多角体蛋白融合的家蚕膜蛋白BmSCF表达和研究.pdf

1、膜蛋白由于其自身的一些特性,它的表达一直是科学界的一个难题。家蚕BmSCF(Bombyx moil stem cell factor apoptosis response protein)是一个尚未见报导研究过的基因,通过保守结构域的分析推测它可能是SYS1家族的一员。这个家族的成员主要分布在胞内的膜组织,在成熟高尔基体与胞内其它内含体之间的蛋白转运作用;同时,在一些的研究报导中,该家族的一些蛋白作用于某些胞内信号途径,是一类广泛存在的

2、蛋白。
　　 本研究从家蚕组织cDNA中扩增得到BmSCF基因的ORF序列,并构建了融合有多角体基因的重组pET-32a(+)载体,在多角体与BmSCF之间引入了TEV蛋白酶切位点序列。在表达菌株Rossem内IPTG诱导表达后,经溶菌酶消化、离心和PBS洗涤即得到纯度在50％以上的重组蛋白的粗提物,再通过M亲和柱进一步纯化操作后得到纯度较高的重组蛋白。通过Western Blotting检测,纯化得到的蛋白即为目的融合蛋白。将

3、该蛋白进行AcTEV酶切消化,SDS-PAGE结果显示,相比阴性对照,酶切样品多出两个条带,其大小分别对应BmSCF和融合有pET-32a(+)载体标签的多角体蛋白的大小。然而稳定性试验显示,酶切下来的BmSCF蛋白很不稳定,极易降解。通过荧光定量PCR实验,我们检测了BmSCF在五龄家蚕的多个组织中表达情况,结果显示其在所检测的各个组织中都有表达,其中气门、脂肪体和丝腺组织相对表达量较高,头部、皮组织相对表达量较低。同时,本研究尝试性