壮药棵矮瓤乙酸乙酯部位化学成分研究及抗肝癌活性初探.pdf

1、目的:壮药棵矮瓤系菊科植物馥芳艾纳香Blumea aromatica(Wall.) DC.的干燥全草，别名黄药子、山风、香艾、大开门、艾纳香等，具有活血止痒、祛风消肿的功效，主要用于湿疹，皮肤瘙痒，风湿性关节炎等症。壮药棵矮瓤的化学成分主要有黄酮类、挥发油类、萜类、甾体类化合物等，目前只有少量文献对其化学成分和药理活性进行研究和报道。课题组前期对壮药棵矮瓤组分进行了活性筛选，发现乙酸乙酯部分具有较好抗肝癌活性，因此，本课题对其乙酸乙酯部

2、位的化学成分进行了研究，并对分离出来的新化合物进行了体外抗肝癌活性的初步筛选研究。
　　方法:称取壮药棵矮瓤药材50 kg粉粗粉，用500 L80％乙醇浸泡7d，过滤，药渣再用400 L80％的乙醇浸提2次，每次7d，合并3次乙醇提取液，旋蒸回收乙醇，得到3.12 kg壮药棵矮瓤乙醇提取物浸膏。热水混悬所得乙醇浸膏后用石油醚和乙酸乙酯依次萃取，回收有机相，得到602.78 g乙酸乙酯提取部位浸膏。多次反复采用硅胶色谱法、葡聚糖凝胶

3、色谱法、ODS、Sephadex LH-20、MCI等柱层析以及重结晶法等现代分离方法和精制纯化技术对壮药棵矮瓤乙酸乙酯部位提取物进行分离纯化，利用1H-NMR、13C-NMR、MS及文献参考等方法对分离提纯的单体化合物进行结构鉴定。
　　采用MTT方法检测新化合物4和14对肝癌细胞株(Hep3B和HepG2)的增殖作用。化合物4和14设置9个药物组(1、5、10、30、70、100、150，200μmol/L)、顺铂组(75μm

4、ol/L)以及空白对照组，分别于给药24 h、48 h、72 h后，根据试剂说明说操作，用酶标仪检测OD值，并计算肝癌细胞增殖抑制率和IC50值。
　　结果:壮药棵矮瓤乙酸乙酯部位共分离纯化得到16个单体化合物，分别鉴定为山奈酚(1)、5，7-二羟基-4’，6-二甲氧基黄酮醇(2)、木犀草素(3)、(20R)-2α，3α，20-三羟基-16β-乙酰孕甾烷(4)（新）、(20R)-5α-2α，3α，16β，20-四羟基孕甾烷(5)、

5、3，5，7，4’-四羟基-6-甲氧基黄酮醇(6)、β-谷甾醇(7)、β-胡萝卜苷(8)、3，5，3’，4’-O-四甲基槲皮素(9)、3’，4’，7-三甲氧基槲皮素(10)、艾纳香素(11)、没食子酸乙酯(12)、没食子酸(13)、7-hydroxyspruceanol(14)(新)、芹菜素(15)、香豆酸(16)。化合物4对Hep3B和HepG2在48 h的IC50分别为78.15、15.24μmol·L-1，72h分别为55.27μm

6、ol·L-1和126.64μmol·L-1。化合物14对Hep3B和HepG2在48 h的IC50分别为135.80μmol·L-1和223.78μmol·L-1，72 h分别为121.44μmol·L-1和193.82μmol·L-1。
　　结论:分离鉴定的16个化合物中，有10个化合物是首次从棵矮瓤中分离得到，它们分别是5，7-二羟基-4’，6-二甲氧基黄酮醇(2)、(20R)-2α，3α，20-三羟基-16β-乙酰孕甾烷(4

7、)（新）、(20R)-5α-2α，3α，16β，20-四羟基孕甾烷(5)、3，5，7，4-四羟基-6-甲氧基黄酮醇(6)、3，5，3’，4’-O-四甲基槲皮素(9)、3’，4’，7-三甲氧基槲皮素(10)、没食子酸乙酯(12)、7-hydroxyspruceanol(14)(新)、芹菜素(15)、香豆酸(16)。其中(20R)-2α，3α，20-三羟基-16β-乙酰孕甾烷(4)和7-hydroxyspruceanol(14)为新化合物;