黄鳍鲷和鳜鱼胃蛋白酶原的分离纯化与酶的性质研究.pdf

本文以海水黄鳍鲷和淡水鳜鱼为材料，通过硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel离子交换以及Sephacryl S-200凝胶过滤等方法首次分别从其胃内纯化得到四种胃蛋白酶原，并对该酶的相关性质进行了比较研究，为胃蛋白酶的开发利用提供实验依据，也为这两种极具经济价值鱼类的消化生理研究打下基础。 SDS-PAGE显示纯化得到四种黄鳍鲷的胃蛋白酶原(PG-I，PG-Ⅱ，PG-Ⅲ和PG-Ⅳ)的分子量分别为36，32，32以及34kDa；鳜鱼的四种胃蛋白酶原(PG-I，PG-Ⅱ，PG-Ⅲ(a)及PG-Ⅲ(b))的分子量分别约为36，35，38以及34kDa。在pH2.0下，各胃蛋白酶原能在短时间内转化成为活性态的胃蛋白酶，它们的相对分子量均约为30kDa。 以酸变性牛血红蛋白为底物，四种黄鳍鲷胃蛋白酶的最适pH为3.0-3.5，最适温度为45-50℃。四种鳜鱼的胃蛋白酶的最适pH为3.5，最适温度为40-45℃。八种胃蛋白酶都属于酸性蛋白酶(天冬氨酸蛋白酶)，pepstat In是它们的有效抑制剂，但抑制效果略有不同。四种黄鳍鲷胃蛋白酶对酸变性血红蛋白的Km值分别为：8.7×10-8，1.0×10-7，8.6×10-8和7.3×10-8mOl/L，鳜鱼的Km值分别为：2.3×10-7，1.2×10-7，2.4×10-8和1.3×10-7mOl/L。 以黄鳍鲷PG-I和PG-Ⅱ制得的一次抗体作WesternblOt显示PG-Ⅱ能与黄鳍鲷四种蛋白酶都能发生强烈的免疫交叉反应，而PG-I除与P-I能发生强烈反应以及与P-Ⅱ有微弱反应外，与其他两种蛋白不反应。分析鳜鱼PG-I和PG-Ⅱ的N端前12个氨基酸序列，发现两者的同源性达92％。