黄连碱的结肠癌预防作用及其机制研究.pdf

目的：黄连碱是传统中药黄连的特征性成分之一，研究表明，其具有抗氧化、抗炎、抗菌、调节脂质代谢等多种生物学活性，但其抗肿瘤方面的作用尚不清楚。本论文旨在探讨黄连碱对型结肠癌的预防作用，并对其作用机制进行系统阐述，为临床应用提供实验依据。　　方法与结果：⑴建立了结肠癌的体内预防模型，通过对黄连碱预保护处理的裸鼠进行皮下接种结肠癌细胞，诱导移植瘤的发生，考察黄连碱的预防效果。实验将裸鼠随机分为组：正常对照组、肿瘤对照组、黄连碱组、黄连碱组和黄连碱组。药物组均在接种前给予灌胃黄连碱处理天，皮下接种后，每组继续灌胃给药相应剂量黄连碱天。实验结束时，与肿瘤对照组相比，药物组平均离体瘤重减少，平均荷瘤体积也明显减小。其中，高剂量黄连碱组（）的平均离体瘤重和平均瘤体积与肿瘤对照组相比差异显著，并且延长了肿瘤发生的潜伏期。此外，采用多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统检测裸鼠荷瘤天后的血清肿瘤标志物水平，结果表明，给药后，、和水平显著降低。实验过程中，黄连碱给药组裸鼠的体重虽均比正常对照组低，但重要脏器指数（心、肝、脾、肺、肾）并未受到影响，表明黄连碱长期给药对动物生长状况无不良影响。以上结果表明，黄连碱可以有效的抑制结肠癌的形成。⑵基于网络药理学的原理，依据反向药效团匹配方法预测了黄连碱的药理作用靶点。借助等生物分子功能软件靶点信息的注释，并运用网络可视化软件，构建“药物靶点疾病”网络。结果表明，黄连碱药理作用集中于代谢性疾病、癌症、免疫疾病和心血管疾病等。信号通路富集结果表明，黄连碱主要靶点蛋白与信号通路和癌症途径等信号通路相关。其中，、、和可能是黄连碱防治癌症的重要作用靶点。⑶利用法和台盼蓝实验分析了黄连碱对于细胞增殖的抑制作用。采用染色及荧光显微镜观察，黄连碱作用后，人结肠癌细胞的形态学变化，并利用流式细胞仪检测了细胞凋亡和细胞周期的分布。进一步采用和分析了黄连碱对凋亡、周期和生存信号通路相关基因和蛋白表达的影响。结果表明，黄连碱可以通过诱导凋亡来实现对肿瘤细胞生长的抑制作用，同时，高剂量黄连碱还能够造成期细胞周期阻滞。同时，黄连碱通过抑制、通路，遏制细胞生长；还诱发级联反应，引起外源性细胞凋亡；并且，对和复合物也有一定抑制效果。⑷采用法对荷瘤裸鼠肿瘤组织和肺脏组织中癌症相关基因进行分析。结果表明，黄连碱能够抑制肿瘤组织中原癌基因β和的表达，激活抑癌基因，同时下调通路相关基因的表达。在肺脏组织中，黄连碱同样可以抑制、的表达，下调通路的水平。　　结论：黄连碱具有较强的肿瘤预防作用，它能够抑制动物肿瘤的发生和发展。黄连碱能抑制体外肿瘤发生过程中与细胞增殖密切相关的蛋白及基因的改变，并诱导肿瘤细胞的凋亡。