体外CIK细胞的细胞因子表达谱研究.pdf
本文对体外CIK细胞的细胞因子表达谱进行研究,文中采用FICOLL分层液从健康人外周血中分离得到非黏附性淋巴细胞,采用抗CD3单克隆抗体包被瓶培养的方法,用细胞因子IFNΓ、IL1、IL2刺激和诱导使其分化成具有CD3CD56表型特征的CIK细胞。用流式细胞仪进行表型检测,以确定效应细胞的纯度和质量。用台盼蓝染色和FACS鉴定细胞的存活率,用MTT法检测CIK的肿瘤杀伤活性。以人GAPDH为参照基因,RTPCR定性和半定量检测在培养的第6、10、20和30D四个时期CIK细胞的IFNS、IL、TNF家族和TGF家族成员中的25个细胞因子的表达情况。用SYBRGREENI掺入的REALTIMEPCR技术进行定量,探讨了CIK细胞的细胞因子表达随着培养时间延长的变化,揭示了目标细胞因子与CIK细胞抗肿瘤和抗病毒作用间的关联。构建和克隆了新的细胞因子IFNΛ2全长CDNA。
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编号:20190224120442279 类型:共享资源 大小:2.67MB 格式:PDF 上传时间:2024-01-05
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- 关 键 词:
- CIK 细胞因子 基因表达 表达谱 肿瘤
- 资源描述:
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本文对体外CIK细胞的细胞因子表达谱进行研究,文中采用Ficoll分层液从健康人外周血中分离得到非黏附性淋巴细胞,采用抗CD3单克隆抗体包被瓶培养的方法,用细胞因子IFN-γ、IL-1、IL-2刺激和诱导使其分化成具有CD3+CD56+表型特征的CIK细胞。用流式细胞仪进行表型检测,以确定效应细胞的纯度和质量。用台盼蓝染色和FACS鉴定细胞的存活率,用MTT法检测CIK的肿瘤杀伤活性。以人GAPDH为参照基因,RT-PCR定性和半定量检测在培养的第6、10、20和30d四个时期CIK细胞的IFNs、IL、TNF家族和TGF家族成员中的25个细胞因子的表达情况。用SYBR Green I掺入的Real-TimePCR技术进行定量,探讨了CIK细胞的细胞因子表达随着培养时间延长的变化,揭示了目标细胞因子与CIK细胞抗肿瘤和抗病毒作用间的关联。构建和克隆了新的细胞因子IFN-λ2全长cDNA。
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