缺血预处理抗大鼠肠缺血-再灌注肠粘膜损伤的蛋白质组学研究及醛糖还原酶的作用.pdf

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资源描述:
肠缺血再灌注(,)损伤是外科实践中常见的组织器官损伤之一,在严重感染、创伤、休克、心衰以及肠梗阻、小肠移植术等疾病的病理生理演变过程中起重要作用,它不仅引起肠道局部损害,还导致肠外器官的损伤,甚至多器官功能不全。  基于双向电泳(,)和质谱分析的蛋白质组学已经有了广泛的应用。目前,尚无采用蛋白质组学方法探讨抗大鼠肠损伤肠黏膜差异表达蛋白的报道。因此,本实验拟采用阻断与开放大鼠肠系膜上动脉()所致的肠肠黏膜损伤的模型,从以下三部分进行研究:、复制大鼠肠肠黏膜损伤模型,并确立有效的保护策略,为下一步蛋白组学研究作准备;、采用分离肠黏膜差异表达的蛋白,然后采用质谱法鉴定这些蛋白,最后采用逆转录聚合酶链式反应(,)或技术选择验证有意义的差异表达蛋白;、选择某一个验证过的差异表达蛋白,采用其抑制剂来进一步研究它与抗大鼠肠肠黏膜损伤的关系,并探讨相关机制。  第一部分缺血预处理对大鼠肠缺血再灌注肠黏膜损伤的作用  目的:  建立大鼠肠肠黏膜损伤的模型。  证实有效的抗大鼠肠肠黏膜损伤的策略。  为下一步蛋白组学研究作准备。  结论:  肠系膜上动脉阻断,开放可致大鼠小肠黏膜损伤,提示肠肠黏膜损伤模型能被稳定复制。  肠系膜上动脉阻断,开放,一个循环的策略对大鼠肠肠黏膜损伤有保护作用,提示本研究中策略是有效的。  第二部分  缺血预处理抗大鼠肠缺血再灌注肠粘膜损伤的蛋白质组学研究  目的:  应用蛋白质组学方法分离、鉴定抗肠肠黏膜损伤的肠黏膜差异表达蛋白。  采用或方法进一步验证有意义的差异蛋白的表达。  初步探讨可能的肠保护机制。  方法:  动物模型  成年雄性大鼠%乌拉坦腹腔注射后仰卧固定于手术台,常规消毒,经腹正中切口,分离,微动脉夹夹闭,缝合切口。后经原切口进腹,取出动脉夹,恢复血供,后取标本。  策略  在长时间阻断之前,先用动脉夹夹闭,再松开,一个循环。  实验分组  只成年雄性大鼠随机分为组:  组:只分离。  组:分离,微动脉夹夹闭,缝合切口。后经原切口进腹,取出动脉夹,恢复血供,后取标本。  组:在长时间阻断之前,先用动脉夹夹闭,再松开,余同组。  观察指标  小肠黏膜组织差异表达蛋白:采用方法分离肠黏膜组织差异表达的蛋白;采用质谱法鉴定上述差异表达的蛋白。  验证:分析所有鉴定的差异表达的蛋白,对有意义的(与肠损伤有关)蛋白采用方法验证,观察其是否在小肠黏膜组织有表达。  统计学分析  所有计量数据以&#;表示,经统计软件包处理。多组均数比较使用方差分析,两两比较采用检验。分析采用软件。<认为差异有统计学意义。  结果:  小肠黏膜组织蛋白质组学研究  组、组和组分别有(&#;)、(&#;)和(&#;)个蛋白质点得到分离,组和组组间比较有个差异表达的蛋白,组和组组间比较有个差异表达的蛋白。经分析文献后,发现醛糖还原酶、醛脱氢酶、顺乌头酸酶等蛋白涉及抗氧化、抑制凋亡和改善能量代谢等功能,而这些功能与肠损伤的机制有关。  肠和肠对肠后肠黏膜醛糖还原酶表达的影响  通过文献复习发现醛糖还原酶与的心肌保护作用有关,因此推测它也可能与的肠黏膜保护作用有关。故本研究中对其在肠黏膜的表达进行了验证。组和组的肠黏膜醛糖还原酶的表达均显著小于组(<),而组显著高于组(<),与的结果一致。提示能下调醛糖还原酶的表达,而可上调其表达。  结论:  蛋白质组学研究揭示的肠保护机制可能与其上调醛糖还原酶、醛脱氢酶、顺乌头酸酶等一些具有抗氧化、抑制细胞凋亡及改善能量代谢的蛋白有关。  肠下调肠黏膜醛糖还原酶的表达,能减轻肠导致的肠黏膜醛糖还原酶表达的下调,提示醛糖还原酶可能介导抗肠肠黏膜损伤。  第三部分醛糖还原酶在缺血预处理抗大鼠肠缺血再灌注肠粘膜损伤中的作用  目的:  在第二部分研究基础上,进一步证实醛糖还原酶在缺血预处理抗大鼠肠缺血再灌注肠黏膜损伤中的作用。  初步探讨醛糖还原酶介导缺血预处理抗大鼠肠缺血再灌注肠黏膜损伤的作用的机制。  结果:  小肠组织光学显微镜下形态学及改良的&#;&#;评分变化  光镜下可见组肠黏膜完整,组和组损伤严重,组和组损伤轻微。组小肠改良的&#;&#;评分和组无统计学差异(>),但均显著高于组(<);组与组均显著高于组和组(<),两组间无统计学差异(>)。  小肠黏膜组织含量的变化  组小肠黏膜与组无统计学差异(>),但均显著高于组(<);组与组均显著高于组和组(<),两组问无统计学差异(>)。  小肠黏膜含量的变化  组小肠黏膜含量和组无统计学差异(>),但均显著高于组(<);组与组均显著高于组和组(<),两组间无统计学差异(>)。  小肠黏膜组织活性的变化  组小肠黏膜活性和组无统计学差异(>),但均显著高于组(<);组与组均显著高于组和组(<),两组间无统计学差异(>)。  结论:  醛糖还原酶介导缺血预处理抗大鼠肠缺血再灌注肠黏膜损伤的作用。  醛糖还原酶在缺血预处理抗大鼠肠缺血再灌注肠黏膜损伤中的作用与抑制肠黏膜氧化应激及中性粒细胞的聚集有关。
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