脂联素对高糖刺激下内皮祖细胞的作用及其对氧化水平的影响.pdf

目的:　　内皮祖细胞(，)又称为成血管细胞，不仅参与胚胎时期的血管生成，而且参与出生后的血管新生与内皮损伤修复。糖尿病合并心血管并发症患者的数量减少，功能减退，能够导致血管再内皮化及修复过程受损。脂联素(，)是一种脂肪源性血浆蛋白，对心血管具有保护作用。具有抗炎和抗动脉粥样硬化的作用，可促进血管生成；另外，还可以通过调节细胞代谢，来减少心肌缺血再灌注损伤、抑制心肌肥厚性重构。大量研究证明，经过干预，可使的数量增加。然而，是否能改善高糖环境下的数量和功能尚未清楚。为此，我们通过实验给予不同浓度的葡萄糖干预，观察葡萄糖对数量和功能的影响；在此基础上，给予不同浓度的干预，观察各浓度对高糖损伤后数量和功能的影响以明确对的保护作用，并探讨其可能的机制，为临床治疗代谢综合征性心血管疾病提供新的干预靶点和必要的科学理论依据。　　方法:　　、的分离、培养和鉴定：采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞，经含碱性成纤维细胞生长因子()、血管内皮生长因子()及％胎牛血清的培养基培养，进行形态学、流式细胞仪测细胞分子标志物(、和)和激光共聚焦倒置显微镜下观察培养细胞摄取和结合鉴定。　　、不同浓度葡萄糖对的影响：收集培养的细胞，给予不同浓度的葡萄糖(、、、、)干预，同步化后用比色法检测的增殖能力；用法检测的凋亡率；用荧光探针()检测法进行细胞活性氧()水平检测。　　、对高糖环境下的影响：将培养的分为组：其中组细胞分别给予葡萄糖、葡萄糖甘露醇、葡萄糖干预，其余组细胞先给予葡萄糖干预，然后分别给予：μ、μ、μ和μ干预。收集细胞，同步化后检测的增殖、迁移、凋亡及水平。　　、统计学处理方法：用统计软件进行统计分析，实验数据以&#;表示，组间资料比较采用，　　结果:　　、培养和鉴定：密度梯度离心法分离出的外周血单个核细胞圆形透亮，培养后出现短梭形贴壁细胞，并有典型细胞集落；培养，细胞集落增加明显，梭形细胞增多并呈交叉性生长；用激光共聚焦倒置显微镜观察，细胞摄取呈红色荧光，摄取呈绿色荧光，摄取并结合的细胞呈黄色荧光，流式细胞仪分析结果提示：细胞表达、、，其中、、阳性细胞比例为％、％、％。证实培养的细胞是正在分化的。　　、不同糖浓度对的影响：当糖浓度分别为、、、、时法测出的值分别为(&#;)、(&#;)、(&#;)、(&#;)、(&#;)，凋亡率分别为(&#;)％、(&#;)％、(&#;)％、(&#;)％、(&#;)％，法测出的水平(值)分别为(&#;)、(&#;)、(&#;)、(&#;)、(&#;)。结果提示，随着糖浓度的增高，的增殖能力下降，凋亡、水平增加()。　　、对高糖损伤后的影响：对以下组细胞(葡萄糖组、高渗组、高糖组、高糖μ组、高糖μ组、高糖μ组、高糖μ组)进行检测的结果分析后可以看出与正常糖浓度对照组相比，高渗对照组的增殖、迁移、凋亡和水平无统计学差异()，却显著高于高糖组，说明高糖对内皮祖细胞的影响是糖浓度造成的，而非渗透压。在葡萄糖条件下，的数量和迁移功能较正常对照组明显下降，细胞凋亡增多，不同浓度干预后能明显提高高糖损伤后的的功能(　　结论:　　、高糖干预可导致增殖能力下降，细胞凋亡增多；　　、高糖干预后加入，的增殖、迁移能力恢复，细胞凋亡减少，并在一定范围内，其作用随浓度的增加而增强；　　、高糖可以引起的水平升高、功能受损，而可以降低高糖引起的水平，保护的功能；渗透压对无影响。