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文档简介
1、应用RT-PCR技术扩增得到水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarfvirus,RBSDV)浙江水稻分离物(Zj)基因组片段5(S5)的全长cDNA克隆并测定了它的全序列。RBSDV-Zj S5由3164个碱基组成，具有末端保守序列(+)5′-AAGTTTTTTTCACTC---GAGTGAATACAGCTAATGTC-3′，紧邻其末端保守序列，有一段特异性7个碱基的反向重复序列。S5编码链含有二个开放阅读框
2、(openreading fram，ORF)，分别编码 107.1kDa和26.5kDa的p5A和p5B蛋白。序列同源性比较发现，RBSDV-Zj S5 与 RBSDV 河北玉米分离物(RBSDV-Hbm)S5、Fijidisease virus(FDV) S5、Mal de Rio Cuarto virus(MRCV)S5的同源性分别为93.58％、49％和65.60％。 构建了S5的原核表达载体。经IPTG诱导，在大肠杆菌中
3、表达了RBSDV-S5编码的p5A和p5B 2种蛋白，并制备了相应的抗血清。Western-blot分析结果显示，用p5A的抗血清能够与RBSDV侵染的水稻叶片和纯化的RBSDV粒子蛋白发生反应；p5B的抗血清只能与RBSDV侵染的水稻叶片蛋白发生反应。表明RBSDV-Zj p5A是一种结构蛋白，而p5B是一种非结构蛋白。 构建了S5第二个编码框的植物表达载体pRR-S5BC，通过农杆菌介导法转入水稻品种秀水04中，经PCR、S
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