2023年全国硕士研究生考试考研英语一试题真题(含答案详解+作文范文)_第1页
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1、目的:  内皮祖细胞(EndothelialProgenitCells,EPCs)又称为成血管细胞,不仅参与胚胎时期的血管生成,而且参与出生后的血管新生与内皮损伤修复。糖尿病合并心血管并发症患者的EPCs数量减少,功能减退,能够导致血管再内皮化及修复过程受损。脂联素(adiponectin,APN)是一种脂肪源性血浆蛋白,对心血管具有保护作用。APN具有抗炎和抗动脉粥样硬化的作用,可促进血管生成;另外,APN还可以通过调节细胞代谢,来减

2、少心肌缺血再灌注损伤、抑制心肌肥厚性重构。大量研究证明,经过APN干预,可使EPCs的数量增加。然而,APN是否能改善高糖环境下EPCs的数量和功能尚未清楚。为此,我们通过实验给予EPCs不同浓度的葡萄糖干预,观察葡萄糖对EPCs数量和功能的影响;在此基础上,给予不同浓度的APN干预,观察各浓度APN对高糖损伤后EPCs数量和功能的影响以明确APN对EPCs的保护作用,并探讨其可能的机制,为临床治疗代谢综合征性心血管疾病提供新的干预靶点

3、和必要的科学理论依据。  方法:  1、EPCs的分离、培养和鉴定:采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,经含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)及10%胎牛血清的M199培养基培养7d,进行形态学、流式细胞仪测细胞分子标志物(CD34、CD133和KDR)和激光共聚焦倒置显微镜下观察培养细胞摄取acLDL和结合UEAI鉴定。  2、不同浓度葡萄糖对EPCs的影响:收集培养4d的细胞,给予不同浓度的葡萄糖

4、(5.5、20、25、30、50mmoll)干预48h,同步化后用MTT比色法检测EPCs的增殖能力;用AnnexinVFITC法检测EPCs的凋亡率;用荧光探针(DCFHDA)检测法进行细胞活性氧(ROS)水平检测。  3、APN对高糖环境下EPCs的影响:将培养4d的EPCs分为7组:其中3组细胞分别给予5.5mmoll葡萄糖、5.5mmoll葡萄糖24.5mmoll甘露醇、30mmoll葡萄糖干预96h,其余4组细胞先给予30mm

5、oll葡萄糖干预48h,然后分别给予:1.25μgml、2.5μgml、51μgml和10μgmlAPN干预48h。收集细胞,同步化后检测EPCs的增殖、迁移、凋亡及ROS水平。  4、统计学处理方法:用SPSS19.0统计软件进行统计分析,实验数据以X±s表示,组间资料比较采用ANOVA,P  结果:  1、EPCs培养和鉴定:密度梯度离心法分离出的外周血单个核细胞圆形透亮,培养4d后出现短梭形贴壁细胞,并有典型细胞集落;培养7d,细

6、胞集落增加明显,梭形细胞增多并呈交叉性生长;用激光共聚焦倒置显微镜观察,细胞摄取DiIacLDL呈红色荧光,摄取FITCUEAI呈绿色荧光,摄取DiIacLDL并结合FITCUEAI的细胞呈黄色荧光,流式细胞仪分析结果提示:细胞表达KDR、CD133、CD34,其中KDR、CD133、CD34阳性细胞比例为92.32%、10.7%、23.3%。证实培养的细胞是正在分化的EPCs。  2、不同糖浓度对EPCs的影响:当糖浓度分别为5.5m

7、mol1、20mmol1、25mmol1、30mmol1、50mmol1时MTT法测出的A值分别为(0.287±0.031)、(0.252±0.034)、(0.242±0.019)、(0.215±0.024)、(0.208±0.017),凋亡率分别为(8.495±1.279)%、(12.942±1.177)%、(14.770±1.438)%、(16.393±1.216)%、(17.502±1.259)%,DCF法测出的ROS水平(OD值

8、)分别为(0.361±0.053)、(0.468±0.090)、(0.483±0.053)、(0.518±0.081)、(0.613±0.098)。结果提示,随着糖浓度的增高,EPCs的增殖能力下降,凋亡、ROS水平增加(P0.05)。  3、APN对高糖损伤后EPCs的影响:对以下7组细胞(5.5mmol1葡萄糖组、高渗组、30mmol1高糖组、高糖1.25μgmlAPN组、高糖2.5μgmlAPN组、高糖5μgmlAPN组、高糖10

9、μgmlAPN组)进行检测的结果分析后可以看出与正常糖浓度对照组相比,高渗对照组EPCs的增殖、迁移、凋亡和ROS水平无统计学差异(P0.05),却显著高于高糖组,说明高糖对内皮祖细胞的影响是糖浓度造成的,而非渗透压。在30mmol1葡萄糖条件下,EPCs的数量和迁移功能较正常对照组明显下降,细胞凋亡增多,不同浓度APN干预后能明显提高高糖损伤后的EPCs的功能(P  结论:  1、高糖干预可导致EPCs增殖能力下降,细胞凋亡增多;  

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