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    • 简介:犬瘟热防控研究成就与进展犬瘟热防控研究成就与进展2011级生物科学20114083049张岳摘要犬瘟热CANINEDISTEMPER,CD是由犬瘟热病毒CANINEDISTEMPERVIRUS,CDV引起的一种急性、高度接触性传染病,流行范围广,发病率、致死率高,临床症状多样。CDV感染宿主广泛,所有日龄的犬都有可能感染。CDV属于副粘病毒科麻疹病毒属,有囊膜包裹的单股负链线性RNA病毒。CDV基因组编码6种蛋白,核衣壳(N)蛋白、磷(P)蛋白、基质膜(M)蛋白、融合(F)蛋白、血凝素(H)蛋白和大L蛋白。N、P和L蛋白与病毒复制有关;M蛋白与病毒的装配和出芽有关;F、H蛋白在病毒的侵染过程中起到关键作用。近年来,随着我国宠物业、毛皮经济养殖业的迅速发展,CD在我国的发病率有升高的趋势。论文对CDV分子生物学研究进展进行归纳总结。关键词关键词犬瘟热病毒,致病机理,分子生物学,致病机理,诊断检测,防御治疗犬瘟热CANINEDISTEMPER,CD)是由犬瘟热病毒CANINEDISTEMPERVIRUS,CDV引起的一种急性、高度接触性传染病,流行范围广,发病率及致死率高。临床症状多表现为“双相热”,眼鼻有黏液样分泌物,伴有腹泻,严重时出现血便,四趾肉垫增厚、角质化明显,神经症状多表现为抽搐。CDV感染宿主广泛,主要为食肉目动物,如犬科、鼬科、浣熊科、猫科和灵猫科等,但主要宿主为犬科动物,所有日龄的犬都有可能感染[1]。本文将近期CDV分子生物学研究进行归纳总结,为深入研究提供参考。犬瘟热病毒的分子生物学犬瘟热病毒的分子生物学CDV属于副黏病毒科麻疹病毒属,为有囊膜包裹的单股负链线性RNA病毒。呈圆形或椭圆形,有时呈长丝状。直径约为150NM,核衣壳呈螺旋对称。CDV只有1种血清型,根据血凝素H基因的多样性和病毒的毒力,分6种基因型ASIA1、ASIA2、EUROPE、USA、ARCTIC和VACCINE)。由于具有囊膜,CDV对有机溶剂敏感,对酸碱抵抗力弱,所以临床上常用消毒方法即可杀灭;CDV对热和干燥敏感,故该病多流行于冬春寒冷季节。CDV侵染不同类型的细胞,如上皮、间质、神经内分泌和造血干细胞,在不同组织和器官内造成持续感染,例如中枢神经系统CNS和淋巴组织[2]。感染犬通常表现为呼吸道、胃肠道以及其他组织和器官的多种临床症状,其中急性感染导致中枢神经系统脱髓鞘性脑脊髓炎(DEMYELINATINGLEUKOENCEPHALOMYELITIS,DL),并引起严重的全身免疫抑制和淋巴组织损耗[24]。基因组位于病毒粒子内部,被核衣壳蛋白包裹,基因组全长约16KB,基因组呈线性排列。从3’端至5’端的基因顺序依次为前导序列、N、P、M、F、H、L、前导(尾随)序列。3’端前导序列由55个核苷酸组成,5’端前导(尾随)序列由38个核苷酸组成。3’端前导序列和5’端前导(尾随)序列,被认为是启动、调节序列,指导基因的转录复制过程,同时又是CDV基因的转录终止、重起始序列。两序列之间包括6个非重叠基因区,编码六种基因蛋白核衣壳蛋白N、磷蛋白P、基质膜蛋白M、融合蛋白F、血凝素蛋白H、大蛋白L。N、P和L蛋白形成核糖核蛋白复合体RNP包裹病毒RNA,三种蛋白与病毒复制过程相关;两种表面糖蛋白F和H蛋白黏附在囊膜表面,形成纤突在病毒感染侵入过程中发挥重要作用;M蛋白则嵌合到囊膜内,在糖蛋白与核衣壳连接中起桥连作用,同时与病毒的装配和出芽有关。1、核衣壳、核衣壳NN蛋白及其基因蛋白及其基因核衣壳N蛋白基因由1683个核苷酸组成,有一个开放阅读框起始于53位~55位的AUG起始密码子,共编码523个氨基酸,分子质量为58KU。N蛋白基因由中间保守区和N末端、C末端的可变区组成[5]。N蛋白具有较高的保守性,能诱导体液免疫和细胞免疫。N蛋白的C末端1AA~80AA、337AA~358AA为抗原识别不可或缺的抗原表位,能诱导体液免疫产生抗体[6];N蛋白的9氨基酸寡肽281AA~289AA,TYRPROALALEUHISGLUPHE介导CTL反应,可能是CTL活性细胞作用靶细胞的抗原表位之一,对CDV引起的细胞免疫具有重要作用[78]。N蛋白和P、L蛋白与复制过程相关,P和L蛋白具有RNA聚合酶活性,随后N蛋白包裹病毒RNA,避免RNA降解[910],三者能够构成一个复制单位-核糖核蛋白复合体RNP。N蛋白上有特定的细胞核定位信号NLS和细胞核转出信号NES,NLS和NES为N蛋白核转运过程中所必需的[11]。YOSHIDAE等[6]通过间接免疫荧光实验IFA测得,缺失了N末端的1AA~80AA的N蛋白只4、融合、融合FF蛋白及其基因蛋白及其基因融合F蛋白基因长为2205个核苷酸,F蛋白分子质量为62KU,由F1和F2由两个亚单位蛋白组成,翻译时起始于461~463位的AUG到757位核苷酸,编码99个氨基酸为F2蛋白,分子质量为23KU,从758至2071位核苷酸,编码438个核苷酸为F1蛋白。F1蛋白嵌入囊膜,而F2蛋白位于囊膜外侧,F1蛋白和F2蛋白通过二硫键连接。F蛋白经蛋白酶裂解分为三个部分,缩氨酸信号肽、F2蛋白和F1蛋白[20]。裂解位点AQIHW在缩氨酸信号肽的C端,而RRQRR在F1蛋白的N端[2123],这两个裂解位点是高度保守的。缩氨酸信号区在前体蛋白F0被裂解成F1蛋白和F2蛋白的过程中起到至关重要的作用[24]。将ASIA1型和ASIA2型CDV的缩氨酸信号区分别与ONDERSTEPOORT株进行比对,氨基酸差异性分别为30%~32%和34%~35%,核苷酸序列差异性分别为15%~16%和18%~19%,说明该信号肽序列的多样性。F1蛋白具有融合功能,它包括N端的缩氨酸融合区FP、穿膜区TM和C端的CYTOPLASMICTAI区CT;F2蛋白具有附着功能。ASIA型CDV的F蛋白上有7个潜在的糖基化位点,其中4个分别在F2蛋白区的141位~143、173位~175和179位~181位和F1蛋白区的517位~519位[25]。另外3个潜在糖基化位点具有一致的氨基酸序列NXS/T,而且只在ASIA1型CDV中被发现。其中2个在缩氨酸信号区的62位~64位和108位~110位,最后一个则在个别ASIA1型CDVF1蛋白区的605位~607位[26]。F蛋白是位于CDV囊膜上的I型糖蛋白,以非共价键连接的同源三聚体形式存在,介导囊膜和细胞膜融合,使病毒具有在宿主体内扩散的能力,是感染性病毒粒子进入宿主细胞所必需的。VONMESSLING等[15]构建了3种重组质粒58UTRMFNP、58△F106和58UTRMFNP△F106。研究表明只缺失F蛋白缩氨酸信号FSP区不影响病毒感染的进程和结果;将MFUTR替换成NPUTR能够延长病毒在中枢神经系统中的感染进程;缩短MFUTR能够提高F蛋白转录水平,进而促进F蛋白的翻译和成熟病毒的产生。结果证明,麻疹病毒属病毒MF基因区通过控制F基因表达的转录过程来调节病毒的抗原性[27]。5、血凝素、血凝素HH蛋白及其基因蛋白及其基因血凝素H蛋白基因长为1946个核苷酸,有一个开放阅读框,起始于21位~23位ATG,终止于1833位~1835位的TAA,编码604个氨基酸,分子质量为76KU。在麻疹病毒属所有的结构蛋白基因中,H蛋白基因变异性最大。H蛋白是CDV囊膜表面主要的糖蛋白之一,为Ⅱ型糖蛋白,是构成囊膜纤突的主成分,决定了CDV的宿主特异性,并协助F蛋白使病毒囊膜与宿主细胞发生膜融合侵入宿主细胞。CDV的H蛋白首先吸附于宿主细胞SLAM受体上,随后H蛋白的构象发生改变,产生信号给F蛋白使病毒囊膜和宿主细胞发生膜融合,进而入侵宿主细胞。而且膜融合的程度和效率也依赖于H蛋白[2830]。H蛋白还决定CDV的生长特性和趋向性[29]。也是诱导机体产生中和抗体的主要蛋白之一,而且抗CDVH蛋白单克隆抗体MCAB保护力强于抗F蛋白MCAB[31]。CDVH蛋白有广泛的糖基化位点,但是野毒株与疫苗株H蛋白的潜在糖基化位点不同,野毒株为8个~9个,而ONDERSTEPOORT株为4个[3233]。形成大蚀斑的ONDERSTEPOORTOL株的H蛋白在60位氨基酸残基处与野毒株5804P的H蛋白存在差别,可能是5804P株多了几个潜在N糖基化位点,而且疫苗株H蛋白的分子量小于野毒株的H蛋白。由此可以推测减少的N糖基化位点可能对病毒感染性减弱起到关键作用,如果增加N糖基化位点可能最终导致疫苗免疫失败[15,3334]。OL疫苗株的H蛋白较5804P强毒株的H蛋白少了3个潜在连接N糖基化位点,导致了在309N~S、393T~A和456N~D氨基酸序列的改变。VONMESSLINGV等[29],研究证明了野毒株5804P的H蛋白上的7个标准的膜外N糖基化位点和一个非标准的N糖基化位点,其中5个可能被利用。将5804PH蛋白N糖基化位点突变,保留与OL株相同的3个糖基化位点,构建P5804PHOLLIKE重组质粒,经转染细胞表达,发现重组病毒致病性减弱,证明H蛋白的糖基化影响病毒的毒力;再使其H蛋白上的N糖基化位点全部缺失,构建P5804PH5KO和P5804PH6KO重组质粒,发现重组病毒不再引起发病,但是仍然具有引起免疫抑制的能力,这就证明了H蛋白N糖基化位点的减少,能够引起病毒感染性减弱而不影响免疫抑制反应。所以H蛋白的N糖基化位点对于病毒感染进程是必不可少的,并且影响病毒的感染性。6、大、大LL蛋白及其基因蛋白及其基因大L蛋白基因长为6573个核苷酸,有一个开放阅读框起始于23位的AUG,编码2161个氨基酸,5’端有22个核苷酸的非编码区序列
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      上传时间:2024-03-16
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    • 简介:【书名版次】普通病毒学第一版开本16开【作者】谢天恩,胡志红【出版社】科学出版社【简介】本书系统论述各类病毒的本质、结构与功能的相似形和特点,概括各方面共同的理论和概念,从分子水平、细胞水平、机体水平及群体水平阐明病毒与宿主相互关系的规律。内容包括病毒的分类与命名、形态结构、理化性质、复制、遗传与变异、进化、基因工程、朊病毒、病毒与肿瘤、病毒与细胞凋亡,人类致病性病毒、昆虫病毒、植物病毒等与宿主之间的相互关系。书后附有病毒专业术语汇编。全书内容翔实,丰富而新颖,既介绍各类病毒的基础知识、又反映病毒研究的最新发展动态和方向。本书适用于病毒学、微生物学专业硕士、博士研究生的专业教材,也可供从事病毒学、微生物学、医学、兽医、农业科技的人员参考。第三节病毒颗粒形态结构的对称性提要第四章病毒的复制前言第一节用于病毒复制研究的实验系统第二节病毒的复制周期第三节病毒的异常复制提要第五章病毒的遗传与变异前言第一节病毒的突变第二节病毒的重组第三节影响病毒表型的病毒间相互作用第四节病毒基因图的构建方法第五节病毒基因功能的研究方法第六节哺乳动物病毒表达载体提要第六章病毒的进化前言第一节有关病毒起源的学说第二节研究病毒分子进化的有关方法第三节DNA病毒的进化第四节RNA病毒的进化提要第七章病毒与肿瘤第一节肿瘤病毒概述第二节DNA肿瘤病毒第三节RNA肿瘤病毒第四节原癌基因与抑癌基因第五节细胞转化与肿瘤提要第八章病毒的持续性感染前言第一节病毒感染的类型第二节病毒持续性感染的机制第三节病毒持续性感染的实例
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    • 简介:病毒教学目标教学目标过程与方法1能提出与病毒相关的问题;2会查阅与病毒相关的书刊和其信息源3能制作有关病毒的剪贴报4会用多种形式表达、交流研究的方法和结果科学知识1知道一些由病毒感染的病的种类主要传播途径和预防措施2了解病毒是一类什么样的生物教学准备教学准备教师准备有关病毒的资料学生准备了解有关病毒的有关知识教学过程教学过程一、引入一、引入1教师提问关于由病毒感染引起的疾病,你知道些什么如何预防呢2学生交流自己收集的资料二、新授二、新授1流感的症状有哪些主要传播途径是什么如何预防2学生讨论指名回答3教师讲解4狂犬病的症状有哪些主要传播途径是什么如何预防5脊髓灰质炎的症状有哪些主要传播途径是什么如何预防6麻疹的症状有哪些主要传播途径是什么如何预防7病毒是一类什么样的生物8学生讨论后教师讲解三、拓展延伸三、拓展延伸(网上学习)1教师讲述关于病毒,你还知道些什么请回去以后在网上自主学习2学生交流学习收获和体会3课后作业(1)回去查资料了解人类与病毒的抗争史(2)利用作文、图画或小报的形式,说一说自己的学习体会和收获教学反思
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      上传时间:2024-03-15
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    • 简介:,,什么是禽流感禽流感为何感染人何为H7N9H5N1H7N9为何致死率高,2013年3月安徽、上海等地出现人感染H7N9禽流感疫情。截至2013年4月22日20时全国已确诊104人,21人死亡,13人痊愈,如何防治H7N9H7N9从哪里来H7N9会否人际传播,,,需掌握的内容,病毒与细菌的区别病毒的定义、分类病毒的形态结构病毒的感染与复制病毒致病机制病毒的检测病毒的预防与治疗,病毒的概念,病毒是一类比细菌更低等,体积更小、结构更简单的,超级寄生的,具感染性的非细胞型微生物。它能侵犯植物、动物和细菌、真菌等微生物。,病毒与人类的关系,所致疾病占感染性疾病的75传播力强病死率高与致畸、肿瘤和某些免疫性疾病有关其它(分子生物学、遗传学意义,经济领域关系),病毒的特点,体积小,能通过细菌滤器无细胞结构,只含有一种核酸严格的细胞内寄生,以复制方式繁殖有机体水平和细胞水平两种致病方式耐冷不耐热,对抗生素不敏感,病毒的形态,球状体(疱疹病毒、腺病毒)丝状体(烟草花叶病毒、流感病毒)砖形体(天花病毒)弹状体(水泡性口炎病毒、狂犬病毒)蝌蚪状体(噬菌体),球状,腺病毒,SARSCOV,丝状,新分离的流感病毒,烟草花叶病毒,砖形,痘病毒,子弹形,狂犬病毒,蝌蚪状,噬菌体,病毒的大小,测量单位为NM(NANOMETER),,,,,,,,,,,,,,,葡萄球菌1000NM),,,,,,,,,牛痘病毒300250NM,A,B,C,D,E,F,G,立克次体450NM,,,衣原体390NM,A、大肠杆菌噬菌体6595NM,B、腺病毒70NM,C、脊髓灰质炎病毒30NM,D、乙脑病毒40NM,E、蛋白分子10NM,F、流感病毒100NM,G、烟草花叶病毒200NM,病毒体的大小,病毒体,病毒体VIRION成熟的、具有感染性的病毒个体。,SARSCOV,病毒的结构与功能,基本结构基因组蛋白衣壳特殊结构包膜触须,,,,,,基因组GENOME,遗传物质,DNAORRNA病毒遗传变异的物质基础,编码蛋白,控制病毒性状,决定病毒复制及增殖。,SARSCOV基因组(单股正链RNA),图片来源MARRA,MA,ETALTHEGENOMICSEQUENCEOFTHESARSASSOCIATEDCORONAVIRUSSCIENCE2003MAY3030013991404,HIV1基因组(单正链RNA)HBV基因组(不完全双链环状DNA),,蛋白衣壳CAPSID,包裹或镶嵌在病毒核酸外面,由病毒基因组编码的蛋白质。保护核酸免受外界环境因素影响,同时有其特定的病毒生物学特性。如细胞亲嗜性,致病性,抗原性,毒性等。,病毒衣壳的对称性,病毒衣壳的结构特点,就是其排列的对称性。立体对称螺旋对称复合对称,立体对称,二十面体,五邻体,六邻体,,,螺旋对称,复合对称,,包膜ENVELOP,包裹在病毒核壳外的膜状结构,由脂质和糖蛋白组成。脂质细胞亲嗜性,决定病毒的特定侵害部位。糖蛋白吸附,结合细胞受体,介导细胞融合,特殊功能,如流感病毒的HA,NA。,有包膜病毒,CALIFORNIAENCEPHALITISVIRUSCORONAVIRUSCYTOMEGALOVIRUSCMVEASTERNEQUINEENCEPHALITISVIRUSEEEVEPSTEINBARRVIRUSEBVHANTAVIRUSHEPATITISBVIRUSHBVHEPATITISCVIRUSHCVHEPATITISDELTAVIRUSHDVHERPESSIMPLEXVIRUS1HHV1ROTAVIRUSRUBELLAVIRUSSAINTLOUISENCEPHALITISVIRUSSMALLPOXVIRUSVARIOLAVACCINIAVIRUS,HERPESSIMPLEXVIRUS2HHV2HUMANIMMUNODEFICIENCYVIRUSHIVHUMANTLYMPHOTROPHICVIRUSHTLVINFLUENZAVIRUSFLUVIRUSMOLLUSCUMCONTAGIOSUMPAPILLOMAVIRUSHPVPOLIOVIRUSRHINOVIRUSVARICELLAZOSTERVIRUSHHV3VENEZUELANEQUINEENCEPHALVIRVEEVWESTERNEQUINEENCEPHALITISVIRUSWEEVYELLOWFEVERVIRUS,无包膜病毒,ADENOASSOCIATEDVIRUSAAVADENOVIRUSPARVOVIRUSB19COXSACKIEVIRUS–ACOXSACKIEVIRUS–BECHOVIRUSHEPATITISAVIRUSHAVHEPATITISEVIRUSHEVNORWALKVIRUS,,触须ANTENNA,,腺病毒的触须可凝聚和毒害宿主细胞。,病毒的化学组成,核酸DNA或RNA,决定病毒的感染性,复制特性,遗传性蛋白质结构蛋白和非结构蛋白,保护病毒核酸,参与病毒感染过程,抗原性,构成病毒的酶,毒素作用糖类,脂类包膜成分,抗原性,毒性,信号传导,病毒的分类,核酸类型DNA病毒RNA病毒结构特点双链单链正链负链有包膜无包膜,病毒的分类,传播方式和感染部位虫媒病毒肠道病毒呼吸道病毒肝炎病毒性传播病毒,亚病毒,亚病毒比病毒更小,更简单的病毒治病因子。卫星病毒单链RNA(拟病毒)亚病毒类病毒单链环状RNA分子朊病毒蛋白质,,病毒与细菌的比较,课堂作业疾病与病原体,1关于热原质,错误的描述有A本质是脂多糖B通过高压蒸汽灭菌(121℃20MIN)可以破坏C主要由革兰阴性菌产生D是细菌的合成代谢产物E采用高温干烤可以破坏2细菌缺乏下列哪一种结构仍可存活A细胞壁B细胞膜C细胞质D核质E以上均可3名词解释HOSPITALACQUIREDINFECTION4名词解释PHAGE5简答正常菌群什么情况下会变成条件致病菌6问答细菌的毒力包括哪些,第二章,病毒的复制与变异病毒的培养,病毒的复制,病毒借助宿主细胞提供原料和能量,完成自我复制,产生子代病毒。即病毒的增殖。病毒的复制步骤(复制周期)可大致分为吸附ADSORPTION穿入PENETRATION脱壳UNCOATING生物合成BIOSYNTHESIS装配ASSEMBLY释放RELEASE,1吸附病毒表面蛋白与宿主细胞表面受体特异性结合。,包膜糖蛋白或衣壳蛋白与细胞表面受体特异性结合,决定了病毒嗜组织特异性。,2穿入包膜融合,病毒胞饮,,3脱壳,宿主细胞溶酶体酶破坏病毒衣壳,释放病毒核酸,4生物合成,复制病毒核酸,转录MRNA,翻译病毒蛋白质。此过程不存在病毒体,只有病毒元件,称为隐蔽期。DNA病毒DNA复制,合成蛋白质RNA病毒/链双链复制中间体逆转录病毒逆转录为DNA,整合至宿主染色体,逆转录,逆转录REVERSETRANSCRIPTION以RNA为模板合成DNA的过程,即RNA指导下的DNA合成。,HIV逆转录过程,HIV逆转录酶活性RNA依赖的DNA聚合酶活性RNASEH活性DNA依赖的DNA聚合酶活性但没有3’5’外切酶活性(无纠错功能,突变率高),病毒基因组整合至宿主细胞染色体,HIV整合酶活性DNA外切酶活性双链内切酶活性连接酶活性,,装配病毒核壳蛋白与核酸包裹,形成病毒体释放无包膜病毒裂解细胞,子代病毒释放有包膜病毒通过出芽方式,释放子代病毒。带走细胞核膜或细胞质膜,作为自身包膜成分。,病毒生长曲线,,,请观看HIV1病毒复制周期FLASH,注意寻找病毒复制步骤。,,,病毒的异常增殖,顿挫感染ABORTIVEINFECTION缺损病毒DEFECTIVEVIRUS病毒干扰VIRALINTERFERENCE,病毒的变异,病毒变异类型突变基因重组表型重组,,,,,突变,突变的本质突变类型条件致死性突变株(温敏突变株)缺陷型干扰突变株宿主范围突变株耐药突变株突变株与变异株概念,,基因重组,两个病毒基因组之间发生核酸水平上的互换和重新组合,形成兼有两亲代病毒特性的子代病毒。此过程为基因重组。重组时核酸分子断裂,交叉连接,引起核酸分子内部重新排列。分节段的RNA病毒基因组之间,两个病毒株交换基因片段,称为重配。,,表型重组,两种病毒感染同一细胞时,各自产生不同的结构蛋白和非结构蛋白,在子代病毒装配时,出现互换衣壳和包膜蛋白时,表型会发生混合和交换。,,人工定向变异,改变宿主亲嗜性冷适应株或温度敏感株基因重组基因改造突变,病毒的抵抗力,物理因素化学因素,病毒的培养,易感动物、鸡胚或易感细胞,CPE(CYTOPATHICEFFECT),D0,D15,D8,D5,D4,D3,D2,D1,D16,,,,,,,,,思考题,什么是病毒病毒有那些特点简述病毒的基本结构。以HBV病毒为例,试述病毒的复制周期。解释病毒的干扰现象、缺陷病毒、顿挫感染、亚病毒、朊粒。,THEEND,
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    • 简介:,病毒学研究方法,病毒培养方法形态学研究方法免疫学血清学方法生化、生物物理与分子生物学方法,1、体外细胞培养技术二十世纪中期动物细胞体外培养技术的建立,极大推动了动物病毒学研究的发展原代成纤维细胞建株成纤维细胞上皮细胞,原代成纤维细胞建株成纤维细胞上皮细胞,PIGKIDNEYCELLSIBRS2GROWINGONCYTODEX1,VEROCELLSGROWINGONCYTODEX1,人二倍体细胞培养,接种细胞24小时,接种细胞72小时,收毒第3天,,,,,,MDCK细胞,VERO细胞培养,接种细胞24小时,接种细胞48小时,接种细胞60小时,VERO细胞接种PEDV病毒病变过程照片,VERO细胞培养,ST细胞,接种细胞24小时,接种细胞48小时,ST细胞,接种伪狂犬病毒病变过程照片,MARC145细胞,接种细胞24小时,接种细胞38小时,接种细胞50小时,MARC145细胞,接种PRRSV病毒病变过程照片,PK15细胞,接种细胞24小时,接种细胞36小时,接种细胞48小时,PK15细胞,接种TGEV病毒病变过程照片,MDCK细胞,接种细胞24小时,接种细胞48小时,接种细胞72小时,MDCK细胞,接种H9N2病毒病变过程照片,细胞培养技术在病毒学中的应用病毒生物学定量病毒克隆化获得遗传均一的病毒方便地生产病毒同步化研究病毒复制的过程,提高实验的可重复性,病毒的定量并非所有的病毒颗粒都有感染活性有感染活性的病毒颗粒一般仅占总数的几百到几万分之一,病毒的定量病毒的定量分为物理颗粒的数量有感染活性的颗粒的数量有感染活性的颗粒的数量,更有生物学意义特称为或TITRE病毒的效价TITERTITRE,病毒效价的测定(之一)空斑测试(PLAQUEASSAY)用稀释的病毒液感染单层细胞,盖上琼脂,限制病毒的流动病毒感染造成局部细胞死亡或病变,形成肉眼可见的“斑”或“空斑”(噬菌体中噬菌斑)根据“斑”的数量和稀释倍数可以统计病毒的效价,病毒空斑,未感染的细胞被染成红色,病毒空斑,显微镜下的空斑带有LACZ基因的重组病毒形成的空斑,病毒效价的测定(多孔板终点稀释法)病毒逐级稀释接入长有细胞的孔中,培养后观察各孔中细胞是否被感染,计算TCID50(TISSUECULTURE50INFECTIONDOSE一半的孔被感染时的稀释度),病毒效价的相对性用不同的细胞株去测定病毒的效价,可能会得到完全不同的效价数据需要标准化,病毒感染复数MULTIPLICITYOFINFECTION,MOI,病毒感染复数病毒感染细胞时平均每个细胞的病毒数,1万个细胞,为了保证99细胞感染病毒,至少有一个病毒感染,共需要多少病毒病毒感染细胞是随机的独立事件群体感染时,有的细胞被1个病毒粒子感染,有的被2个病毒粒子感染有的可能没有被病毒感染病毒感染细胞的情况,符合泊松分布PKEMMK/K其中M病毒感染复数,PK细胞被K个病毒感染的几率所以未被感染的细胞的比率P0EM被1个病毒感染的细胞比率P1EMM被2个病毒感染的细胞比率P2EMM2/2,,问题PFU与TCID50间的换算关系是1TCID5007PFU为什么,感染复数对病毒感染的实验结果有很大影响低感染复数时感染不同步高感染复数时病毒易产生变异不同的实验要求不同的感染复数,2、活体培养方法仍有许多病毒缺乏可供其复制的离体细胞培养系统如乙肝病毒,大多数植物病毒活体系统还可提供病毒与宿主相互作用的信息免疫反应致病机理治疗方法最常用活体系统之一鸡胚,鸡胚用于繁殖病毒、制备疫苗,鸡胚的构造和病毒培养,流感病毒,单纯疱疹病毒,病毒在鸡胚中的繁殖流感病毒单纯疱疹病,活体培养方法免疫缺陷动物SCID小鼠)对病毒感染无免疫排斥可接入人的免疫细胞等,使之具有人的免疫功能,用于研究HIV、疱疹病毒等与免疫系统的相互关系SCIDSEVERECOMBINEDIMMUNODEFICIENT,二、病毒形态学研究方法1、光学显微镜病毒细小,一般光学显微镜下不可见但有时可见病毒聚集,或衍生形成的包涵体,狂犬病毒包涵体,病毒包含体,昆虫杆状病毒的多角体,2、电子显微镜,噬菌体负染,透射电镜疱疹病毒感染细胞的超薄切片,透射电镜,新的电镜技术冰冻电镜低辐射电镜,冰冻电镜图像重构技术,冰冻电镜解析病毒结构,一种绿藻病毒的冰冻电镜重构,冰冻电镜解析病毒结构,质型多角体病毒冰冻电镜图,X射线晶体学通过X射线衍射研究病毒中原子、分子的排列,研究可形成晶体的病毒,荧光显微镜,新的荧光显微镜技术用于实时跟踪AAV入侵的过程,三、免疫学方法病毒学与免疫学是密切相关的免疫技术在病毒学中的应用利用抗原抗体反应的专一性进行病毒的检测病毒的鉴定分型病毒的定量特异性抗体的监测,常用免疫学技术血球凝集试验补体结合试验酶联免疫吸附试验(ELISA)免疫印迹试验(WESTERNBLOT)免疫荧光组织化学免疫胶体金标记免疫共沉淀,血球凝集试验某些病毒具有与血细胞表面多糖分子结合的蛋白(基团)。如流感病毒,风疹病毒,补体结合试验游离的补体可导致抗体包被的红血球破裂溶血但当有抗原抗体复合物存在时,补体就会与抗原抗体复合物结合,可避免溶血。由此可检测是否有特定的抗原或抗体存在,补体结合试验测定特定抗原的量抗体(抗血清)与待测抗原样品混合加入一定量的补体加入包被抗体的红血球测定溶血,酶联免疫吸附试验(ELISA)用酶标记的抗体灵敏地定量检测病毒抗原,ELISAENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYA双抗夹心B间接法,ELISA检测抗体,A抗原E标记酶S低物,四、生化、生物物理与分子生物学方法生物物理方法离心技术病毒颗粒分离纯化病毒颗粒的大小、沉降系数测定生物化学方法病毒颗粒生物化学组分分析蛋白质分析核酸分析其它组分分析,分子生物学方法举例病毒反向遗传学方法,从合成基因到合成病毒人工合成脊髓灰质炎病毒,
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    • 简介:HIV1病毒载量检测及质量保证指南_____________________________________________________________________1本指南由中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心艾滋病参比实验室组织有关专家撰写,由中国疾病预防控制中心批准执行。编写主持人编写主持人蒋岩编写人员编写人员潘品良蒋岩李敬云钟平尚红李太生审核咨询专家及技术人员邵一鸣康来仪朱效科王佑春汪宁朱红郭志宏季阳刘海林肖瑶邱茂锋马春涛编写单位编写单位中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心参编单位参编单位中国人民解放军军事医学科学院上海市疾病预防控制中心中国医科大学北京协和医院技术顾问MIKEUSSERYHAOZHANG美国国立卫生研究院过敏及传染病研究所JAMESWBREMER美国RUSH大学医学中心VQA实验室TREVERPETER克林顿基金中国艾滋病防治项目实验室专家DONALDJBRAMBILLA美国华盛顿大学新英格兰研究所FRANCISFMY加拿大公共卫生局疾病预防控制中心国家免疫学实验室HIV1病毒载量检测及质量保证指南_____________________________________________________________________3HIV1HIV1病毒载量检测及质量保证指南(病毒载量检测及质量保证指南(20072007版)版)目录目录第一章总则第二章实验室设置第三章样品的采集、处理、保存、运输第四章常用HIV1病毒载量检测方法简介第五章室内质量控制第六章外部质量控制第七章实验室生物安全附表1常见问题分析和处理附表2HIV1病毒载量检测样品送检及接收单附表3HIV1病毒载量检测能力验证样品接收专用单附表4HIV1病毒载量检测报告单附表5HIV1病毒载量能力验证结果专用报告单(NASBA附表6HIV1病毒载量能力验证结果专用报告单(RTPCR参考文献缩略语
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    • 简介:病毒,病毒能感染所有生物,如细菌、真菌、植物和动物。人类80%的疾病是有病毒引起的。,各种病毒,甲型H7N9病毒,流行性感冒病毒,艾滋病毒,禽流感病毒,乙型肝炎病毒,烟草花叶病毒,SARS病毒,番茄病毒,病毒引起的疾病,麻疹是由病毒感染引起的;流行性感冒是由于感染了流行性感冒病毒;百日咳是由百日咳杆菌引起的儿童呼吸道传染病;肝炎病毒会使人患肝炎;口蹄疫病毒会侵害动物,人被传染后会中毒发病;,由病毒感染引起的疾病,鼻炎,鼻窦炎,肺炎,气管炎,支气管发炎感冒时间长了,就会导致以上的疾病,预防措施,病毒一般通过空气、饮食、体液或接触等途径进行传播。因此我们要养成良好的卫生习惯。,春季学校常见传染性疾病及预防措施,常见传染性疾病流行性感冒、麻疹、水痘、腮腺炎、风疹、猩红热等,预防措施1、合理膳食,增加营养,多饮水,摄入足够的维生素,积极参加体育锻炼,增强体质;2、教室、办公室、宿舍等每天应开窗通风,,保持室内空气新鲜,并对教室、办公室、宿舍等公共场所的室内空气和地面,墙壁、课桌椅等表面进行定期消毒工作;3、养成良好的卫生习惯,饭前便后要洗手、不喝生水、不吃不洁净的食物,把好“病从口入关”。合理安排好作息,做到生活有规律;注意不要过度疲劳,防止感冒,以免抗病力下降;4、做好相关传染病疫苗接种工作。5、一旦发现传染病病人,及时报告疾病预防控制机构。,病毒是一类怎样的生物体,病毒是一种没有细胞结构的微生物。结构简单,所有病毒都由保护病毒蛋白质外壳和由遗传物质组成的内核组成,没有细胞结构;它们必须寄生在其他生物的活细胞里,病毒才能繁殖,繁殖出的新病毒从细胞中释放出来,同时将细胞摧毁。离开了活细胞病毒就会变成结晶体失去生命活动;病毒只能侵入或感染某些特定物种中的某些细胞,如大多数流感病毒只能侵染人的鼻和咽喉部。烟草花叶病毒只能侵染烟草的叶部。病毒个头微小,观察病毒大小用的是高分辩率电子显微镜,放大几万到几十万倍直接测量。,“病毒体”的五种形态,1、球形。大多数人类和动物病毒为球形,如脊髓灰质炎病毒、疱疹病毒及腺病毒等。2、丝形。多见于植物病毒,如烟草花叶病病毒等。人类某些病毒(如流感病毒)有时也可形成丝形。3、弹形。形似子弹头,如狂犬病病毒等,其他多为植物病毒。4、砖形。如痘病毒(无花病毒、牛痘苗病毒等)。5、蝌蚪形。由一卵圆形的头及一条细长的尾组成,如噬菌体。,根据病毒寄生的细胞不同,将病毒分为三类,,动物病毒,植物病毒,细菌病毒(又叫噬菌体),防治病毒的方法1药物治疗。2接种疫苗。3通过切断病毒传播途径防止病毒的传播。,课外拓展,查阅资料,了解人类与病毒的抗争史。制作有关病毒的剪贴报。,
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    • 简介:病毒学VIROLOGY,病毒的基本性状,3000BC,埃及孟非思壁画中长老患小儿麻痹症。,什么是病毒,病毒是一类体积微小、结构简单、只含有一种类型的核酸、严格细胞内寄生的、对抗生素不敏感,而对干扰素敏感的非细胞型微生物。,病毒与其它微生物的区别,第一节病毒的形态、结构与化学组成,病毒体VIRION具有一定形态结构和感染性的完整病毒颗粒。,一、病毒的大小和形态大小50-250NM左右。形态球形、杆状或丝状、砖形、子弹形、蝌蚪形等。,,,,,,,,,,,,,,,葡萄球菌1000NM),,,,,,,,,牛痘病毒300250NM,A,B,C,D,E,F,G,立克次体450NM,,,衣原体390NM,A、大肠杆菌噬菌体6595NM,B、腺病毒70NM,C、脊髓灰质炎病毒30NM,D、乙脑病毒40NM,E、蛋白分子10NM,F、流感病毒100NM,G、烟草花叶病毒,二、病毒的结构和化学组成基本结构NUCLEOCAPSID辅助结构VIRALENVELOPE,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,病毒体结构模式图,,,,壳粒,,,衣壳,,,核心(核样物),,,,,核衣壳,,包膜,,包膜病毒,,,,,包膜子粒(刺突),化学组成-病毒核酸,分子量差别显著3KB-400KB多种形式存在RNA或DNA;不同形式复制;病毒基因组可相互重叠,转录的RNA前体可以多种方式拼接;与真核细胞基因结构相似,有内含子及非编码区;具有感染性。,化学组成-病毒蛋白质结构蛋白CAPSID,ENVELOPEPROTEIN非结构蛋白酶与病毒复制有关的酶;与致病有关的酶;调控蛋白HIVTAT,REVETC,病毒衣壳病毒20面体立体对称模式图,不同病毒核酸结构不同,壳粒数目和排列也不相同。根据壳粒的排列方式称为对称,病毒结构由以下几种对称型,ICOSAHEDRALSYMMETRY(二十面体立体对称型),,病毒衣壳螺旋对称模式图,病毒衣壳复合对称模式图,,衣壳的主要功能保护病毒核酸参与感染过程具有抗原性,病毒衣壳电镜照片,病毒包膜电镜照片,包膜的主要功能维护病毒体结构的完整性与病毒入侵有关具有抗原性,第二节病毒的增殖,一、VIRUSREPLICATIONCIRCLE吸附ADSORPTION穿入PENETRATION脱壳UNCOATING生物合成BIOSYNTHESIS装配与释放ASSEMBLYANDRELEASE,1吸附ADSORPTION(几分至几十分钟),23PENETRATION、UNCOATING,融合有包膜病毒胞饮无包膜病毒直接穿入,,在溶酶体酶作用下,脱壳。,4生物大分子合成BIOSYNTHESIS(隐蔽期),6大类型双链DNA病毒单链DNA病毒单正链RNA病毒单负链RNA病毒双链RNA病毒逆转录病毒区域DNA病毒核内(除痘病毒)RNA病毒胞质(除流感病毒及逆转录病毒),生物合成(以DSDNA为例),亲代DNAMRNA早期蛋白(酶)(功能蛋白)子代DNA子代MRNA晚期蛋白(结构蛋白)子代病毒,,,,,,,,RNA病毒的生物合成,单正链RNAMRNA结构和非结构蛋白中间复制体子代核酸单负链RNA正链RNA蛋白质中间复制体子代核酸(依赖RNA的RNA多聚酶),,,,,,,,逆转录病毒,病毒RNA逆转录酶RNADNA中间体双链DNA整合入细胞染色体子代病毒MRNA和子代核酸,,,,,57ASSEMBLY,MATURATION,ANDRELEASE,装配(ASSEMBLY),释放(RELEASE),裂解(DISINTEGRATION)NAKEDVIRUSCAUSETHEHOSTCELLLYSIS出芽(BUDDING)ENVELOPEDVIRUSES,二、病毒的生长曲线,1、隐蔽期2、对数生长期3、细胞死亡期,缺陷病毒因病毒基因组不完整或基因发生改变,而不能进行正常增殖所产生的子代病毒。缺陷干扰颗粒DEFECTIVEINTERFERINGPARTICLE,DIP缺陷病毒,具有干扰同种成熟病毒体进入细胞的作用。辅助病毒可以辅助缺陷病毒完成正常增殖的病毒。,三、与病毒增殖有关的异常现象,,顿挫感染病毒进入宿主细胞后,如细胞不能为病毒增殖提供所需要的酶、能量及必要的成分,则病毒在细胞中不能合成本身的成分,称为顿挫感染。非容纳细胞、容纳细胞。干扰现象两种病毒感染同一种细胞,常发生一种病毒抑制另一种病毒复制的现象,称干扰现象。机制IFN、受体、DIP。,第三节理化因素对病毒的影响,一、物理因素的影响温度大多数病毒耐冷不耐热。在-70℃(数月)或-196℃(数年)条件下,病毒感染性可保持数月至数年。一般加热60℃经30MIN或100℃数秒钟可使大多数病毒灭活。PH值多数病毒在PH6~8范围内稳定。射线和UV射线使核苷酸链发生致死性断裂;UV则是在病毒的多核苷酸上形成双聚体如胸腺核苷与尿核苷,抑制病毒DNA或RNA的复制。,二、化学因素的影响脂溶剂乙醚、氯仿、去氧胆酸盐等脂溶剂可使有包膜病毒的包膜脂质溶解而灭活病毒,失去吸附能力。消毒剂过氧乙酸、甲醛等均能使大多数病毒灭活。与细菌相比,病毒对消毒剂抵抗力强,特别是无包膜的小型病毒。中草药板蓝根、大青叶、大黄、贯仲和七叶一枝花等对某些病毒有一定的抑制作用。,第四节病毒分类动物病毒,DNA病毒,RNA病毒,亚病毒一类比病毒还小的、结构更简单的微生物。包括类病毒和PRION。,病毒的感染与致病机制,,第一节病毒的传播方式和感染类型,,一、病毒感染,来源感染途径传播方式水平传播垂直传播,二、病毒感染的类型,机体感染病毒后1按有无临床症状,可分为隐性感染和显性感染。2依病毒感染后在机体内滞留的时间长短,分为急性感染和持续性感染。3持续性感染根据发展和预后又分为慢性感染、潜伏感染、慢发病毒感染和急性感染的迟发并发症。,(一)隐性病毒感染与显性病毒感染,1隐性病毒感染病毒进入机体后不引起临床症状的感染,对组织和细胞的损伤不明显。相关因素病毒毒力弱、机体防御能力强、病毒种类、病毒的性质。病毒仍可在体内增殖并向外界播散病毒,可成为重要的传染源。隐性感染者虽不出现临床症状,但仍可获得免疫力而终止感染。病毒携带者有部分隐性感染者一直不产生对此种病毒的免疫力叫病毒携带者,无症状,但病毒可在体内增殖并向外界排泄播散,也是重要的传染源。,有的病毒如天花病毒、麻疹病毒等进入机体,到达靶细胞后大量增殖,使细胞和组织损伤,机体出现明显的临床症状,这样的感染称为显性病毒感染或临床感染;按症状出现早晚、持续时间的长短以及病毒在体内持续存在状态等显性感染又分为急性病毒感染和持续性病毒感染两种。,2显性病毒感染,(二)急性病原消灭型病毒感染,病毒侵入机体后,在细胞内增殖,经数日以至数周的潜伏期后突然发病。在潜伏期内1、病毒增殖到一定水平,由靶细胞的损伤和死亡而导致组织器官的损伤和功能障碍,出现临床症状。2、宿主动员非特异性和特异性免疫因素清除病毒。宿主一般能在症状出现一段时间内,把病毒清除掉而进入恢复期。特点为潜伏期短,发病急,病程数日至数周。病后常获得特异性免疫。因此,特异性抗体可作为受过感染的证据。,(三)持续性病毒感染,病毒可在机体内持续存在数月数年数十年。可出现症状,可不出现症状而长期带病毒,成为重要的传染源。持续性病毒感染有病毒和机体两方面的因素机体免疫功能低下,无力完全清除病毒;病毒抗原性弱,机体难以产生免疫应答以清除;病毒存在于受保护的部位或病毒发生突变,可以逃避宿主免疫作用;某些病毒的抗原性弱,难以产生免疫应答;病毒基因整合在宿主细胞的基因组中,长期与宿主细胞共存。,持续性感染有下述四种类型,1.潜伏性病毒感染LATENTVIRALINFECTION2.慢性病毒感染(CHRONICVIRALINFECTION)3.慢发病毒感染SLOWVIRUSINFECTION或称迟发病毒感染DELAYEDVIRALINFECTION4.急性病毒感染的迟发并发症(DELAYEDCOMPLICATIONAFTERACUTEVIRALINFECTION),1潜伏性病毒感染,经急性或隐性感染后,病毒基因组存在于一定组织或细胞内,但并不能产生有感染性的病毒体。在某些条件下病毒被激活而急性发作,病毒仅在临床出现间歇性急性发作时才被检出。在非发作期,用一般常规法不能分离出病毒。例如,单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV1)感染水痘带状疱疹病毒(VZV)感染,2慢性病毒感染,经显性或隐性感染后,病毒并未完全清除,可持续存在于血液或组织中并不断排出体外,病程长达数月至数十年。患者可表现轻微或无临床症状。如乙型肝炎病毒(HBV)、巨细胞病毒(CMV)及EB病毒(EBV)等常形成慢性感染。,3慢发病毒感染,病毒感染后潜伏期很长可达数月、数年甚至数十年之久。此时机体无症状,也分离不出病毒。一旦发病出现慢性进行性疾病,最终常为致死性感染。如AIDS、羊瘙痒病(SCRAPIE)、人克雅病(CJD)、库鲁病(KURU)等。库鲁病是朊病毒感染机体后,经过长达数十年的潜伏期后,引起的一种进行性小脑退行性疾病。,4急性病毒感染的迟发并发症,急性感染后1年或数年,发生致死性的病毒病。如亚急性硬化性全脑炎(SSPE)。该病是在儿童期感染麻疹病毒后,有些到青春期才表现为中枢神经系统疾病,用电镜在脑组织中可查到类似麻疹病毒样颗粒。有人认为这是麻疹病毒的缺陷病毒。,第二节病毒的致病机制,病毒能否感染机体引起疾病取决于病毒的致病性病毒在宿主细胞内增殖,导致宿主细胞结构和功能改变,并扩延到多数细胞,便可形成组织器官的损伤及功能障碍。宿主免疫力在病毒和机体细胞相互作用过程中,机体的免疫应答有时也可对机体造成某些免疫病理性损伤,介导疾病的发生与发展。,一、病毒感染引起宿主细胞的变化,病毒对细胞的致病作用包括来自病毒的直接损伤和机体免疫病理应答两个方面。敏感的宿主细胞被病毒感染后,两者相互作用下可表现为溶细胞作用稳定状态感染细胞凋亡包涵体的形成细胞增生和转化病毒基因的整合,(一)溶细胞作用,病毒在宿主易感细胞内增殖成熟后,短时间释放大量子代病毒造成细胞破坏与死亡,这种作用称杀细胞效应,或称为溶细胞作用。主要见于无包膜,杀伤性强的病毒。病毒在细胞内增殖引起细胞变性、死亡裂解的作用称病毒的细胞病变效应(CYTOPATHICEFFECT,CPE)。,,病毒培养时出现的CPE,二稳定状态感染,一些不具有杀细胞效应的病毒(多为有包膜病毒)所引起的感染称稳定状态感染STEADYSTATEINFECTION。病毒在感染宿主细胞的过程中,对细胞代谢、溶酶体膜影响不很大。成熟的病毒多以出芽方式释放出来,其过程缓慢、病变轻微,细胞暂时还不会出现裂解和死亡,但可发生宿主细胞膜受体被破坏、细胞膜成分发生变化,出现细胞融合及细胞表面产生新的抗原等。,1细胞融合感染与未感染的细胞融合,可以使病毒从感染的细胞直接进入相邻的正常细胞,有利于病毒在细胞间的扩散。2细胞膜出现新抗原病毒在细胞内增殖过程中,将病毒基因编码的蛋白质插入细胞膜表面,导致细胞膜表面抗原的改变。有利于进行病毒感染的诊断。,(三)细胞凋亡,细胞凋亡(CELLAPOPTOSIS)是由细胞基因自身指令发生的一种生物学过程。实验研究证实有些病毒(腺病毒、人免疫缺陷病毒等)增殖可直接诱导细胞凋亡,也可通过病毒基因组编码的蛋白质间接作用下诱发细胞凋亡。,(四)包涵体的形成,某些受病毒感染的细胞内,用普通光学显微镜可看到有与正常细胞结构和着色不同的圆形或椭圆形斑块,称为包涵体(INCLUSIONBODYORIBCLUSION)。因病毒种类不同,包涵体有位于胞浆内的痘病毒,也有在细胞核内的疱疹病毒;或者两者都有麻疹病毒;有嗜酸性的或嗜碱性的。包涵体的本质①有些病毒的包涵体就是病毒颗粒的聚集体;②有些是病毒增殖留下的痕迹;③病毒感染引起的细胞反应物。可作为诊断依据和鉴定病毒的参考。如从可疑为狂犬病的脑组织切片或涂片中发现细胞内有嗜酸性包涵体,即内基小体NEGRIBODY,可诊断为狂犬病。,(五)细胞转化增生和病毒基因组的整合,某些DNA病毒的全部或部分核酸,或RNA病毒基因组经逆转录后产生的DNA,结合至细胞染色体中,称为整合。整合作用可使细胞遗传性状发生改变,即转化(TRANSFORMATION)。转化的细胞生长、分裂失控,细胞可发生恶性变。,病毒的致肿瘤作用,DNA病毒(1)乙型肝炎病毒(HBV)与原发性肝癌有关;(2)EB病毒(EBV)与鼻咽癌、非洲儿童恶性淋巴瘤有关;(3)人乳头瘤病毒(HPV)与子宫颈癌有关。RNA病毒只有逆转录病毒科与癌症有关。人类T细胞白血病病毒HTLVI型。,二、病毒感染引起的机体变化,一组织器官的损伤及组织器官的亲嗜性病毒对细胞的杀伤作用,在大多数情况下,必然导致组织和器官的损伤和功能障碍。病毒对人体组织的致病作用是有选择性的。例如,流感病毒和鼻病毒对呼吸道粘膜有亲嗜性;天花病毒和疱疹病毒对皮肤粘膜细胞有亲嗜性;而脑炎病毒和脊髓灰质炎病毒则对神经组织具有亲嗜性。,(二免疫病理损伤,1.体液免疫病理作用许多病毒如狂犬病病毒、HSV、流感病毒等有包膜病毒侵入细胞后,能诱发细胞表面出现新抗原。这种抗原与特异性抗体结合后,在补体参与下引起细胞的破坏。2.细胞免疫病理作用细胞免疫在某些病毒感染的恢复上起着重要作用。但特异性细胞毒性T细胞CTL可以同时损伤受病毒感染而出现膜新抗原的靶细胞。病毒蛋白亦可因与宿主细胞的某些蛋白间存在共同抗原性而导致自身免疫应答。由于某些病毒可引起免疫病理性损伤,因此,一般在临床上不宜应用免疫功能增强剂治疗这类疾病。综上,病毒感染早期所致细胞损伤主要是病毒引起,感染后期由免疫复合物、补体活化、ADCC作用、CD4T细胞介导的复杂反应引起机体局部组织器官的严重损伤和炎症。,三病毒感染对免疫系统的影响,1.病毒感染引起的免疫抑制许多病毒感染可引起暂时性免疫抑制。如麻疹病毒、风疹病毒、CMV等感染,急性期和恢复期患者外周血淋巴细胞对特异性抗原和促有丝分裂原PHA、CONA)的反应减弱。同时,对结核菌素皮肤试验也出现转阴的情况。2.病毒感染对免疫活性细胞的杀伤已发现引起AIDS的人类免疫缺陷病毒HIV)对辅助性T细胞CD4+具有强亲和性和杀伤性。因而在感染者出现CD4+细胞减少,CD8细胞数相对增多,两种细胞比值倒置的现象。3.病毒感染引起自身免疫性疾病隐蔽在细胞内的一些抗原暴露或释放出来;病毒抗原也可能与机体细胞结合,改变细胞表面结构成为“非已物质”,这些细胞可成为靶细胞而受到免疫细胞和免疫因子的作用,从而发生自身免疫性疾病。,第三节抗病毒免疫ANTIVIRALIMMUNITY,干扰素,定义,由病毒或其他干扰素诱生剂刺激人或动物细胞所产生的一类分泌性蛋白具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等多种生物学活性。,,种类,种类产生细胞抗病毒免疫调节抗肿瘤人白细胞强弱弱人成纤维细胞强弱弱T细胞弱强强,抗病毒意义,抗病毒特点,种的特异性、间接性、广谱性,早期中断病毒复制,阻止病毒扩散,LYSISOFVIRUSINFECTEDCELLSBYCYTOTOXICEFFECTORCELLS,体液免疫,病毒中和抗体针对病毒某些表面抗原血凝抑制抗体血凝素补体结合抗体病毒内部抗原或表面非中和抗原,HUMORALIMMUNITY,MECHANISMSOFVIRUSNEUTRALIZATIONBYANTIBODYATTHECELLULARLEVEL,EXTRACELLULARNEUTRALIZATIONOFVIRUSBYANTIBODY,ANTIBODYDEPENDENTCELLULARCYTOTOXICITYORADCC,细胞免疫,细胞毒性T淋巴细胞直接杀伤靶细胞(细胞裂解、细胞凋亡)分泌多种细胞因子(IFN-GAMMA、TNF)等发挥抗病毒作用。TH1细胞,LYSISOFVIRUSINFECTEDCELLSBYCYTOTOXICEFFECTORCELLS,CELLMEDIATEDEVENTSINVIRALINFECTIONS,抗病毒免疫持续时间,牢固持久免疫力有病毒血症的全身性病毒感染水痘、天花单一血清型的病毒感染乙型脑炎病毒短暂免疫力局部或粘膜表面感染流感病毒、鼻病毒多血清型病毒感染鼻病毒易发生抗原变异的病毒感染流感病毒,病毒感染的诊断与防治,常用的病毒学诊断方法包括病毒的分离鉴定病毒的血清学检查病毒蛋白和核酸的检测,一、病毒感染的诊断,(一)标本的采取与送检,应注意下列原则1对本身带有杂菌如咽拭子、粪便或易受污染的标本,要进行病毒分离培养时,应使用抗生素。2因病毒在室温中易失去活性,标本应低温保存并尽快送检。3血清学诊断标本的采取应在发病初期和病后2~3W内各取1份血清,以便对比双份血清抗体效价的动态变化。,(二)病毒的分离与鉴定,病毒的分离1动物接种是最原始的病毒培养方法,根据病毒种类不同,选择敏感动物及适宜接种部位,如嗜神经性病毒(狂犬病毒)可接种于小鼠脑内,痘病毒可接种于家兔角膜或皮内。,,2鸡胚培养鸡胚对多种病毒敏感。一般采用孵化9~14天的鸡胚,根据病毒种类不同,将病毒标本接种于鸡胚的不同部位,最常用的鸡胚接种部位有羊膜腔、尿囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等。,3组织培养法TISSUECULTURE或细胞培养CELLCULTURE法是将离体活组织块或分散的组织细胞加以培养的技术总称,为病毒分离鉴定中的最常用的基本方法。,细胞的变化有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变,称为细胞病变效应CYTOPATHICEFFECT,CPE。常见的变化有细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等。有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等作用于细胞膜,可使邻近的细胞相互融合,形成多核巨细胞或称融合细胞。有些病毒如狂犬病病毒、麻疹病毒等可在培养细胞中形成胞浆或核内的包涵体。,病毒在培养细胞中增殖的指标,,病毒培养时出现的CPE,,2红细胞吸附HEMADSORPTION,HAD流感或副流感病毒等感染细胞后,由于细胞膜上出现了血凝素HAEMAGGLUTININ,HA,具有吸附脊椎动物豚鼠、鸡、猴等红细胞的能力,这一现象称红细胞吸附,常用来测定具有HA的粘病毒与副粘病毒的增殖。若有相应的抗血清,则能中和细胞膜上的HA,HAD不再发生,称红细胞吸附抑制试验。,3干扰现象INTERFERENCE某些病毒感染细胞时不出现CPE或其他易于测出的变化如HAD,但能干扰在其后感染的另一病毒的增殖。如风疹病毒感染VERO细胞时CPE不明显,但它能干扰后感染的埃可病毒ECHOV的增殖,从而阻抑后者所特有的CPE。,4细胞代谢的改变病毒感染细胞的结果可使培养液的PH值改变,说明细胞的代谢在病毒感染后发生了变化。这种培养环境的生化改变也可作为判断病毒增殖的指标。,病毒的数量与感染性测定,空斑形成单位(PLAQUEFORMINGUNIT,PFU)限于用在有产生空斑能力的病毒。测定单层细胞培养中病毒裂解空斑的形成。50组织细胞感染量(50TISSUECULTUREINFECTIOUSDOSE,TCID50)引起50鸡胚、动物死亡或50的培养细胞发生CPE的最小病毒量。,(三)病毒感染的血清学诊断,原理是用已知病毒抗原来检测病人血清中有无相应抗体,故须待病人感染后体内产生抗体时才能检出。另外,在采取临床标本及病人血清应注意病程,必须采取患者急性期血清与恢复期血清双份血清进行血清学试验。若第2次血清抗体滴度比第1次高出4倍以上时,才有诊断意义。,(四)病毒感染的快速诊断,快速诊断主要是指从含有病毒标本及感染机体的血清中检测病毒颗粒、蛋白抗原、IGM抗体和核酸等,往往在数小时内即可得出结果。,形态学检查,1电镜和免疫电镜检查2普通光学显微镜检查有些病毒在宿主细胞内增殖后,在细胞的一定部位胞核、胞浆或两者兼有出现一个或数个、圆形或椭圆形、嗜酸性或嗜碱性的结构,即包涵体。包涵体对病毒感染的诊断有一定价值。,病毒蛋白抗原检查,用荧光素、放射性同位素、过氧化物酶等标记抗体,采用免疫学和分子生物学技术,检测标本中的病毒蛋白抗原,具有敏感、特异、快速等优点。1免疫荧光技术IMMUNOFLUORESCENCE,IF2固相放射免疫测定SOLIDPHASERADIOIMMUNOASSAY,SPRIA3酶免疫技术ENZYMEIMMUNOASSAY,EIA此法可检测多种病毒及其抗体,主要是酶免疫组化法和酶联免疫吸附试验法ELISA。,特异性IGM抗体的检测,检测病毒特异性IGM抗体可诊断急性感染,特别是对证实孕妇感染风疹病毒尤为重要,但应注意类风湿因子IGM的干扰。另外,检测早期抗原的抗体是快速诊断的另一途径。如检测针对EBV的早期抗原EA、核心抗原EANA和衣壳抗原VCA等的抗体,可以区别急性或慢性EBV感染。此外,分子生物学检测技术、气相色谱技术等,均可用来分析和鉴定病毒感染。,检测病毒核酸,1核酸杂交技术用于病毒检测的有斑点杂交、细胞内原位杂交、DNA印迹杂交、RNA印迹杂交等。2核酸扩增法目前多数病毒基因已通过分子克隆技术被明确了核苷酸序列,使得DNA扩增技术逐步发展为常规诊断技术之一。3基因芯片技术,,,病毒的快速诊断,光镜包涵体,电镜,免疫荧光,ELISA,分子生物学技术,杂交,SOUTHERNBLOT,PCR,NORTHERNBLOT,,,,,,,,,,,,,,,二、病毒感染的防治,免疫预防,人工主动免疫,灭活疫苗,乙脑疫苗,狂犬疫苗,流感灭活疫苗,HAV等,减毒活疫苗,脊髓灰质炎疫苗,麻疹疫苗,腮腺炎疫苗,风疹疫苗,HAV疫苗,其他疫苗基因工程疫苗,核酸疫苗,亚单位疫苗等,,,,,药物防治,金刚烷胺抑制病毒脱壳预防感冒,核苷类药物,病毒蛋白酶的抑制物INDINAVIR其他干扰素及干扰素诱生剂,中草药抗病毒基因治疗ASODN,ASON,核酶,疱疹净,阿昔洛韦,AZT,,抗病毒药物,特异性抗体治疗性疫苗,免疫制剂,,,
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简介:普通病毒学,曾勇EMAILZY110CNYAHOOCOMCNCELLPHONE15053532606,教学参考书基础病毒学莽克强,化学工业出版社,2005年,第一版普通病毒学谢天恩、胡志红,科学出版社、2002年,第一版兽医微生物学陆承平,中国农业出版社,2007年,第四版病毒学实验技术傅继华,山东科技出版社,2001年,第一版分子病毒学吴柏春,华中师范大学出版社,1999年病毒学概览姜莉等译,化学工业出版社,2006年HOWPATHOGENICVIRUSESWORKBASICVIROLOGYEDWARDKWAGNERMARTINEZJHEWLETT,BLACKWELLPUBLISHING,2004,SECONDEDITIONPRINCIPLESOFVIROLOGYFLINTSJ,ETAL2004,ASMPRESSSECONDEDITIONPRINCIPLESOFMOLECULARVIROLOGYCANNAJELSEVIERACADEMICPRESSFOURTHEDITION2005,课件下载烟台大学网络教学平台用户名2009ZENGYONG密码123,主要章节,第一章导论病毒学概述第二章病毒的形态与结构第三章病毒的分类与命名第四章病毒的侵染与复制第五章病毒的遗传与变异第六章病毒与寄主的相互作用第七章病毒基因工程第八章几种重要病毒的简介第九章病毒与肿瘤第十章病毒学技术第十一章病毒病的防治,国家规定强免(强制免疫)的疫苗是必须打的,即强制免疫的,也是免费的,小孩日后入托、入学甚至出国都要凭打过的接种证办理的。以下是规定强免的疫苗(2006年3月1日执行)出生时乙肝疫苗(第一次)、卡介苗1月龄乙肝疫苗(第二次)2月龄脊髓灰质炎疫苗(第一次)3月龄脊髓灰质炎疫苗(第二次)、百白破(第一次)4月龄脊髓灰质炎疫苗(第三次)、百白破(第二次)5月龄百白破(第三次)6月龄乙肝疫苗(第三次)、A群流脑疫苗(第一次)8月龄麻疹疫苗(第一次)、乙脑疫苗(非活第一、二次)、(减活第一次)9月龄A群流脑疫苗(第二次),18月龄百白破(第四次)、麻疹疫苗(第二次)2岁乙脑疫苗(非活第三次)、(减活第二次)3岁A群流脑疫苗(第三次)4岁脊髓灰质炎疫苗(第四次)6岁乙脑疫苗(非活第四次)、(减活第三次)、A群流脑疫苗(第四次)、精白破(第一次)16岁精白破(第二次)还有一些疫苗不属于强免范围,如麻腮风、风疹、腮腺炎、肺炎、水痘等,都要收费的,可自愿选择打或不打。记住一点,凡是收费的疫苗都需要家长签名认可,方可接种。,接种疫苗可以有效预防传染病,但是在疫苗的接种过程中,由于多种原因,可能会发生极少数接种疫苗人出现不良反应,在学术上叫做疫苗的相关病例。对于疫苗相关病例,国家将给予一定的补偿。,由于中国使用的脊灰疫苗是减毒活疫苗,加上受种者个体差异等,儿童服用后有可能发生疫苗相关麻痹病例,但发生率极低,每250万至1000万孩子接种后,可能有1人出现接种后的麻痹甚至下身瘫痪等副反应,这种副反应主要发生在首次接种的儿童中。1994年,我国报告了最后1例本土脊髓灰质炎病例,以后再无病例发生。2008年,卫生部等部门联合发布关于做好脊髓灰质炎疫苗相关病例鉴定及善后处理工作的指导意见,承诺对因接种脊灰疫苗后出现相关小儿麻痹副反应的儿童,由地方和卫生部门相助,开展医疗鉴定、赔偿。同年,北京市卫生局等相关部门印发北京市疫苗预防接种异常反应相关麻痹型脊髓灰质炎病例补偿办法试行,其中提出,当事人应在出现症状满2年后的1年内,向北京市医学会提出伤残等级鉴定申请,补偿费用实行一次性结算,由市财政部门在预防接种工作经费中安排,最高可达24万元。,第一章导论病毒学概述,第一节病毒学知识的起源及发展第二节病毒和病毒学第三节病毒的起源,本章重点,1、了解病毒学发展历程中的主要事件。2、病毒的基本特点。3、几种亚病毒的定义。4、病毒性病原确定的标准。5、病毒的起源。,第一节病毒学知识的起源及发展,一、病毒学发展的动力1、防治病毒性疾病2、分子生物学和分子遗传学的重要模式生物,二、病毒学发展的历史,1、经验时期公元前1400年,古埃及象形文字就描述了一位司祭人员的病状是典型的脊髓灰质炎。,公元前1000年,中国已有天花发生,到公元1000年,宋真宗时代已有吸入病痂接种人痘预防天花的办法,1796年英国人EDWARDJENNER提出接种牛痘预防天花。1966年世界卫生组织提出对对接触天花患者的人进行计划免疫;1977年10月索马里最后一位患者治愈,宣布全世界消灭了天花病。,天花的种痘预防,1979年10月26日联合国世界卫生组织在肯尼亚首都内罗毕宣布,全世界已经消灭了天花病,并且为此举行了庆祝仪式。现在美国和俄罗斯的两个实验室(美国亚特兰大的疾病控制中心、俄罗斯新西伯利亚的维克托实验室)还暂时保存有天花病毒。,在家畜的病毒病中,狂犬病的相关记载可能最早。巴斯德18221895法国著名科学家发明巴氏消毒法、1884年研制成功狂犬疫苗。,家蚕“高节”、“脚肿”郁金香碎色花病,2、病毒的发现时期,烟草花叶病1886年麦尔MAYER证明其有传染性,但认为是细菌。1892年伊万诺夫斯基IVANOVSKI证明通过细菌滤器的汁液仍有致病性,但认为是细菌毒素。,CHAMBERLAND氏滤器,1898年贝杰林克BEIJERINCK荷兰著名科学家(麦尔的助手)A能通过细菌滤器B仅能在感染的细胞内繁殖,在体外非生命的物质中不能生长C“有感染性的、活的物质”,并将其命名为VIRUS,第一个动物病毒的病例牛口蹄疫(1898)德国细菌学家勒夫勒(LOEFFLER)和费罗施(FROSH)发现引起牛口蹄疫的病原也可以通过细菌滤器,从而再次证明伊万诺夫斯基和贝杰林克的重大发现。证明高度稀释的滤液可以再现疾病,否定了毒素说。第一个有关噬菌体的报道葡萄球菌噬菌体PHAGE来自希腊文,意指”吃”。,认为病毒是一种与细菌类似的病原体,不同仅在于病毒必须在活细胞内才能繁殖,体积很小,能通过细菌滤器,被称为“超显微的滤过性病毒”。,3、病毒本质的研究时期,早期的工作证实病毒的活性与蛋白有关。1935年美国生物化学家斯坦利得到了TMV的蛋白晶体,晶体溶解后保持致病性。病毒是由蛋白质和核酸组成,核酸可分为RNA和DNA两种,核酸是感染、致病、复制的主体。,20世纪30年代的后期,电子显微镜的发展,进一步促进了病毒学的发展,证明病毒颗粒的内部是核酸,外面包裹着蛋白质。ELECTRONMICROGRAPHSOFHIGHLYPURIFIEDPREPARATIONSOFSOMEVIRUSESAADENOVIRUSBROTAVIRUSCINFLUENZAVIRUSCOURTESYOFGEORGELESERDVESICULARSTOMATITISVIRUSETOBACCOMOSAICVIRUSFALFALFAMOSAICVIRUSGT4BACTERIOPHAGEHM13BACTERIOPHAGE,4、病毒学发展中的主要成就,斯坦利(19041971)美国著名化学家,1935年提纯了烟草花叶病毒,1946年获得诺贝尔化学奖,蒂勒(THEILERM)美国著名病毒学家,确证了黄热病毒,成功地开发了减毒疫苗而荣获1951年诺贝尔生理学和医学奖。,美国科学家恩德斯ENDERSJF、韦勒WELLERTH、罗宾斯ROBBINSFC因将脊髓灰质炎病毒成功地在培养细胞中培养而荣获1954年诺贝尔生理学和医学奖,法国科学家雅各布JACOBF、利沃夫LWOFFAM、莫诺MONODJL因提出“操纵子”概念,预言了MRNA的存在,导致MRNA的证实,从而使遗传密码的实验研究得以开始,因而使分子遗传学的整个体系得以建立,其意义十分深远。发现酶和病毒合成的遗传控制机制获1965年诺贝尔生理学和医学奖。,劳斯(PEYTONROUS18791970)美国著名病毒学家,证明病毒可引起动物的癌症,获1966年诺贝尔生理学医学奖,德尔布吕克(DELBRUCKM)德国、赫尔希(HERSHEYA)美国、卢里亚(LURIAS)(意大利)因提出病毒的“一步生长曲线”,发现病毒的复制机理与噬菌体的基因重组现象,证明遗传物质是DNA而不是蛋白质,获1969年诺贝尔生理学医学奖。,巴尔的摩(BALTIMORED)(美国)、杜尔贝科(DULBECCOR)(意大利)、特明(TEMINHM)(美国)巴尔的摩和特明发现了逆转录酶,证明遗传信息不仅由DNA到RNA,也可由RNA到DNA;杜尔贝科发现了肿瘤病毒和细胞遗传之间的相互作用,他倡导了向细胞内注入已知功能的单个病毒基因而不注入完整病毒的技术。获1975年诺贝尔生理学和医学奖。,毕晓普(美国)JMICHAELBISHOP,瓦尔姆斯(美国)HAROLDEVARMUS,发现了逆转录酶病毒致癌基因的细胞起源,否定以前的看法癌基因必然源自病毒。获1989年诺贝尔生理学和医学奖。,普鲁西纳(美国)(SBPRUSINER1997年诺贝尔医学或生理学奖、发现感染性蛋白子(PRION),德国科学家哈拉尔德楚尔豪森(HARALDZURHAUSEN),法国科学家弗朗索瓦丝巴尔-西诺西(FRANÇOISEBARRÉSINOUSSI),法国科学家吕克蒙塔尼(LUCMONTAGNIER),德国科学家哈拉尔德楚尔豪森(HARALDZURHAUSEN)因发现人乳头瘤病毒引发子宫颈癌获此殊荣,两名法国科学家弗朗索瓦丝巴尔-西诺西(FRANÇOISEBARRÉSINOUSSI)和吕克蒙塔尼(LUCMONTAGNIER)因发现人类免疫缺陷病毒获此殊荣。,2008年度诺贝尔生理学或医学奖,美国12/21法国5/21德国2/21意大利2/21女科学家1/21,第二节病毒和病毒学,一、病毒与其他微生物的区别要点,二、病毒的特点,①结构简单,不具细胞结构,仅含一种核酸,DNA或RNA。②严格的细胞内寄生,没有新陈代谢机能,利用宿主细胞的酶、能量合成系统、核糖体、细胞因子、大分子以及病毒自身组分进行自身繁殖。③在宿主细胞内,子代病毒粒子由新合成的结构组分进行装配而增殖。④纯化的病毒可被结晶。⑤感染周期中组装的子代病毒粒子在它们感染另外的宿主细胞时将病毒基因转染给新的宿主细胞。⑥对一般抗生素和作用于微生物代谢途径的药物均不敏感。⑦绝大多数病毒在不同程度上对干扰素敏感。⑧有些病毒的核酸能整合到宿主细胞的DNA中,从而诱发潜伏性感染。,病毒的定义是一类比较原始的、有生命特征的、能够自我复制和严格细胞内寄生的非细胞生物。,三、病毒学,病毒学作为一独立的学科出现在20世纪50年代。它是一门在充分了解病毒的一般形态和结构特征基础上,研究病毒基因组的结构与功能,探寻病毒基因组复制、基因表达及其调控机制,从而揭示病毒感染、致病的分子本质,为病毒基因工程疫苗和抗病毒药物的研制以及病毒病的诊断、预防和治疗提供理论基础及其依据的科学。,研究病毒学的主要目的A预防疾病B利用病毒C作为模式生物,研究分子间的相互作用以及基因的复制、突变等D认识生命的起源,四、病毒类型,根据寄主的不同植物病毒动物病毒噬菌体,根据核酸的不同,单链DNA病毒双链DNA病毒DNA与RNA反转录病毒双链RNA病毒负链单链RNA病毒正链单链RNA病毒,根据病毒组成成分与复制方式的不同,(真)病毒EUVIRUS至少含有蛋白质和核酸两类物质标准病毒与缺损病毒病毒在增殖过程中,由于病毒基因组因某种环境因素的影响或转录过程的错误而发生的突变,以致有装配不全的病毒颗粒产生,成为缺损病毒(DEFECTIVEVIRUSPARTICLE),又称干扰缺损颗粒(DEFECTIVEINTERFERINGPARTICLESDI)(DI颗粒),必须依赖于其同源的完全病毒才能复制。许多病毒都有标准病毒与缺损病毒的两重性,如脊髓灰质炎病毒。假病毒与真病毒假型病毒(PSEUDOTYPEVIRUS)一种病毒的核酸被以另一种病毒编码的外壳。假病毒或假病毒颗粒(PESUDOVIRION)由细胞的DNA片段被病毒的外壳包被形成。杂种病毒与纯种病毒杂种病毒一种病毒颗粒中含有两种病毒的遗传物质。,卫星病毒SATELLITEVIRUS和卫星核酸它们缺少独立复制的能力,需要辅助病毒HELPERVIRUS才能复制,或由辅助病毒提供外壳蛋白来包被核酸。其核酸序列大部分与辅助病毒不同,仅末端小段为同源。其中核酸编码自己外壳蛋白的称为卫星病毒,否则称为卫星核酸SSDNA,SSRNA,DSRNA。类病毒VIROID它是最小的(240375BP)单链、环状RNA;有独力侵染、自主复制能力,无需辅助病毒;没有外壳蛋白;其核酸不编码任何蛋白。目前仅知类病毒侵染植物。朊病毒或朊粒PRION是一种不含有核酸的传染性蛋白质颗粒,能通过分子自身的构想变化,并传到其他分子引起同样的变化而致病。,亚病毒SUBVIRUS,五、病毒性病害的确立,科赫法则(病毒不能用人工培养基培养增殖)1937年RIVERS法则A必须发现某种特异病毒以一定程度的规律与某种疾病有联系,并从患病寄主中分离病毒。B在实验寄主或寄主细胞中培养。C证明培养物的滤过性。D在原始寄主或有关的种内产生类似病害。E能重新分离出同一种病毒。,1973年EVANS提出免疫学证据A病毒必须存在于病人的组织、血液,并在该处反复出现。B能在实验室中很好地经动物或组织传代。C在患病前期有规律地缺乏病毒特异抗体。D在疾病期间抗体有规律地出现。1暂时的病毒特异IGM抗体2持续的IGG抗体3局部抗体IGA在原发增殖部位E抗体的产生伴随在相应组织中存在病毒。F无类似有关的其他病毒或抗体。G能用特异性疫苗预防。,六、病毒生命形式的两重性,病毒存在的两重性细胞内(核酸分子形式)细胞外(不显示复制活性,保持感染活性,病毒体或病毒颗粒形式)病毒的结晶性与非结晶性结晶是很多无机化合物存在的一种形式,七、病毒研究的发展趋势,1988年,世界卫生组织(WHO)提出2000年底全球消灭脊髓灰质炎,计划修订到2008年。病毒功能基因组学和功能蛋白质组学的研究朊病毒的研究DNA疫苗的研究病毒与宿主的相互作用及致病机制,第三节病毒的起源,病毒的起源有三类学说1)退化性起源学说退化性起源学说认为病毒是细胞内寄生物的退化形式。这种细胞内寄生的产生原因可能是由于微生物对某种不能穿过细胞膜的代谢发生了严重依赖。退化性起源学说可以把病毒的起源解释为两个阶段首先,寄生物在细胞内产生独立复制的DNA质粒,然后,编码寄生物亚细胞结构单位的基因发生突变,形成病毒的衣壳蛋白。随着进化的发生,新获得的可在细胞间转移的特性被进一步选择下来。,2)病毒起源于宿主细胞中的RNA和(或)DNA成分的学说这种学说认为,病毒是正常的细胞组分在进化过程中获得了自主复制的能力独立进化而来的。该学说能解释所有病毒的起源DNA病毒起源于质粒或转移因子;反转录病毒起源于反转座子;RNA病毒起源于自主复制的MRNA。,3)病毒起源于具有自主复制功能的原始大分子的学说病毒起源于自主复制的RNA分子。核糖核酸多聚体具有自主复制的信息和能力。由于发现RNA分子具有催化化学反应的能力使得RNA为生命和病毒的起源的学说变得更具有吸引力。小而简单的RNA分子具有至少下列三种化学功能①核糖核酸酶的活性;②能自我拼接去掉内部的核酸序列;③有实验表明,以RNA作引物可以合成依赖于模板的多聚胞嘧啶核酸。RNA分子可以进行复制和进化相关的三个基本反应。,这些观察都有利于RNA是现今生物的进化起源的学说。首先是RNA的形成和复制,然后演变出RNA蛋白介导的一系列反应,第三步产生了DNA。DNA由于比RNA稳定而最终成为遗传信息。RNA的反应性有利于它作为催化物而不利于它成为遗传物质。有些分子被包装在细胞和组织中,形成宿主细胞,另一些分子则自我复制或寄生在宿主细胞中,进化成为病毒。这一理论认为病毒与宿主是共进化的。现今的类病毒和卫星RNA,仍保留有部分的RNA催化性能,因而被一些学者认为是生命形式出现以前的RNA世界的化石。,研究病毒的进化有多种方法,可以通过序列同源性、基因组排列顺序、基因组的基因组成等方面构建病毒的进化树。研究基因组成的演化对揭示基因的起源及病毒与宿主之间的关系具有重要意义。DNA病毒和RNA病毒相比相对稳定。一方面,DNA复制时,其酶具有校正功能;另一方面,DNA病毒容易在宿主体内形成持续性或慢性感染,它们可以在宿主体内存在多年而后爆发,其间可能几乎不发生变异,因此,这类病毒的变异速率可能表现得比裂解型病毒慢一些。一般来讲,DNA病毒不会像RNA病毒那样引起人类世界范围的流行性疾病。RNA病毒引起的疾病流行和变异成为研究RNA病毒进化,特别是进化时间的良好素材。,相关病毒学研究单位,中国科学院武汉病毒研究所武汉大学,病毒学国家重点实验室中国疾病预防控制中心军事医学科学院微生物流行病研究所中国农业科学院,习题,1列举5例病毒学发展史上的突出成就2列举5本有影响的病毒学杂志3病毒的特点4病毒基因组的特点5病毒性病原确立的标准,
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    • 简介:病毒学研究方法简介,生物安全实验室,P1实验室研究的病毒危险性较低,试验人员连口罩都不用带,穿上白大褂就可以了,试验人员在这里很放松;P2实验室研究的是中度危险的病原,像肝炎、流行性感冒等等,要求戴防护性较好的口罩;P3实验室研究的是高度危险的病毒,传染性很强,而且没有疫苗,试验人员的保护措施要比P1/P2实验室严密得多;P4实验室全球级别最高的生物安全实验室,研究的是极度危险的病毒,如令人谈之色变的埃博拉病毒、马尔堡病毒,进入这种实验室的工作人员,处于防护服的严密保护之下,连空气都不能在实验室内呼吸,红色螺旋状管子,是专门用来向室内输送新鲜空气的,试验人员一进入实验室,要先屏住呼吸,马上接上这种管子,然后才能呼吸。,,根据微生物及其毒素的危害程度不同,分为4级,一级最低,四级最高。,病毒学研究的主要方法,生物学特性测定在宿主上的反应症状、传播等病毒分离与培养提纯与纯化、二元培养法光镜与电镜观察病毒粒子和病毒与相应抗血清的特异免疫吸附情况免疫学技术以血清学和组织免疫化学方法检测带毒情况、多克隆抗体、单克隆抗体分子生物学技术核酸分子杂交、PCR等,一、生物学特性测定,在宿主上的反应宿主范围、症状表现、传播方式等病毒的理化性质病毒粒子的形态、大小、对理化因子的耐受性、体外存活期等病毒接种方法注射接种、病毒组织培养技术植物病毒汁液摩擦接种、昆虫介体接种、嫁接接种、菟丝子接种法等,巨细胞病毒感染细胞的典型“猫头鹰眼”样核内包涵体,冠状病毒感染“非典”X线胸部检查可见肺部不同程度的片状阴影,少数病人进展迅速,呈大片状阴影,大多数为双侧改变,阴影吸收消散较慢。,TMVTRANSMISSIONBYANAPISSP,ASEVEREMOSAICSYMPTOMONTOMATOLEAFTMV,腿色斑CHLOROTICSPOTING,黄化YELLOWING,病毒检测,二、病毒的分离与鉴定,,提纯EXTRACTION/纯化PURIFICATION,病毒的分离与鉴定,病毒的提纯是将宿主中的病毒粒子与宿主细胞组分区分开来的过程。原理是利用病毒的蛋白质和大分子粒体的特性,及其与宿主细胞组分在理化特性上的差异将病毒粒子区分出来,并尽可能保持侵染力。目的是确切地研究病毒理化、生物学特性、化学组分、组成、增殖过程及机制,还可用于制备高效价的抗血清。,1953年,斯坦利第一次提取并结晶了TMV,这是病毒学史上一个重要的里程碑。,(一)病毒的纯化与提纯,,一般纯化方法动物病毒的纯化从空斑、病斑分离,用终点稀释法植物病毒的纯化如确定是一种病毒,且可机械摩擦接种,则接种到适当寄主上;如可能有多种病毒,则要嫁接传染,先将病毒保存,然后试用虫媒或其他方法分离。,二、病毒的分离与培养,,,1、差速离心和密度梯度离心差速离心交替使用高速和低速离心高速离心(4000080000G)使病毒沉淀,取沉淀低速离心(约4000G)仅去除大的细胞碎片等杂质,取上清密度梯度离心部分或完全根据颗粒在一个无对流介质中的密度而获得分离蔗糖1040CSCL等,(三)病毒提纯的技术,二、病毒的分离与培养,,,2、沉淀法简便快速但粗糙易变性盐析法硫酸铵浓度达3050饱和度时多数病毒沉淀等电点沉淀加醋酸或盐酸丙酮沉淀浓度达4070聚乙二醇沉淀浓度达48乙醇沉淀浓度达20沉淀植物蛋白,上清夜用硫酸铵沉淀3、吸附法磷酸钙、离子交换树脂、羧甲基纤维素4、酶处理许多病毒抗蛋白酶和核酸酶,(三)病毒提纯的技术,二、病毒的分离与培养,,,5、有机溶剂萃取有机溶剂可溶掉脂肪、有色杂质或非病毒的变性蛋白,如脊髓灰质炎病毒提纯中用正丁醇要考虑病毒对有机溶剂的耐受性,(三)病毒提纯的技术,,,,脂肪,变性非病毒蛋白,病毒,水,醇,,,,,,二、病毒的分离与培养,,,6、电泳法普通电泳、密度梯度电泳、等电聚焦电泳等7、柱层析法吸附用离子交换或吸附法分子筛琼脂糖或葡聚糖制成凝胶柱8、抗血清处理针对宿主蛋白的血清来沉淀杂蛋白加病毒的抗血清形成病毒抗体复合物,(三)病毒提纯的技术,二、病毒的分离与培养,要证明某种疾病是某一感染因子所引起.则必须满足RIVERS法则①从患病者体内分离出病毒;②在实验动物或寄主细胞中可以培养;③证明这种培养物具有滤过性;④在原始宿主或相关种内能产生同样的病症;⑤能重新分离出病毒。病毒的分离与鉴定组成了病毒学诊断技术的主体。病毒分离VIRUSISOLATION是诊断病毒感染的“金标准”GOLDSTANDARD。,二、病毒的分离,病毒的分离,组织培养鸡胚培养动物接种,,组织培养原代细胞新鲜组织胰蛋白酶消化,分散培养液成单层细胞二倍体细胞株原代细胞传代(为二倍体细胞)传代细胞系肿瘤组织或二倍体细胞自发转化(非整倍体),二、病毒的分离与培养,,卵黄囊接种用58D鸡胚,以细长针由气室端刺入卵黄囊,孵育后收集卵黄囊膜检查。常用于一些嗜神经病毒羊膜腔用1214D鸡胚,将检材注入羊膜腔,孵育后取羊水检查。常用于流感病毒的初次分离尿囊腔用912D鸡胚,将标本接种于尿囊腔,孵育后取尿囊液检查。常用于培养流感病毒和腮腺炎病毒等绒毛尿囊膜用1012D鸡胚,无菌下开一小窗,将材料滴在绒毛尿囊膜上,孵育后观察膜上有无斑点病变。常用于培养单纯疱疹病毒,天花病毒和痘病毒,鸡胚接种,绒毛尿囊膜痘病毒特异性损伤,3动物接种,常用动物小鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猴等。不同病毒对动物的敏感性不同,根据病毒种类加以选择。接种途径按病毒侵袭部位选择相应的接种途径乙型脑炎病毒及狂犬病毒小鼠脑内接种柯萨奇病毒乳鼠腹腔接种乙肝病毒黑猩猩静脉注射流感病毒鼻腔滴种用途分离鉴定病毒,制备疫苗,制备抗血清,标本制备浓缩标本有以下几种方法①超速离心离心的时间和速度取决于病毒颗粒的大小和离心机转头的半径,一般是30MIN到3H.沉淀的样本用灭菌蒸馏水洗后再放到铜网上;②超过滤法用于分子筛的蛋白质相对分子质量为10000;③接种细胞接种细胞增殖病毒,然后快速包埋、切片;④免疫凝集如有特异抗血清,且病毒已知,也可用该法浓缩病毒,三、病毒的光镜与电镜观察法,光镜宿主组织切片、包涵体,三、病毒的电镜观察法,1、正染法(超薄切片法、病组织)将细胞用戊二醛固定,然后脱水、包埋、切片、染色、观察病毒颗粒,通常12D完成。操作复杂、费时,但样品可长期保存,可观察病毒粒子形态与发生过程。2、负染法直接将病毒悬液也可用细胞滴在铜网上,用重金属通常用磷钨酸进行染色,观察病毒颗粒,1020MIN可出结果。原理负性染料不渗入病毒颗粒,而是将病毒颗粒包绕,由于负性染料含重金属使电子束不能穿透,病毒颗粒具有亮度,在周围暗背景上显示亮区较正染法显示的图像清晰,可显示病毒的结构。缺点敏感性低,要求病毒量在107/ML以上,同科病毒难于鉴别。3、投影技术4、胶体金标记技术、与免疫学技术结合等,采用几种电镜技术观察病毒粒子的形态,ORFVIRUS口疮病毒接触性脓疱皮炎,EBOLAVIRUS埃博拉病毒(正染技术),VACCINIAVIRUS痘苗病毒(投影技术),负染技术,美国疾病控制和预防中心公布的一张未标明日期的彩色电子显微照片。它显示出H5N1型禽流感病毒(金黄色)在MDCK细胞(绿色)培养液中的活动状态,电镜技术的应用,研究病毒形态、鉴定观察病毒的形态及形态发生学过程;亚显微结构;病毒与宿主细胞的关系;病毒感染细胞的超微结构改变;病毒的分类等。诊断病毒病检测不能在体外培养的病毒,如轮状病毒、星状病毒、嵌杯病毒、HAV等都是用电镜最先发现的能进一步发现新的病毒和病毒病。,四、免疫学技术,1、病毒抗原2、病毒抗体3、免疫学诊断方法免疫荧光法IF免疫酶法(ELISA)单克隆抗体技术,血凝抑制(HI)试验,血凝试验HA,琼脂扩散试验,五、病毒抗原检查,可检测细胞内、外的游离病毒抗原。敏感、特异,简便、快速。适用于多种病毒性疾病的早期快速诊断。,INFLUENZAVIRUSA培养物DFA染色阳性,生殖道HSV2涂片DFA染色阳性,五、分子生物学技术,,聚合酶链反应(PCR)核酸分子杂交SOUTHERNBLOT、NOUTHERNBLOT和WESTHERNBLOT蛋白质组学基因组学核酸序列测定及基因功能基因工程抗病毒疫苗或抗病毒的大分子多肽、病毒载体,
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    • 简介:医学病毒学,MEDICALVIROLOGY,病毒是如何发现的,1886年MAYER证实了烟草花叶病的传染性1892年IWANOWASKI证实其病原是一种新的病原因子。1896年BEIGERINK给这种病原起拉丁名叫VIRUS。,,FIGLEAFOFTOBACCOANDEMOFTOBACCOMOSAICVIRUS,临床病毒学现状,发病率高,传染性强;人类部分肿瘤与病毒感染有关;某些病毒感染有致畸作用;其他一些疾病与病毒感染的关系;目前病毒感染的诊疗还相对滞后,部分尚缺乏有效疫苗;,病毒的概念,病毒(VIRUS)是一类体积微小,结构简单,仅含一种类型核酸,必须在活的敏感细胞内才能生长繁殖的非细胞型微生物。,第二十三章病毒的基本性状,,第一节病毒的形态第二节病毒的结构和化学组成,VIRION完整性感染性,(一)大小测量单位为纳米NM,最大的痘苗病毒为300NM,最小的脊髓灰质炎病毒为30NM准确测量方法电镜ELECTRONMICROSCOPE,EM,,病毒体,,FIGEMOFINFLUENZAVIRUSSCALEBAR100NM,FIG1THECOMPARATIVESIZESOFREPRESENTATIVEVIRUSES,300NM,20NM,(二)形态,(三)病毒的结构与化学组成,1基本化学组成,核酸蛋白质,2病毒的结构,裸病毒,,核心(核酸),外披蛋白质衣壳,,包膜,核衣壳,,包膜病毒,NAKEDVIRUSES,NEUCLEOCAPSID,ENVELOPEDVIRUSES,GENERALSTRUCTUREOFAVIRION,衣壳组成壳粒CAPSOMERES,壳粒,,数目,排列,,螺旋对称型,20面体立体对称型,复合对称型,衣壳分为螺旋对称型、20面体立体对称型等,FIGAICOSAHEDRALSYMMETRYBHELICALSYMMETRY,FIGANICOSAHEDRALVIRUS,FIGAHELICALVIRUS,FIGEMOFCOMPLEXVIRUSESPOXVIRUSSCALEBAR100NM,包膜ENVELOPE糖脂,包膜子粒PEPLOMERE或刺突SPIKE,,3病毒核酸及功能,多样性(1)核酸种类DNA/RNA(2)形态分类线形/环形;(3)单/双;/;节段;(4)开放读码框OPENREADINGFRAME,ORF间可有基因重叠。,不分节段(脊髓灰质炎病毒)RNAV分节段(RNA肿瘤病毒)SSRNA不分节段(副黏病毒)RNAVRNAV分节段(正黏病毒)DSRNA±RNAV分节段(呼肠病毒)SSDNADNAAAVDNAVDSDNA±DNAHSV,,,,,,,FIGOVERLAPPINGREADINGFRAMES,RNA病毒基因组的极性(1)RNA病毒的基因组可直接充当MRNA的称为‘POSITIVESTRANDED’(2)由新合成的RNA充当MRNA的RNA病毒,其基因组称为‘NEGATIVESTRANDED’,,核酸的功能,遗传物质/复制/变异;感染性核酸;检测的物质基础;研究生命物质的模型;分子生物学工具;,4病毒蛋白质及功能,分类结构蛋白衣壳、基质或包膜等;非结构蛋白调节蛋白、酶类等;功能结构蛋白衣壳保护作用;抗原性;受体配体;细胞毒性;非结构蛋白复制有关酶类;致病有关酶;调节蛋白等;部分可作检测的靶点;,第三节病毒的增殖,VIRALMULTIPLICATION,一、病毒的复制周期(VIRALREPLICATIONCYCLE),特点复制(自我复制SELFREPLICATION)病毒的复制周期(VIRALREPLICATIONCYCLE)病毒进入敏感细胞后,以其基因组为模板,借助细胞中的原料、能量及场所合成自己的大分子(蛋白质与核酸)以组装子代病毒颗粒,最终按一定方式释放出细胞。分为吸附和穿入、脱壳、生物合成、组装成熟和释放,吸附ABSORPTION,,(受体-配体),穿入PENETRATION,,,,融合ENVELOPEDVIRUSES,胞饮NAKEDVIRUSES,,脱壳UNCOATING,,酶,生物合成BIOSYNTHESIS,,合成产物,,合成地点,,,,装配ASSEMBLY,,场所,,释放RELEASE,,裸病毒,杀细胞型,,出芽型,,(包膜病毒),,FIGSCANNINGELECTRONMICROGRAPHOFVIRUSPARTICLESBUDDINGFROMTHECELLSURFACE,FIGTYPICALGROWTHCURVEOFAVIRUSCOMPAREDWITHTHATOFABACTERIUM,1吸附与穿入ABSORPTIONANDPENETRATION,吸附通过病毒的包膜或无包膜病毒表面的配体位点与细胞表面的特异受体结合而吸附,如脊髓灰质炎病毒神经系统,HIV病毒GP120TH(CD4)穿入包膜病毒包膜与宿主细胞膜融合无包膜病毒胞饮方式,2脱壳UNCOATING,病毒在细胞内脱去衣壳后,核酸才可发挥指令作用,多数是在细胞的溶酶体酶作用下脱壳释放出病毒基因组,3生物合成BIOSYNTHESIS,通过病毒基因组表达与复制来完成的,包括蛋白质的合成与核酸的复制,此阶段无完整病毒可见,也不能用血清学检测出病毒的抗原,称为隐蔽期发生在病毒核酸复制之前的转录称为早期转录,产物为早期MRNA,翻译出早期蛋白;发生在病毒核酸复制开始或之后的转录称为晚期转录,产物为晚期MRNA,翻译出晚期蛋白,早期蛋白EARLYPROTEIN是功能性蛋白质,为病毒核酸复制提供酶类,参与调节宿主细胞的自身代谢过程。晚期蛋白LATEPROTEIN主要是病毒的结构蛋白,与病毒的形态构成有关。,4装配与释放ASSEMBLYANDRELEASE,装配部位可在核内、胞质内、核膜、胞质膜上无包膜病毒装配成核衣壳即为成熟病毒体包膜病毒装配成核衣壳后以出芽方式释放,释放时包有核膜或胞质膜成为成熟病毒体,二、病毒实例1,DSDNAVHSV(1)DNA半保留复制;(2)根据病毒核酸复制时点将转录分为早期转录/晚期转录;,FIGREPLICATIONSTRATEGYOFADENOVIRUS,ADNAVIRUS,病毒实例2,SSRNAVPOLIOVIRUS(1)本身具有MRNA功能;(2)复制中间体(REPLICATIVEINTERMEDIATE,RI);±RNA;(3)早、晚期转录时相似不明显;多聚大蛋白;,FIGREPLICATIONSTRATEGYOFPOLIO,APOSITIVESTRANDEDRNAVIRUS,病毒实例3,RETROVIRUSHIV(1)逆转录酶;(2)复制中间体(REPLICATIVEINTERMEDIATE,RI);RNADNA杂交体;(3)前病毒PROVIRUS;,三、病毒的异常增殖,宿主细胞方面的原因非容纳细胞NONPERMISSIVECELLS顿挫感染ABORTIVEINFECTION病毒本身的原因缺陷病毒DEFECTIVEVIRUSES辅助病毒HELPERVIRUSES缺陷干扰颗粒DEFECTIVEINTERFERINGPARTICLE,DIP,四、病毒的干扰现象,当两种病毒同时感染同一细胞时,可发生一种病毒的增殖抑制另一种病毒增殖的现象INTERFERENCE;机制可能为受体的占据或细胞代谢途径改变;干扰素(INTERFERON产生,,,第四节理化因素对病毒的影响,灭活(INACTIVATION)失去感染性;但仍可保留其抗原性、红细胞吸附等生物学功能;物理因素TMPH射线;化学因素脂溶剂;化学消毒剂;抗生素等;,病毒的遗传和变异,1.病毒变异的类型遗传型变异非遗传型变异,,2病毒变异的机制,(1)遗传型变异基因突变(GENEMUTATION)突变株(MUTANT),,表现为宿主范围、组织亲嗜性、抗原成分、耐药性、毒力等性状改变;,Ⅰ自发突变SPONTANEOUSMUTATIONRNAV﹥DNAVⅡ诱发突变INDUCEDMUTATION理化方法;,条件致死性突变如TS突变株;高温下TS变异株基因编码的蛋白或酶失去功能;宿主范围突变株HOSTRANGEMUTANT,HR改变了对细胞的吸附或相互作用街病毒→固定病毒;,耐药突变株DRUGRESISTANTMUTANT病毒靶酶基因发生改变→耐药;HIV→AZT变异株;基因重组GENETICRECOMBINATION形成兼有两亲代病毒特性的子代病毒;,基因重配GENETICREASSORTMENT,通过交换RNA节段而进行的重组;,,(2)非遗传型变异(基因产物的相互作用)Ⅰ互补作用;Ⅱ表型混合;,,第五节病毒的分类,分类原则1核酸类型与结构2病毒体的形状和大小3病毒体的形态结构4对脂溶剂的敏感性现一般分为DNA病毒、RNA病毒、逆转录病毒三类。,其他,非寻常病毒1卫星病毒SATELLITES基因组为5002000个核苷酸的单链RNA2类病毒VIROIDS基因组为200400个单链环状RNA,有二级结构,不含蛋白质。3朊粒PRIONPROTEINACEOUSINFECTIONPARTICLES,蛋白侵染颗粒生物学地位待定。结构仅由一种耐蛋白酶K的蛋白分子组成。,
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    • 简介:病毒,制作人张博张筱涵,病毒,什么是病毒病毒是什么样子的病毒会引起哪些疾病怎么预防病毒的感染,什么是病毒,病毒是一种介于生物与非生物之间的一种原始的生命体。病毒个体微小,结构简单,甚至没有维持新陈代谢的基本结构。病毒自身不能繁殖,必须借助宿主细胞才能繁殖。病毒能引起自然界中各种动植物的多种疾病。截至目前,还没有很好的抗病毒的药物。,病毒长得是什么样子的,病毒的形态多种多样,有球形的,有杆状的,有丝状的,有方形的,有子弹状的,有蝌蚪状的等等。绝大多数的动物性病毒呈球形或者是类似球形。绝大多数植物性病毒呈丝状和杆状。还有一部分特殊形状的病毒,比如狂犬病毒呈现子弹状,噬菌体呈现蝌蚪状。,球形病毒,杆状病毒,丝状病毒,特殊形状的病毒,病毒的大小,病毒在普通的显微镜下是看不到的,必须借助电子显微镜才能看到。大多数病毒在100纳米左右。(1纳米等于十亿分之一米)打个比方,签字笔的笔尖大约在05毫米左右,病毒和笔尖比起来,就好像是人跟地球相比较。,病毒可以引起哪些疾病,流感手足口病乙型肝炎水痘艾滋病狂犬病小儿麻痹症埃博拉,流感病毒,手足口病,,禽流感病毒,埃博拉病毒,病毒是怎样传播的,病毒的传播途径有很多种,主要通过一下几种方式传播呼吸道传播流感水痘流行性腮腺炎消化道传播手足口病病毒性肝炎血液传播肝炎病毒艾滋病病毒接触传播肝炎病毒艾滋病病毒疱疹病毒其中,呼吸道传播和消化道传播是最主要的,怎样预防病毒性疾病,锻炼身体,提高身体的免疫力注射疫苗切断病毒的传播途径,锻炼身体,提高身体的免疫力,合理的饮食不挑食,多吃水果蔬菜,多吃豆制品,适量添加鱼、肉、蛋,多喝水规律的体育锻炼每天坚持适量的运动良好的生活习惯按时作息,不熬夜。保持良好的心态养成乐观、积极向上的良好心态,注射疫苗,国家为预防某些特定传染病的发生,制订了国家免疫规划。国家免疫规划中的Ⅰ类疫苗共计14种,可以预防15种传染病。Ⅰ类疫苗是每个儿童必须接种的。Ⅰ类疫苗也是完全免费的。注射疫苗之后,我们的身体会产生针对某一种疾病的抗体。当我们的身体接触到这种病毒的时候,抗体就会把这种病毒杀灭、排出体外,保证我们的身体不会生病。,切断病毒的传播途径,隔离传染源如果我们得了传染性疾病,最好在家中隔离,避免外出;外出时戴口罩,打喷嚏时要用手卷掩住口鼻。以免传染给他人。防止被感染在疾病的高发季节,要避免到人群密集的地方。每天坚持开窗通风做好环境消毒正确的洗手,保持良好的个人卫生,什么是正确的洗手方法,得了病毒性疾病怎么办,到目前为止,还没有很好的治疗病毒性疾病的方法。如果我们得了病毒性的疾病,不要惊慌。一般的病毒性疾病经过一段时间的发病期,都会自然痊愈。发病期间应在家隔离治疗,避免传播给他人。多休息,多喝水,吃清淡的食物。听从医生的建议,对症治疗。,流行性感冒,流行性感冒是流感病毒引起的急性呼吸道感染,也是一种传染性强、传播速度快的疾病。流行性感冒是通过人与人之间通过咳嗽及打喷嚏时产生的呼吸道飞沫传播。也可通过接触表面沾有病毒的物件后再接触口鼻而染病流行性感冒不同于普通的感冒。症状相对普通的感冒要严重。典型的症状是急起高热、全身疼痛、显著乏力和轻度呼吸道症状。一般秋冬季节是流行性感冒的高发期,流行性感冒的治疗,卧床休息,多饮水,给予流质或流质饮食,适宜营养,补充维生素,进食后以温开水或温盐水漱口,保持口鼻清洁,全身症状明显时予抗感染治疗。早期应用抗病毒治疗。流行性感冒是由流感病毒引起的,使用消炎药(抗生素)治疗无效。只有在出现细菌性感染的情况下抗生素治疗才有效。,流行性感冒的预防,接种疫苗。注射流感疫苗是防范流感的最有效的武器勤开窗户,保持生活、学习环境的空气流通定期对生活学习环境消毒在呼吸道疾病流行期间,尽量减少到人员拥挤的公共场所勤洗手,注意防寒保暖,衣着适量随气候增减注意体育锻炼,提高耐寒能力,增强体质饮食合理,多吃蔬菜水果,保证足够的营养,多喝白开水避免与流感病人近距离接触。戴口罩,做好个人防护。,预防传染病小妙招,种疫苗,强免疫带口罩,少聚集勤开窗,多通风晒衣被,保清洁勤洗手,不招菌常锻炼,增抗力学有时,乐有度多喝水,营养丰有病歇,须隔离早求医,对症治,,,谢谢大家,
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    • 简介:©ACADEMICPRESS,2000,EVASIONOFIMMUNERESPONSESBYVIRUSES,INHIBITIONOFMHCIRESTRICTEDANTIGENPRESENTATIONCTLSCANONLYRESPONDTOFOREIGNANTIGENSPRESENTEDBYMHCICOMPLEXESONTHETARGETCELLANUMBEROFVIRUSESINTERFEREWITHMHCIEXPRESSIONORFUNCTIONTODISRUPTTHISPROCESSVIRUSINFECTIONSOFTHEEYEAREALSOQUITECOMMON,©ACADEMICPRESS,2000,THEALIMENTARYCANAL,VIRUSESMAYINFECTTHEALIMENTARYCANALVIATHEMOUTH,OROPHARYNX,GUT,ORRECTUM,ALTHOUGHVIRUSESWHICHINFECTTHEGUTVIATHEORALROUTEMUSTSURVIVEPASSAGETHROUGHTHESTOMACH,ANEXTREMELYHOSTILEENVIRONMENTWITHAVERYLOWPHGOODMEDICALPRACTICESUCHASTHESTERILIZATIONOFSURGICALINSTRUMENTSVACCINATION,WHICHMAKESUSEOFTHEIMMUNESYSTEMTOCOMBATVIRUSINFECTIONSMOSTOFTHEDAMAGETOCELLSDURINGVIRUSINFECTIONSOCCURSVERYEARLY,OFTENBEFORETHECLINICALSYMPTOMSOFDISEASEAPPEARTHISMAKESTHETREATMENTOFVIRUSINFECTIONVERYDIFFICULT,THEREFORE,INADDITIONTOBEINGCHEAPER,PREVENTIONOFVIRUSINFECTIONISUNDOUBTEDLYBETTERTHANCURE,©ACADEMICPRESS,2000,VIRUSVACCINEDESIGN,TODESIGNEFFECTIVEVACCINES,ITISIMPORTANTTOUNDERSTANDBOTHTHEIMMUNERESPONSETOVIRUSINFECTIONTHESTAGESOFVIRUSREPLICATIONTHATAREAPPROPRIATETARGETSFORIMMUNEINTERVENTIONTOBEEFFECTIVE,VACCINESMUSTSTIMULATEASMANYOFTHEBODYSDEFENCEMECHANISMSASPOSSIBLEINPRACTICE,THISUSUALLYMEANSTRYINGTOMIMICTHEDISEASE,WITHOUTOFCOURSECAUSINGPATHOGENESISFOREXAMPLE,THEUSEOFNASALLYADMINISTEREDINFLUENZAVACCINESORALLYADMINISTEREDPOLIOVIRUSVACCINESTOBEEFFECTIVE,ITISNOTNECESSARYTOGET100UPTAKEOFVACCINEHERDIMMUNITYRESULTSFROMTHEBREAKINTRANSMISSIONOFAVIRUSWHICHOCCURSWHENASUFFICIENTLYHIGHPROPORTIONOFAPOPULATIONHASBEENVACCINATEDTHISSTRATEGYISMOSTEFFECTIVEWHERETHEREISNOALTERNATIVEHOSTFORTHEVIRUS,EGMEASLES,INPRACTICEISTHESITUATIONTHATUSUALLYOCCURSSINCEITISIMPOSSIBLETOACHIEVE100COVERAGEWITHANYVACCINE,©ACADEMICPRESS,2000,DNAVACCINES,THESEARETHENEWESTTYPEOFVACCINECONSISTOFONLYADNAMOLECULEENCODINGTHEANTIGENSOFINTERESTPOSSIBLY,COSTIMULATORYMOLECULESSUCHASCYTOKINESTHECONCEPTBEHINDTHESEVACCINESISTHATTHEDNACOMPONENTWILLBEEXPRESSEDINVIVO,CREATINGSMALLAMOUNTSOFANTIGENICPROTEINWHICHSERVETOPRIMETHEIMMUNERESPONSESOTHATAPROTECTIVERESPONSECANBERAPIDLYGENERATEDWHENTHEREALANTIGENISENCOUNTEREDINTHEORY,THESEVACCINESCOULDBEMANUFACTUREDQUICKLYSHOULDEFFICIENTLYINDUCEBOTHHUMORALCELLMEDIATEDIMMUNITY,©ACADEMICPRESS,2000,SUBUNITVACCINES,THESECONSISTOFONLYSOMECOMPONENTSOFTHEVIRUS,SUFFICIENTTOINDUCEAPROTECTIVEIMMUNERESPONSEBUTNOTENOUGHTOALLOWANYDANGEROFINFECTIONINGENERALTERMS,THEYARECOMPLETELYSAFE,EXCEPTFORVERYRARECASESINWHICHADVERSEIMMUNEREACTIONSMAYOCCURUNFORTUNATELY,ATPRESENT,THEYAREALSOTHELEASTEFFECTIVEMOSTEXPENSIVETYPEOFVACCINESTHEMAJORTECHNICALPROBLEMSASSOCIATEDWITHSUBUNITVACCINESARETHEIRRELATIVELYPOORANTIGENICITYTHENEEDFORNEWDELIVERYSYSTEMS,SUCHASIMPROVEDCARRIERSADJUVANTSTHEREARESEVERALCATEGORIESOFSUCHVACCINESSYNTHETICVACCINES,SUCHASSHORT,CHEMICALLYSYNTHESIZEDPEPTIDESRECOMBINANTVACCINES,PRODUCEDBYGENETICENGINEERINGVIRUSVECTORS,IERECOMBINANTVIRUSGENOMESGENETICALLYMANIPULATEDTOEXPRESSPROTECTIVEANTIGENSFROMUNRELATEDPATHOGENICVIRUSES,©ACADEMICPRESS,2000,INACTIVATEDVACCINES,PRODUCEDBYEXPOSINGTHEVIRUSTOADENATURINGAGENTUNDERPRECISELYCONTROLLEDCONDITIONSTHEOBJECTIVEISTOCAUSELOSSOFVIRUSINFECTIVITYWITHOUTLOSSOFANTIGENICITYINACTIVATEDVACCINESHAVECERTAINADVANTAGES,SUCHASGENERALLYBEINGEFFECTIVEIMMUNOGENSIFPROPERLYINACTIVATED,BEINGRELATIVELYSTABLE,CARRYINGLITTLEORNORISKOFVACCINEASSOCIATEDVIRUSINFECTIONIFPROPERLYINACTIVATEDITISNOTPOSSIBLETOPRODUCEDINACTIVATEDVACCINESFORALLVIRUSES,SINCEDENATURATIONOFVIRUSPROTEINSMAYLEADTOLOSSOFANTIGENICITY,EGMEASLESVIRUSALTHOUGHRELATIVELYEFFECTIVE,KILLEDVACCINESARESOMETIMESNOTASEFFECTIVEATPREVENTINGINFECTIONASLIVEVIRUSVACCINES,OFTENBECAUSETHEYFAILTOSTIMULATEPROTECTIVEMUCOSALCELLMEDIATEDIMMUNITYTOTHESAMEEXTENTTHESEVACCINESMAYCONTAINVIRUSNUCLEICACIDS,WHICHMAYTHEMSELVESBEASOURCEOFINFECTION,EITHEROFTHEIROWNACCORDEGSENSERNAVIRUSGENOMESORAFTERRECOMBINATIONWITHOTHERVIRUSES,
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    • 简介:一、病毒感染的传播方式和途径(一)水平传播病毒在人群不同个体间的传播动物到动物再到人P77,表56感染途径(二)垂直传播从亲代到子代,主要通过胎盘或产道其它哺乳、接触、生殖细胞先天性感染宫内感染、生殖细胞基因遗传,(三)病毒在体内的播散,1局部感染或表面感染2全身播散直接播散接触或分泌液感染附近细胞经血流播散;经神经系统播散,疱疹病毒,二、病毒感染的类型根据症状隐性感染(病毒携带者)显性感染根据起病缓急、病毒滞留持续时间等急性感染持续性感染(慢性感染、潜伏性感染、慢发病毒感染),(一)隐性感染和显性感染1隐性病毒感染病毒携带者重要传染源2显性病毒感染(二)急性病毒感染病原消灭型感染,(三)持续性病毒感染持续时间长数月、数年、数十年症状有或无重要类型、重要传染源机制机体免疫力、病毒抗原性、免疫逃避、基因整合,慢性感染乙肝潜伏性感染疱疹病毒慢发病毒感染朊粒人克雅病库鲁病HIV亚急性硬化性全脑炎(SSPE),四病毒与肿瘤,三、病毒的致病机制(一)病毒对宿主细胞的作用病毒对宿主细胞的直接致病作用1溶细胞型感染杀细胞效应致细胞病变作用(CPE)无包膜、脊灰、腺病毒、急性感染原因阻断核酸、蛋白质合成,新陈代谢紊乱,溶酶体酶、免疫损伤。,,病毒的致细胞病变作用CPE,正常细胞,病变细胞,2稳定状态感染(稳定性感染)细胞暂不溶解死亡,有胞膜、出芽方式释放的病毒如麻疹病毒诊断依据(1)细胞融合胞膜改变,出现多核巨细胞(2)细胞表面出现新抗原血凝素3包涵体形成胞内/核内嗜酸/嗜碱内基小体诊断依据2/3都可破坏细胞的结构与代谢,也可引起细胞死亡,狂犬病毒包涵体(NEGRIBODY),,4细胞凋亡(CELLAPOPTOSIS)细胞自杀性死亡(核浓缩、DNA降解细胞死亡基因被激活由病毒或其编码的蛋白诱导,,5病毒基因组的整合病毒核酸整合到宿主染色体DNA全基因组整合逆转录病毒失常式整合(部分基因)DNA病毒作用宿主细胞基因组损伤(基因失活或激活)整合基因编码有特殊作用的蛋白(如SV40的T蛋白),6细胞的增殖与转化病毒感染细胞后,促细胞增殖并使细胞形态发生变化,失去接触性抑制。细胞转化。病毒转化细胞生长力旺盛、易于连续传代,多数细胞染色体整合有病毒DNA,具有致癌潜能。HSV、CMV、EBV、HPV、腺病毒,二病毒感染的免疫病理损伤1抗体介导的免疫病理作用II型超敏反应、III型超敏反应2细胞介导的免疫病理作用3自身免疫病理作用病毒抗原存留、自身抗原暴露或释放(三)免疫系统抑制1免疫抑制2侵入或杀伤免疫细胞(四)病毒的免疫逃逸P82表57,第六章第二节抗病毒免疫一、非特异性免疫(固有免疫)干扰素和NK,天然免疫,早期抗病毒作用(一)干扰素(IFN)1定义由病毒或干扰素诱生剂,诱导细胞产生的一类分泌性糖蛋白,具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多种生物学活性。诱生剂病毒、内毒素、人工合成双链RNA细胞作用,,2分类根据抗原性分类Α干扰素白细胞产生Β干扰素成纤维细胞产生Γ干扰素T细胞产生ΑΒ干扰素以抗病毒作用为主,I型Γ干扰素以调节免疫功能为主,II型几乎所有有核细胞表面均有I型干扰素受体,作用范围广,,3抗病毒作用机制通过抗病毒蛋白干扰素与临近细胞表面干扰素受体结合2’5A’合成酶细胞合成抗病毒蛋白磷酸二脂酶蛋白激酶PKR降解MRNA,抑制多肽链延伸,抑制转译阻断病毒蛋白合成,,,,,中断受染细胞的感染,限制病毒扩散,4抗病毒作用特点(1)间接性干扰素刺激感染细胞与邻近细胞产生抗病毒蛋白,中断受染细胞的感染,限制病毒扩散。(2)相对的种属特异性和细胞选择性在同种细胞中活性高(3)广谱性广泛的抗病毒特性,但敏感度有异抗病毒蛋白对病毒无特异性(4)抗病毒蛋白有抑制作用,无杀灭作用。,,(二)NK细胞杀伤病毒感染的靶细胞作用无特异性,不受MHC限制,不依赖抗体,,二、特异性免疫(适应性免疫)(一)体液免疫IGG、SIGA、IGM1作用于细胞外游离病毒中和抗体消除感染如血凝抑制抗体2作用于病毒感染细胞补体和抗体的调理作用ADCC杀伤作用,,(二)细胞免疫CTL直接杀伤靶细胞活化T细胞分泌Γ干扰素、TNF病毒感染靶细胞(内源性抗原)AGMHCICD8T细胞(TC细胞)感染细胞被巨噬细胞吞噬(外源性抗原)AGMHCIICD4T细胞辅助AB产生产生细胞因子,,,
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