食品中5-羟甲基糠醛酶联免疫检测方法研究.pdf

分类号：密级：(秘密、机密、绝密)学校代码：研究生学号：食品中羟甲基糠醛酶联免疫检测方法研究专业名称：指导教师姓名：研究生姓名：申请学位级别：论文提交日期：论文课题来源：学位授予单位：食品科学方国臻教授吕燕彦工学硕士年月科技部“十一五”国家科技支撑计划天津科技大学摘要一羟甲基糠醛是食品中由还原糖经酸催化降解或通过美拉德反应而形成的一种物质。至今为止，虽然一羟甲基糠醛的毒性仍处于争议过程中，但是它的含量经常作为衡量碳水化合物含量丰富的食品在经过热处理或贮存时间长时质量破坏程度的一个指标。所以食品中一羟甲基糠醛的检测方法仍然受到人们的普遍关注。为了便于分析检测食品中的一羟甲基糠醛，本文建立了一种具有高灵敏度和高特异性的酶联免疫方法()。为了得到针对羟甲基糠醛有特异性的抗体，本研究分别利用羟甲基糠醛与琥珀酸酐，一代树状分子，二代树状分子和对苯二甲酸反应得到四种不同的半抗原，并与载体蛋白和结合制备了七种免疫原分别免疫新西兰大白兔，然后选出对于羟甲基糠醛特异性最强的抗血清，用—蛋白亲和柱纯化后得到特异性的抗体。为了检测实际样品中羟甲基糠醛的含量，必须研究具有好的灵敏度和波长下合适吸光度值(最大吸光度值为左右)的分析条件。经过优化酶标抗原稀释倍数，抗体包被量，缓冲溶液，离子强度及封闭液五项参数，得到方法工作的最佳条件，并建立标准曲线。该方法的灵敏度()和检出限()分别是／和／。本研究通过对样品前处理条件的优化，消除了样品基质影响，得到一套简单可行的样品处理方法。并将建立的方法应用于焙烤食品法式小面包，薯片，法式软面包和麦香鸡块中羟甲基糠醛的检测，样品检出限是／。在羟甲基糠醛标准品的添加浓度为，，／时，所有样品的回收率在％之间，且变异系数(=)均小于％。所得结果与高效液相色谱法()的检测值具有很好的一致性(=)，这表明所建立的方法具有很好的准确性，本研究建立的酶联免疫方法成本低廉，操作简便，适合于食品中一羟甲基糠醛的快速检测。关键词：羟甲基糠醛；抗体：酶联免疫；检测；食品