共输送阿霉素和基因的纳米载药系统的研究.pdf

将基因药物和化疗药物联合治疗肿瘤成为当前的一大热点，在基因治疗中选择合适的、低毒性、对人体和环境无害的载药体系，使DNA高效地转移至靶向部位并有效表达相关产物尤为关键。双子星表面活性剂是一类新型的表面活性剂，具有不同于传统表面活性剂的结构特征：两个极性头部和两条疏水性尾巴，并由一条连接基连接，因而具有很强的结合和压缩DNA的能力，并能将DNA输送至多种类型的细胞中。在本论文中，我们将四种不同结构的双子星表面活性剂(C162C16、C142C14、C142C6、C142C2)加入到中性脂质中，通过薄膜超声法制备成阳离子脂质体，进而对四种脂质体进行表征并对其转基因效率进行研究。另外，还对脂质体共输送阿霉素和基因时的转基因效率进行研究。完成的工作包括以下几个方面：　　（1）利用薄膜超声法制备四种含有不同结构双子星表面活性剂的阳离子脂质体，并对脂质体的外观形貌和稳定性进行表征。结果表明，脂质体为粒径110nm左右的均匀球体，zeta电位约在60mv左右，具有稳定的胶体性质。　　（2）通过琼脂糖凝胶电泳、粒径和电位测试考察脂质体与DNA的相互作用，圆二色谱（CD）研究脂质体DNA复合物形成过程中DNA构象的变化。圆二色谱结果显示，在NP比为1时，DNA的二级结构发生改变，圆二色谱的峰型发生改变，表明DNA与脂质体形成了稳定、紧凑的复合物，且在同一NP下，由C162C16组成的脂质体具有更强的结合和压缩DNA的能力。　　（3）通过琼脂糖凝胶电泳研究脂质体DNA复合物中DNA的压缩情况，通过荧光置换和排除反应研究四种脂质体结合DNA能力的差异，通过脂质体DNA复合物粒径电位的测试等试验对复合物进行稳定性的考察，通过MTT实验方法检测脂质体的材料毒性，通过EGFP和Luccmv两种质粒以A2780做转基因实验分别定性和定量研究脂质体的转基因效率。结果表明脂质体DNA复合物的zeta电位随阳离子脂质体的增加而增加，在低NP比时为负值，当NP比在1以上时变为正值。转基因实验结过表明，脂质体有效地将DNA转移到细胞内并且高效表达相关产物，且最佳转基因的NP比为1，凝胶电泳的结构显示，在NP比为1时脂质体DNA复合物并为完全将DNA压缩至脂质体内部，这种复合物的状态可能有利于DNA在细胞核中得有效的释放。　　（4）制备阳离子脂质体DNADOX复合物，考察其理化性质和转染效率。结果表明在NP=1、DNADOX=10时，形成了稳定的脂质体DNADOX复合物，并且在无血清的介质中，对A2780细胞具有较高的转染效率。　　综上所述，脂质体中双子星表面活性剂的结构特别是碳链的长度和其对称性对脂质体结合和压缩DNA起决定作用，碳链越长、对称性越高，结合和压缩DNA的能力越强，转染效率也越强。此外，这种脂质体可以被用作基因和药物的共输送载体。