、分子生物学、神经药理学、行为学等实验手段以及等辐射分析（）等统计学方法，研究鞘内罗哌卡因伍用右美托咪定的相互作用，及其对神经元星形胶质细胞的调控在慢性炎性痛中的作用。　　目的：观察鞘内伍用对诱导的慢性炎性痛大鼠辐射热痛敏的相互作用，并探讨其机制。　　方法：（）大鼠足掌中部皮下注射完全福氏佐剂（）建立慢性炎性痛模型；　　（）运用热辐射法检测足底注射后热缩足潜伏期（）的动态变化；　　（）免疫荧光组织化学染色检测脊髓背角神经元及计算机三维重塑技术检测星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白（）表达的动态变化；　　（）检测足底注射后星形胶质细胞的表达变化；　　（）大鼠鞘内置管分别给予不同剂量或；　　（）运用热辐射法检测给予不同剂量或后大鼠的动态变化；　　（）分别建立鞘内或的量效曲线，并计算％抗热痛有效剂量（%）；　　（）根据和计算，并确定鞘内联合给予的药物剂量（药物联用后理论抑制热痛%、%、%、%的剂量，即:和）；　　（）大鼠鞘内置管给予不同剂量；　　（）运用热辐射法检测给予不同剂量后大鼠的动态变化；　　（）建立鞘内的量效曲线，等辐射分析计算实际联合用药，即；　　（）大鼠鞘内置管分别连续给予、或；　　（）免疫荧光组织化学染色检测给药后脊髓背角神经元及计算机三维重塑技术检测给药后星形胶质细胞表达的动态变化；　　（）检测给药后星形胶质细胞的表达变化；　　（）反复给药，观察鞘内给予最大剂量的镇痛效应；　　（）旷场实验（）检测各最高剂量组大鼠自发活动和情绪变化；　　（）转棒实验检测各最高剂量组大鼠运动协调能力；　　（）苏木素伊红（）染色检测各最高剂量组大鼠脊髓组织病理学变化。　　结果：（）大鼠足掌中部皮下注射可使注射侧足产生显著的持续性疼痛，表现为辐射热痛阈的下降；　　（）脊髓背角神经元在注射后~即达活化高峰，随后下降，并持续至注射后，表现为阳性神经元数目的增加；　　（）脊髓背角星形胶质细胞在注射后开始活化，达活化高峰，表现为蛋白表达的增多；　　（）鞘内单次分别给予或均具有剂量依赖性的镇痛效应，表现为辐射热痛阈的上升；　　（）鞘内为μ，为μ；　　（）鞘内=，=。等辐射分析结果提示，鞘内联合给予具有协同效应，表现为镇痛程度增强、镇痛时间延长，并呈剂量依赖性变化；　　（）鞘内分别连续注射或均可抑制诱导的慢性炎性痛状态下脊髓背角神经元的活化，尤其在~，联合给药具有协同抑制效应，表现为阳性神经元数目的减少；　　（）鞘内分别连续注射或均可抑制诱导的慢性炎性痛状态下脊髓背角星形胶质细胞的活化，尤其在~，联合给药具有协同抑制效应，表现为蛋白表达的减少；　　（）反复鞘内给予最大剂量不产生痛觉敏化或药物耐受；　　（）实验表明，鞘内置管和鞘内各最高剂量给药对大鼠自发活动和情绪变化均无显著影响，表现为与对照组相比，平均速度和中央活动时间百分比无显著降低；　　（）转棒实验表明，鞘内置管和鞘内各最高剂量给药对大鼠运动协调能力均无显著影响，表现为与对照组相比，置管给药前后棒上停留时间百分比无显著降低；　　（）鞘内注射在可引起神经元周围明显的炎症细胞浸润，伍用可减轻内的炎症细胞浸润，在给药后神经元周围炎症细胞浸润无明显差异。　　结论：（）足掌中部皮下注射可产生显著的辐射热痛敏，且同侧脊髓背角和呈时间依赖性变化，提示神经元—星形胶质细胞的相互作用与诱导的慢性炎性痛密切相关；　　（）鞘内分别给予和均可阻断脊髓神经元和星形胶质细胞的活化而缓解疼痛，且呈对辐射热痛敏的缓解和脊髓神经元和星形胶质细胞活化的抑制呈协同作用，提示抑制脊髓神经元—星形胶质细胞可能是协同镇痛的部分机制；　　（）反复鞘内给予最大剂量不产生痛觉敏化或药物耐受，且可减轻引起的脊髓背角炎症细胞浸润，提示可安全地作为局麻药的佐剂，具有临床应用前景；　　（）鞘内伍用不影响大鼠自发活动、情绪及活动协调能力，提示其协同镇痛效应不依赖于运动功能的损害。