翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)在早孕小鼠子宫内膜围着床期的表达及意义.pdf

1、目的：翻译控制肿瘤蛋白(The translationally controlled tumor protein,TCTP)最初发现于肿瘤组织,后来又从其他组织中分离出来。TCTP广泛表达于动物、植物及酵母中,其基因序列高度保守。最初认为TCTP仅是一类生长相关蛋白,近年来有研究表明,TCTP具有多种生物学功能:可作为一种组织胺释放因子,参与细胞的生长、分裂和分化等;也可作为一种小分子热休克蛋白,以分子伴侣的形式保护细胞蛋白免受热休克损

2、伤;同时还可作为一种钙结合蛋白,在人类滋养层细胞中起钙运输的作用。另外,课题组在小鼠胚胎着床相关基因文库研究中发现TCTP基因在小鼠胚胎着床窗口期子宫内膜组织中呈现高表达。结合文献和前期研究工作,我们推测TCTP可能参与了胚胎着床和早期胚胎发育过程。鉴于TCTP在小鼠胚胎围着床期的研究还未见报道,本实验运用qRT-PCR、Western blot和免疫组化等方法对小鼠胚胎围着床期子宫内膜TCTP基因表达进行了分析,并采用子宫角注射实验初

3、步探讨了。TCTP基因的功能。这不仅有助于深入理解TCTP在胚胎着床中的作用,而且为探索胚胎着床的分子机制提供相关实验依据。
　　 方法：分别采用qRT-PCR法、免疫组化和Western blot法检测分析孕D1,D2,D3,D4,D5,D6和D7小鼠子宫内膜中TCTP mRNA和蛋白的表达情况。然后以假孕D4和D6的小鼠子宫内膜为对照,分别采用qRT-PCR、免疫组化和Western blot法检测TCTP在着床前(孕D4)

4、和着床后(孕D6)子宫内膜中的表达。最后对孕D3.5小鼠实施子宫角注射TCTP反义寡聚脱氧核苷酸,24 h后取出子宫内膜组织,再分别用qRT-PCR、Western blot和免疫组化法检测TCTP mRNA和蛋白表达的差异,同时观察术后孕D8小鼠子宫中胚胎数目和形态的变化以期探讨TCTP基因的功能。
　　 结果：qRT-PCR结果显示TCTP mRNA在孕D1～D5天小鼠子宫内膜中随孕天数的递增其表达量逐渐升高,孕D5(着床窗

5、口期)达到顶峰,随后孕D6和D7表达下降。Western blot和免疫组化检测结果与qRT-PCR一致。TCTP主要表达于子宫内膜的腔上皮、腺上皮和基质细胞中。TCTP mRNA和蛋白在正常妊娠小鼠着床前(孕D4)和着床后(孕D6)子宫内膜中的表达均高于假孕D4和D6小鼠(*P＜0.05)。在小鼠子宫角一侧注射TCTP反义寡聚脱氧核苷酸后,与另一侧注射TCTP正义寡聚脱氧核苷酸和蒸馏水相比,TCTP mRNA和蛋白的表达均受到抑制,并