酶法降低β-乳球蛋白含量的研究.pdf

1、本研究以本实验室自制的β-乳球蛋白为原料，以β-乳球蛋白改性及降低β-乳球蛋白含量为目标，优化了一种降解β-乳球蛋白的工艺，建立了一种针对检测乳清小肽类物质的凝胶电泳检测方法，并通过该方法对β-乳球蛋白降解产生的分子量在10kD及以下的小肽进行了定性检测，研究共分三部分。
　　 试验一，由于聚丙烯酰胺凝胶电泳技术在蛋白质分析中，对小分子质量多肽类样品分析效果不佳，针对该技术在小分子乳清肽方面的实际应用，比较了不同浓度的浓缩胶、分

2、离胶，控制电泳过程中的电压电流，以及研究不同染色方法的差异。最后优化建立了一种可用于快速检测10kD及以下的小肽的Tricine-SDS-PAGE方法。
　　 试验二，针对β-乳球蛋白耐蛋白酶水解，单酶对其水解能力有限，水解度不高的问题，研究了碱性蛋白酶分别与木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶组合对β-乳球蛋白进行双酶解，以水解度(DH)和可溶性氮含量(TCA-SN)表征其反应程度，确定碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶为最佳酶解组合。通过正

3、交实验，确定组合最佳反应条件为：酶活添加量为5310U/g的碱性蛋白酶先水解150min后，再加入酶活添加量为4500U/g的木瓜蛋白酶，反应到180min时，水解度可达36.21％。结合论文第一章的Tricine-SDS-PAGE方法对β-乳球蛋白水解液进行电泳分析，了解其降解规律。
　　 试验三，目前β-乳球蛋白改性技术鲜有联合使用，本研究尝试采用热处理与试验二中摸索出的双酶解反应相结合，两种改性技术联合使用。先通过单因素实