细菌右旋糖苷蔗糖酶基因的克隆与表达.pdf_第1页
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1、右旋糖酐(dextran)是一种以α(1,6)糖苷键为主的葡聚糖,具水溶性,可作为代血浆、金属离子载体和抗凝结剂等,在医药、食品、饲料工业中有广泛应用.右旋糖苷蔗糖酶(EC 2.4.1.5)是一种葡萄糖蔗糖酶(又叫葡萄糖基转移酶(Ec 2.4)),能催化蔗糖合成右旋糖酐.主要来源于乳酸菌属的链球菌(Streptococcus)、明串珠菌(Leuconostoc)和一些烟草植物细胞.天然菌株产酶量低,酶与粘稠的产物形成混和物,不利于酶的分

2、离纯化,制约了酶的结构功能研究和产物的应用.本研究的目的是通过基因工程手段得到高表达右旋糖苷蔗糖酶的基因工程菌株,从而用于右旋糖苷蔗糖酶结构与功能的研究,为右旋糖酐的生产和应用奠定基础. 本研究以肠膜明串珠菌Leuconostoc mesnteroides CGMCC 1.544基因组为模板进行PCR扩增获得了编码右旋糖苷蔗糖酶的基因,长约4.5kb,并将它克隆到表达载体pET28a(+)中,进行全基因序列测序,并将重组表达载

3、体pET28a(+)-dsrX转化到表达菌株BL21(DE3)中.SDS-PAGE分析表明重组蛋白成功表达,蛋白质分子量约为170kDa,BandScan软件分析其占菌体总蛋白的24.5﹪.本研究优化了重组蛋白的表达条件和SDS-PAGE电泳条件.检测到重组酶活性为8.8U/ml菌液.对重组酶的酶学性质做了研究,其最适反应条件是pH5.4、30℃和底物蔗糖浓度为10﹪.并将重组酶与天然酶的酶学性质做了比较,虽然重组酶在pH稳定性和热稳定

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