srGAP2 F-BAR结构域的结构生物学研究.pdf

BAR结构域超家族蛋白通过诱导膜的内陷和突起在细胞经历的多种多样的过程中都发挥着重要的作用这些过程包括细胞器生物发生,细胞分裂,细胞迀移,分泌和内吞。BAR结构域超家族可以分为三个不同的亚家族:“classical”BARs/N-BARs, F-BARs(Fes/CIP4 homology-BAR)和 I-BARs(Inverse-BAR)。经典(Classical) BAR和F-BAR亚家族蛋白在网格蛋白介导的内吞作用中诱导膜的内陷,而I-BAR亚家族蛋白Missing-in-metastasis(MIM)和IRSp53可以在体外和活细胞中诱导膜的突起,形成丝状伪足(filopodia)。虽然srGAP2(slit-robo GTPase activating protein2)含有一个N端F-BAR结构域,却能通过引起膜的突起来调控神经元的生长和迀移,这与I-BAR蛋白的功能存在相似之处。在本研究中,过表达srGAP2蛋白的F-BAR结构域,并进行纯化和结晶。srGAP2 F-B A R结构域蛋白晶体X射线衍射得到的分辨率为3.50 A,所属空间群为P21,这些结果有利于srGAP2 F-BAR结构域最终的结构解析并最终解释其诱导膜突起而不是膜内陷的原因。本研究中还通过转染HEK293T细胞获得真核表达的Rab4,5,7,8,11;与原核表达的F-BAR-1-357和F-BAR-1-480蛋白(带6xHisT a g)做N i柱pulldown,来探索R a b与F-B A R不同区段的结合性质。实验中证实,Rab4,5,7,8,11与 F-BAR-1-357和F-BAR-1-480均存在显著的相互作用。