版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
1、内切木聚糖酶是木聚糖降解酶系的重要组成部分,可有效水解木聚糖的β-1,4糖苷键,在造纸、食品、能源、饲料及环境等领域中具有广阔的应用。特别是来源于嗜热微生物的嗜热木聚糖酶,具有高温催化活性、独特的热稳定性等优点,近年来引起国际学术界和工业界的广泛关注。嗜热微生物Dictyoglomus turgidumDSM6724分离自俄罗斯堪察加半岛的乌宗火山,最适生长温度达75oC,其基因组中含有一个潜在的GH11家族β-1,4内切木聚糖酶基因,
2、其与Dictyoglomusthermophilum Rt46b.1的木聚糖酶XynB和Caldicellulosiruptor sp. Rt69 B.1内切木聚糖酶序列一致性分别为81.8%和69%,与其它木聚糖酶的相似性均在60%以下。我们预测该基因编码的木聚糖酶可能具良好的热稳定性,希望通过对其进行研究,发掘性质优良的新型木聚糖酶基因,并对其催化和热稳定性机制进行深入探讨。
本研究成功地克隆了Dictyoglomus t
3、urgidum DSM6724中的β-1,4内切木聚糖酶基因(Dtur_0243),并在大肠杆菌中进行了高效表达。经过菌体破碎、热处理和Ni-NTA亲和层析,获得了纯化的重组蛋白DtX,其纯化倍数为2.68倍,蛋白收率73.6%,纯蛋白产量达830mg/L。酶学性质表征显示,DtX可高效水解多种木聚糖底物,对山毛榉木聚糖底物的比活达825.4U。DtX具有良好的热稳定性和p H稳定性,最适反应温度为80oC,在85oC下的半衰期为300
4、min,在80oC保温10小时活性基本完全保持;最适pH为6.5,在pH4-10之间能维持60%以上的活力。
对Dt X的氨基酸序列进行分析显示,该酶含有两个结构域,由催化结构域(Catalytic Domain, CD)和碳水化合物结合结构域(Carbohydrate Binding Module, CBM)组成,中间通过一段由14个氨基酸组成的连接肽(Linker)连接。为研究该酶结构域之间的相互作用和结构-功能关系,我们
5、构建了Dt X的两种截短变体,分别是删除了C末端CBM结构域的DtX-CDL,以及删除了CBM结构域和Linker的Dt X-C D。两种截短突变体均以胞内可溶形式表达,且热稳定性及活性都比野生型发生了显著变化。在最适条件下,DtX-CDL及DtX-CD的比活性分别比野生型提高了42.8%和17.92%,达到1441.8U和973.3U;90oC时DtX-CDL半衰期为1400分钟,是野生型的55倍,而DtX-CD在同样温度的半衰期仅有
6、10分钟,比野生型降低了60%,这显示了CBM与Linker对酶性质的关键调节作用。在此基础上,我们通过对Dt X及其突变体进行了结构建模,发现Dt X-C D的催化结构域C末端最后一个β-片层与野生型相比明显缩短。这使其缺失了稳定酶二级结构的相关氢键网络,可能是造成其稳定性下降的主要原因。因此,在该区域引入额外的二硫键、盐桥等稳定作用,有可能进一步提高DtX的热稳定性。本论文克隆了Dictyoglomus turgidum DSM67
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 众赏文库仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 嗜热木聚糖酶的克隆、表达及酶学性质研究.pdf
- 耐冷及嗜盐木聚糖酶的基因克隆、表达、酶学性质及突变研究.pdf
- 40591.嗜热酯酶ape1547突变体的结构和酶学性质研究
- 内切壳聚糖酶的固定化及其酶学性质初步研究.pdf
- 嗜热真菌木聚糖酶1YNA的表达、突变和酶特性研究.pdf
- 嗜热木聚糖酶的基因克隆、蛋白表达及突变研究.pdf
- 酵母木聚糖酶的酶学性质研究.pdf
- 高产木聚糖酶嗜热真菌的筛选、固态发酵条件及酶学性质的初步研究.pdf
- 木聚糖酶生产及酶学性质的研究.pdf
- 链霉菌高产木聚糖酶及其酶学性质的研究.pdf
- 嗜热菌水聚糖酶基因的克隆、表达及酶学性质研究.pdf
- 15362.木聚糖酶1yna及其突变体在毕赤酵母中的表达和酶特性鉴定
- 嗜热拟青霉J18木聚糖酶的纯化和性质.pdf
- 耐热木聚糖酶的分子设计、重组表达及其酶学性质研究.pdf
- 嗜热真菌Thermomyces lanuginosus耐热木聚糖酶性质及应用研究.pdf
- 黑曲霉木聚糖酶的同源表达、发酵及其酶学性质研究.pdf
- 一种内切木聚糖酶的亲和纯化及性质研究.pdf
- 1株产碱性木聚糖酶菌株的筛选、产酶条件与酶学性质研究及其木聚糖酶基因的克隆表达.pdf
- 嗜热子囊菌内切葡聚糖醋I基因的DNA改组及酶学性质的研究.pdf
- 白蚁内切-β-1,4-葡聚糖酶基因的分子进化及其酶学性质的研究.pdf
评论
0/150
提交评论