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文档简介
1、该文应用分光光度法和荧光法研究了人胎盘碱性磷酸酶(Human PlacentalAlkaline Phosphatase,HPAP,E.C 3.1.3.1)在盐酸胍变性和复性过程中构象与活力的变化,旨在探讨其折叠机制.结果表明:①在HPAP的盐酸胍变性过程中,低浓度的盐酸胍(<0.5mol/L)使变性平衡态酶的发射荧光强度略有下降,最大发射波长不变,仍为340nm,酶活力增强;随盐酸胍浓度的增加,其荧光强度不仅不再下降,反而升高,酶逐渐
2、失活;当盐酸胍浓度为1.5mol/L时,其荧光光谱的最大峰位红移,酶活力迅速下降;当盐酸胍浓度为3.0mol/L时,最大荧光发射波长红移至最大,为365nm,荧光强度增加,此时酶活力丧失;当盐酸胍浓度增至4.0mol/L时,荧光强度仍继续增加,直至5.0mol/L才停止变化.酶变性过程的双相变化提示:酶变性过程中存在着三态,即天然态、变性中间态及变性态.②盐酸胍变性酶应用直接稀释法及空气氧化法复性,其最适复性条件如下:盐酸胍变性浓度3.
3、0mol/L、盐酸胍稀释浓度0.5mol/L、复性温度4℃、复性液pH9及复性时间24小时.在此复性条件下,测得变性酶的复性率为27%,荧光发射波长由365nm蓝移至358nm.③在复性过程中加入巯基乙醇,变性中间态酶仍可完全复性;变性态酶的复性率得到了明显的提高,复性率由27%增加到68.5%,荧光发射波长由358nm进而蓝移至347.5nm.结果提示:HPAP在变性过程中存在三态,即天然态、变性中间态及变性态;变性中间态酶可完全复性
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