应用分子细胞遗传学技术检测染色体数目及结构异常.pdf

目的：应用分子细胞遗传学技术检出人类染色体数目异常和结构异常。方法：用着丝粒特异的α卫星克隆作为染色体计数探针，通过缺口翻译引入生物素或地高辛等标记物。以此标记片段为探针，与中期染色体或间期细胞杂交，荧光显微镜镜检，荧光信号的数目就是染色体的个数。在全基因组水平检测染色体拷贝数的变化：以三体为模型，分别提取待检和对照标本的，通过扩增全基因组，或直接标记，取等量标记的混合，加抑制重复序列，与正常人的中期染色体杂交，根据荧光比率的变化来判断染色体拷贝数的变化。微缺失重复综合征：用位点特异的为探针。通过扩增及缺口翻译间接标记探针，和中期染色体或间期细胞杂交，荧光显微镜下细胞中荧光信号的数目就是相应位点的个数。一个信号提示微缺失；个信号正常；个信号为微重复。染色体易位：染色体涂染探针的制备：通过激光捕获显微切割分离单条染色体，经过两轮扩增，直接标记产物作为探针，与中期染色体杂交，对于相应的染色体进行全染色体描绘。结论：荧光原位杂交能在中期染色体或间期细胞水平检测染色体的数目或结构异常。不需要对待检标本进行培养，一次杂交可以检测所有染色体拷贝数的变化。