简介：抑癌基因P53是一种在肿瘤发生中起着重要作用的调节因子，被广泛认为是“基因组的守护者”，参与受损细胞的修复和凋亡。MDM2蛋白是P53最重要的负反馈调节因子。MDM2过量表达会导致细胞增殖失控，继而导致肿瘤生长。AMG系列化合物是安进公司报道的哌啶酮类小分子抑制剂，可以通过与MDM2特定位点结合，阻断P53MDM2相互作用，对肿瘤细胞增殖具有很高的抑制活性。AMG232是其中活性最好的小分子抑制剂之一，分子和细胞水平抑制率都达到了低NM级，目前已进入临床II期试验，有望开发成新的抗肿瘤药物。但是其羧基侧链在体内容易通过葡萄糖醛酸结合途径代谢失活，导致其半衰期较短，成药后可能会给患者造成频繁给药的负担。本课题组拟通过将AMG232羧基侧链改造为酯类，降低其在体内与葡萄糖醛酸结合而代谢失活的能力，延长其半衰期，改善药代动力学性质。设计合成得到15个全新结构的AMG232酯类衍生物。其中化合物7的蛋白结合活性与对HCT116癌细胞系的抑制活性最好，与阳性药相当。另外，我们对AMG232关键中间体的合成路线进行了初步探索，设计打通了一条收率高、反应条件温和的AMG232关键中间体的合成路线。研究发现，NFΚB基因突变激活与决定许多肿瘤进展的慢性炎症息息相关，而且还会诱导肿瘤细胞对多种抗肿瘤药物产生耐药性。我们课题组前期通过虚拟筛选得到一类同时激活P53信号通路和抑制NFΚB信号通路全新结构类型的高活性吡咯酮类化合物，并基于吡咯酮骨架先导物进行了合理药物设计发现了活性更强的吡咯酮并吡唑化合物。机制研究表明，R异构体能激活P53，并呈剂量依赖关系，同时抑制MDM2的表达。而S异构体则对P53通路没有明显的作用。对NFΚB信号通路，这对异构体的作用则与P53通路完全相反，S异构体可以激活磷酸化的IKKΑ、Β、Γ而抑制NFΚB的激活，而R异构体则对NFΚB通路没有影响。为进一步研究光学异构体对活性的影响，我们对吡咯酮类化合物进行不对称合成研究，获得了4对高EE值的R、S光学异构体。在此基础上，通过体外抗肿瘤活性研究，获得了两种光学异构体的最佳配比，为后续的P53MDM2与NFΚB信号通路交互协同作用研究打下坚实的基础。

简介：糖基化修饰后的活性杂环分子由于表现出生物活性进一步提高、水溶性得到改善、毒副作用大大降低等优点而受到越来越多的关注。近年来，新的具有良好生物活性的糖苷类药物不断的涌现。因此，设计合成新的具有潜在生物活性的糖基修饰的杂环化合物，以丰富糖苷类化合物库具有重要意义。本论文以葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖为糖源，设计并合成了一系列新的糖基含氮前体，为杂环化合物的糖基修饰提供了新的工具。在此基础上，合成了糖基苯并咪唑类和糖基异噁唑类新化合物共35个，并对其抗肿瘤活性进行了研究。主要内容如下1设计合成了三种不同糖基的糖基苯醛肟，并对其结构进行了1HNMR、13CNMR、HRMS等手段的表征。2通过活性单元拼接和13偶极环加成等方法，合成了一系列全乙酰糖基苯并咪唑类衍生物、糖基苯并咪唑类衍生物和全乙酰糖基异噁唑类化合物。化合物皆为新化合物，采用1HNMR、13CNMR、HRMS等手段对所有合成的新化合物进行了表征。3通过MTT法测试了全乙酰糖基苯并咪唑化合物6A16A36B16B36C16C3对肝癌（HEPG2细胞）和肺癌（A549细胞）的细胞毒性，糖基化的苯并咪唑类化合物的抗肿瘤活性得到了一定的提升，其中部分化合物具有较好的抗肝癌和抗肺癌活性。并通过对脱保护得到的糖基苯并咪唑化合物7A27B27C2的抗肿瘤活性测试初步解释了化合物6A26B26C2对A549细胞的活性测试的异常现象。另外，我们模拟体外细胞迁移过程，通过划痕实验研究了新化合物6A16A36B16B36C16C3和7A17A37B17B37C17C3对HEPG2细胞和A549细胞迁移的影响。本论文主要合成了一系列基于葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖为糖源的新的糖基修饰的杂环化合物前体，并合成35个新的糖基苯并咪唑和异噁唑类化合物，初步研究了其抗肿瘤活性，为进一步研究糖基苯并咪唑类化合物的生物活性奠定了一定的基础。

简介：目的运用计算机辅助设计方法，针对已提取出的天然产物，进行必要的结构修饰与改造，使化合物靶向作用于组蛋白去乙酰化酶HDAC以得到新型靶向性的抗肿瘤HDAC抑制剂。方法运用SYBYL、DS25软件构建HDAC3分子模型，运用GOLD软件对接设计的化合物与HDAC受体，形成可视化的对接构象，通过CHIMARA软件作图，分析化合物与受体大分子的对接模型，指导设计HD系列化合物的设计；查阅文献，寻找可行的合成线路运用BOC保护、酰胺缩合、脱BOC保护、肟化反应等技术合成所设计的化合物；运用薄层色谱法初步确定化合物的纯度以及反应程度，用核磁共振氢谱最终确认化合物结构；运用HDAC酶试剂盒检测待测化合物对HDAC酶的抑制能力，并结合化合物对接结果，讨论苯甘氨酸系列化合物的构效关系，发现与靶点作用的关键结构以及氨基酸残基，指导下一轮的化合物设计；运用CCK8法检测各待测化合物在25ΜM浓度下对肿瘤细胞K562、U937、MDAMB231、PC3的抑制能力，初步判断各化合物的体外抗增殖能力；选出活性较好的化合物，检测其对肿瘤细胞PC3、U937、MDAMB231、HL60、K562、SKOV3的IC50值。结果计算机模拟结果表明，HD系列化合物的脂肪链LINKER可进入HDAC口袋，羟肟酸与HDAC3口袋底部的锌离子特异性螯合，苯甘氨酸的CAP结构与HDAC酶表面产生疏水作用；薄层色谱显示所有HD化合物跑板后在紫外灯下呈现单个浓点，存在拖尾现象，加入一滴冰醋酸后拖尾消失，遇三氯化铁溶液变为紫红色，表明所合成终产物均为纯净的异羟肟酸衍生物；核磁共振氢谱结果表明，所有化合物结构正确，苯甘氨酸苯环的五个氢信号约在Δ7275，而苯甘氨酸的H信号位于Δ570左右，形成DOUBLE峰，羟肟酸上的两个氢出现在Δ88、Δ102左右，均为SINGLE峰，LINKER侧链的三个CH2分别在Δ13、Δ18、Δ28左右，形成多重峰；酶活结果表明，含有炔烃侧链的先导化合物HD1对HDAC酶的抑制能力较海洋类提取物O1强，但弱于其他HD系列化合物IC5013ΜM；该系列化合物中HD9、HD10的活性最高，IC50分别为76、108NM活性好于阳性对照SAHAIC50146NM引入磺酰CAP结构后化合物的酶结合能力有所下降，说明该结构降低了受体配体间的作用，而含有叔丁基苯磺酰胺的HD20活性较强，IC50为017ΜM，在苯磺酰胺结构苯环上的对位溴取代可增强化合物的活性，其次为氯取代、硝基取代、氟取代；CCK8结果表明，HD系列化合物均可在低浓度ΜM抑制各种肿瘤细胞的增殖，其抗体外增殖能力与待测化合物的酶抑制能力呈正相关；并且该系列化合物对白血病细胞的抑制能力强于实体瘤细胞，该结论与国内外文献报道一致；HD9、HD10的活性最高，HD9对U937、K562、HL60、MDAMB231、PC3、SKOV3的IC50值分别为051、083、076、294、366、317ΜM，均好于阳性对照SAHA；HD10对肿瘤细胞系的抑制能力强于SAHA，而HD20对肿瘤细胞系的抑制作用弱于SAHA。结论本实验合成了可靶向于HDAC的苯甘氨酸羟肟酸衍生物，其代表化合物HD9具有优良的抗肿瘤活性。

简介：第一部分、靶向相变型载HCPT液态氟碳脂质纳米造影剂FAFE3O4PFPHCPTLIPID的制备及性能检测目的制备一种叶酸修饰的靶向相变型载HCPT液态氟碳脂质纳米粒（FAFE3O4PFPHCPTLIPID），检测其粒径电位、稳定性、相变特性、药物含量、药物释放及体内外靶向性等。方法采用旋转蒸发超声法制备靶向相变型载HCPT液态氟碳脂质纳米粒FAFE3O4PFPHCPTLIPID，对其形态大小特征、粒径电位、铁含量进行检测。并于制备后不同时间点（05H1H2H6H12H24H36H48H60H72H96H）测量纳米粒粒径，光镜下观察不同温度下（40℃、45℃、50℃和55℃）纳米粒的相变情况，用高效液相色谱法检测FAFE3O4PFPHCPTLIPID内的药物含量、体外药物释放及低强度聚焦超声LIFU促进药物释放。使用细胞实验和动物实验验证纳米粒FAFE3O4PFPHCPTLIPID的靶向性能。结果制备的FAFE3O4PFPHCPTLIPID纳米乳呈棕褐色，光镜及荧光显微镜下纳米粒呈球形或点状，透射电镜显示细点状FE3O4颗粒均匀分布在壳层内。MALVERN激光粒径仪检测出FAFE3O4PFPHCPTLIPID粒径321±67NMZETA电位为50MV。原子吸收光谱法测得不同浓度的FAFE3O4PFPHCPTLIPID纳米乳（5ΜGML1，10ΜGML1，20ΜGML1，40ΜGML1，80ΜGML1，160ΜGML1，320ΜGML1，640ΜGML1，1280ΜGML1和2560ΜGML1）中的FE浓度分别为（043±008ΜGML1，071±009ΜGML1，163±031ΜGML1，352±121ΜGML1，760±135ΜGML1，1505±316ΜGML1，2912±405ΜGML1，5332±525ΜGML1，11765±636ΜGML1和23637±1197ΜGML1）。在4℃条件下，纳米粒粒径在48小时内无明显增大，48小时后粒径缓慢增大。40℃时纳米粒基本保持稳定，45℃时部分纳米粒发生液气相变，体积增大，50℃时相变纳米粒数量明显增多，体积增大明显，55℃时仅存少量相变纳米粒。FAFE3O4PFPHCPTLIPID乳液药物包封率为6051±233，载药量为833±057。体外药物释放试验显示，FAFE3O4PFPHCPTLIPID乳液内的药物HCPT呈缓慢释放，24小时释放约25，48小时释放约60，60小时后药物释放趋平缓。随着LIFU强度的增加，药物释放量亦随着增加。结论本实验成功的制备了造影剂FAFE3O4PFPHCPTLIPID，形态规则，大小较均匀，性质稳定，具有较好的液气相变的能力，能够在LIFU作用下释放药物。第二部分、FAFE3O4PFPHCPTLIPID造影剂增强超声、光声及磁共振显像研究目的观察FAFE3O4PFPHCPTLIPID造影剂体外增强超声、光声和磁共振显像的效果，研究其作为多模态造影剂的可行性；体内实验了解FAFE3O4PFPHCPTLIPID造影剂增强超声、光声和磁共振显像的能力。方法本部分实验分为三节分别进行。在第一节中首先使用加热的方法，了解在不同温度条件下纳米乳增强超声显影的效果，并于显微镜下观察加热后纳米粒相变情况。体外及体内声致相变实验中，LFIU仪使用不同声强度（08WCM2、16WCM2、24WCM2、32WCM2）及不同时间（1MIN、2MIN、3MIN、4MIN），观察LIFU辐照后纳米乳于体外及体内增强超声显影的效果，了解导致纳米粒相变的最佳LIFU辐照强度及时间。在第二节里，将FE3O4溶液、FAFE3O4PFPHCPTLIPID乳液及FAPFPHCPTLIPID乳液分别行光声显影实验，了解FE3O4增强光声信号的效果。并用不同浓度FAFE3O4PFPHCPTLIPID行光声显影，了解光声信号强度的变化。在细胞光声实验中，SKOV3细胞与FAFE3O4PFPHCPTLIPID纳米粒孵育不同时间后观察细胞光声信号强度。体内光声实验中，经裸鼠尾静脉分别注射FAFE3O4PFPHCPTLIPID乳液、FE3O4PFPHCPTLIPID乳液和不含FE3O4的造影剂FAPFPHCPTLIPID乳液，于注射之后05H、1H、6H分别行光声显像。在第三节里，将FAFE3O4PFPHCPTLIPID纳米乳配置成不同的浓度，观察磁共振显影的差异。体内磁共振实验中，经裸鼠尾静脉分别注射FAFE3O4PFPHCPTLIPID乳液、FE3O4PFPHCPTLIPID乳液和不含FE3O4的造影剂FAPFPHCPTLIPID乳液，于注射之后05H、1H、6H分别行磁共振显像。结果在第一节中，谐波超声模式下，水浴锅温度为40℃时，水囊内无增强。45℃和50℃时，水囊内显影明显增强。至55℃时，水囊内回声增强又相对减弱。于45℃和50℃水囊吸出的乳液在光镜下可见到较多气泡产生。体外LIFU声致相变实验结果显示，24WCM2、2分钟有最佳的声致相变效果，此时显微镜下相变气泡较多。体内相变实验结果显示，32WCM2、2分钟的LIFU条件具有最佳的体内相变效果。在第二节里，FE3O4和FAFE3O4PFPHCPTLIPID乳液显示较强的光声信号，而FAPFPHCPTLIPID乳液几乎不显示光声增强信号。FAFE3O4PFPHCPTLIPID的光声信号随着FE3O4浓度的升高而逐渐增强。细胞光声实验中，随着纳米粒与SKOV3细胞孵育时间的延长，光声信号明显增加。体内光声实验中，注射FAFE3O4PFPHCPTLIPID乳液的裸鼠其肿瘤于注射后1小时显示明显光声信号，肿瘤局部光声信号强度值明显高于另外两组（P＜005）。在第三节的体外实验中，FAFE3O4PFPHCPTLIPID呈现磁共振负性显影，且随着装载的FE3O4浓度的增加，MR信号强度逐渐下降。体内磁共振实验中，注射FAFE3O4PFPHCPTLIPID的裸鼠其肿瘤于注射后1小时显示明显磁共振负性显影信号，肿瘤局部磁共振信号强度值明显低于另外两组（P＜005）。结论FAFE3O4PFPHCPTLIPID造影剂能够于体内外增强超声、光声和磁共振显像，具备成为多模态造影剂的潜能。第三部分、FAFE3O4PFPHCPTLIPID造影剂靶向治疗卵巢癌实验研究目的了解FAFE3O4PFPHCPTLIPID造影剂及药物HCPT在裸鼠体内的分布情况，以及FAFE3O4PFPHCPTLIPID造影剂对SKOV3卵巢癌的靶向治疗效果。方法造影剂及药物体内分布实验将30只荷瘤裸鼠随机分为两组，分别经尾静脉注射携荧光DII的造影剂FAFE3O4PFPHCPTLIPID乳液和FE3O4PFPHCPTLIPID乳液，于注射后05H，1H，6H，12H，24H脱颈处死裸鼠，瘤块行超薄切片，显微镜下观察切片内造影剂分布情况。取50只荷瘤裸鼠随机分为两组，分别经尾静脉注射HCPT注射液和FAFE3O4PFPHCPTLIPID纳米乳，于注射后05H，1H，6H，12H，24H眼球取血处死裸鼠，检测血清内药物浓度分布，同时取裸鼠重要脏器及肿瘤组织匀浆后行高效液相色谱法检测各组织内药物浓度。另外检测LIFU作用后肿瘤局部药物浓度分布。靶向治疗实验将30只裸鼠随机分为6组分别给予不同的处理FAFE3O4PFPHCPTLIPIDLIFU组；FAFE3O4PFPHCPTLIPID注射液组；HCPT组；FAFE3O4PFPLIPIDLIFU组；FE3O4PFPHCPTLIPID注射组；生理盐水组。治疗后测量肿瘤大小，计算肿瘤生长曲线及抑瘤率。行免疫组织化学检测肿瘤细胞的增殖和凋亡。结果造影剂及药物体内分布实验靶向组肿瘤超薄切片各时间点均可见荧光，1小时荧光最明显。而非靶向组未见荧光显示。在每一个检测时间点，FAFE3O4PFPHCPTLIPID纳米乳组裸鼠的血药浓度均高于HCPT注射液组。FAFE3O4PFPHCPTLIPID注射液组的肿瘤组织药物浓度显著高于HCPT注射组P＜005，而FAFE3O4PFPHCPTLIPIDLIFU组的肿瘤组织药物浓度显著高于FAFE3O4PFPHCPTLIPID纳米乳注射液组P＜005。靶向治疗实验FAFE3O4PFPHCPTLIPIDLIFU组裸鼠肿瘤生长指数最低，抑瘤率最高。免疫组化结果显示，FAFE3O4PFPHCPTLIPIDLIFU组的增殖指数最低（P＜005），凋亡指数最高（P＜005）。结论纳米粒FAFE3O4PFPHCPTLIPID可以延缓药物HCPT在体内的存留时间，靶向结合于肿瘤细胞的纳米粒，在低强度聚焦超声LIFU的作用下，对裸鼠卵巢癌有良好的治疗效果，有望对肿瘤的治疗开辟新的途径。

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简介：当今世界，人们生活水平正逐渐提高，而与之同时到来的是各种疾病的传播。其中，糖尿病就是危害人类身体健康的一类重大疾病。随着糖尿病患病人数的增加，用于治疗糖尿病的药品需求量也随之增长。伴随着当今科学及医疗技术的发展，越来越多的新药开始被研究者们研发并合成。其中二肽基肽酶4抑制剂DPP4INHIBIT是近几年内飞速发展的一类降糖新药。奥格列汀MK3102是默沙东公司于2014年申请的DPP4抑制剂类药物的最新降糖药物。奥格列汀与其他同类药物相比，最显著优点是其半衰期明显增长。本实验以目前实践可行的奥格列汀的合成方法作为基础，以改善合成方法为目的，通过优化路线以及工艺参数的改进以改变整体合成路线的经济性。本实验以25二氟苯甲醛和1叔丁氧碳基3吡咯烷酮两种物质为原料，采用常用的有机合成方法，分别合成5氧代225二氟苯基四氢2H吡喃3基氨基甲酸叔丁酯及2甲磺酰基2456四氢吡咯并34C吡唑对甲苯磺酸盐。两中间体进一步反应生成产物奥格列汀消旋体。在实验过程中，我们同时对指定的合成路线进行了优化及改进。如（1）使用JONES试剂对DESSMARTIN氧化剂进行替代，节省成本；（2）使用三氯化钌作为贵金属盐催化剂，替代了剧毒的四氧化锇；（3）对化合物3甲基5硝基625二氟苯基34二氢2H吡喃和化合物反式5甲基3硝基225二氟苯基四氢2H吡喃合成的反应条件分别进行优化，提高产率。

简介：目的了解某医院伏立康唑预防治疗侵袭性真菌病的临床应用情况，评价伏立康唑用药的安全性和有效性，分析伏立康唑的用药合理性；分析伏立康唑治疗药物监测结果、血药浓度可能的影响因素及血药浓度与不良反应的关系。方法1利用医院信息管理系统及电子病历系统回顾性检索2016年1月1日2016年12月31日使用伏立康唑的住院患者，查阅病历，填写调查表，利用MICROSOFTEXCEL2010软件建立数据库汇总分析伏立康唑的临床应用情况。根据临床疗效和不良反应评价标准对伏立康唑使用后的临床疗效及不良反应进行评价。2制定伏立康唑合理性评价标准，对抽取的患者病历伏立康唑使用情况进行合理性评价。3利用HPLC测定伏立康唑血药浓度。4记录测定伏立康唑谷浓度的患者相关信息，结合患者的临床资料，对测定的伏立康唑谷浓度结果进行分析，分析伏立康唑血药浓度的影响因素以及伏立康唑血药浓度与不良反应的关系。结果12016年1月2016年12月共计有425例至少使用过一次伏立康唑的住院患者纳入研究，患者的平均年龄为58岁，男性占654，平均住院时间为2780天，应用最多的科室为呼吸科和血液科，合并的基础疾病主要是血液系统恶性肿瘤、实体恶性肿瘤和糖尿病。IFD以经验性治疗为主（5953），感染部位以肺部最常见（6863），预防性使用占280。病原菌送检率为953，分离培养出病原微生物61株，标本来源多为痰（5082），病原菌仍以白色念珠菌为主。9482患者联合应用抗菌药物，联合应用的品种以含酶抑制剂复合制剂和糖肽类最为常见。306例治疗性应用伏立康唑治疗患者中，临床有效率为6667（204例），拟诊患者伏立康唑治疗的临床有效率较临床诊断、确诊的患者高，但无统计学差异（P0062）。425例使用伏立康唑的患者不良反应的发生率为120。其中男性占7059，平均年龄为6375岁，给药途径以静脉为主（8431），伏立康唑ADR最常累及的是神经系统，临床表现以幻觉和精神兴奋最为常见，停药或给予相应的对症处理后均好转。425例使用伏立康唑的患者有340例使用不合理，不合理率为800，其中最常见的不合理形式为用药剂量不合理，主要表现为未给予负荷剂量或负荷剂量不足，肝肾功能受损患者的给药剂量不适宜。2共计纳入43例患者52例次的伏立康唑血药浓度，患者平均年龄为5343岁，体重平均值为580KG，患者的年龄、体重、性别、ALT、AST、CR、CRCL均与血药浓度无关，仅TBIL与伏立康唑血药浓度具有关联（P0036）。伏立康唑血药浓度个体差异性大，最低为014ΜGML，最高达2463ΜGML。伏立康唑血药浓度在安全有效范围（155ΜGML）的比例为5385，2885患者伏立康唑未能达到有效浓度范围。血药浓度55ΜGML时，ADR的发生率明显高于其他组。结论伏立康唑治疗侵袭性真菌病临床有效率高，不良反应发生率较高，但均较轻。临床伏立康唑不合理用药现象严重，主要体现为给药剂量不适宜。药师应及时提醒医生，加强医生合理使用伏立康唑的水平。伏立康唑的血药浓度个体差异性大，仅TBIL与血药浓度具有关联性。如医院条件允许，在使用伏立康唑时应常规监测伏立康唑的血药浓度。

简介：随着医疗的改革发展，药房规模的扩大，日常药品的需要也是与日俱增，导致药品进出次数也不断增加，这就会产生大量的进货和存货的数据。面对大量的药品进销存信息，如果采用人工模式处理，进度会非常慢，而且容易出现错漏，而且最终数据汇总和统计会非常困难。由于每天销售量很大，出现错账和空单的情况也不少见。随着信息管理的推行，传统的管理已经不能满足日常的需求。急需要开发适合药房等机构的进销存系统，来为药品的进出货管理提供支持。为了能够通过信息技术的方式，来对药品信息在流通过程中产生的数据进行自动化管理，提出药品进销存管理系统的主题研究。通过采购入库和销售出库，实现不同的进销存流程，使管理过程实现最大程度的自动化与信息化，使得药店的进销存管理更加地清晰化、透明化，使得用户操作上更加便捷，流程更加简化。系统主要功能是采购入库、销售出库及库存预警，结合药品的进、销和存的功能。库存的实时更新与浏览，以及药品信息的统计查询。实现对药品进销存流程的管理功能。本文中主要介绍了采购入库和库存预警等业务流程和分析，接着，是对系统的体系功能进行设计。然后是具体功能的流程、时序和类图设计工作，最后，是对实现测试过程的说明。

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简介：共聚物聚乙二醇聚（己内酯）（MPEGPCL）可以在水中自组装成为胶束，由于其生物相容性和可降解性，被广泛应用到药物递送系统的研究中。PCL疏水链段是无定形态和结晶形态共存，作为聚合物胶束的疏水内核可以达到比较客观的载药量。为了研究不同疏水段链长度以及比例对载药胶束递送系统的影响，合成了四个相对分子质量不同的高分子聚合物，分别为MPEG5000PCL1000，MPEG5000PCL3000，MPEG5000PCL5000，MPEG5000PCL8000。制备了聚合物胶束并研究其理化性质。考察了载阿霉素药物胶束的体外抗肿瘤活性。制备三维肝癌肿瘤球模型和裸鼠原位肝肿瘤模型，考察了材料的肿瘤穿透性。MPEGPCL共聚物是以聚己内酯单甲醚作为引发剂，辛酸亚锡为催化剂通过阴离子聚合的方法合成的。聚合产物的分子量可以通过单体和引发剂的比例进行控制，采用核磁共振（1HNMR）和凝胶渗透色谱（GPC）表征合成目标共聚物分子量和分子组成；通过溶剂挥发法制备四种聚合物胶束，考察了不同疏水嵌段长度对胶束粒径的影响；采用透射电镜（TEM）表征了胶束的形貌特征；以阿霉素DOX为药物，透析法制备载药胶束，通过体外药物释放试验模拟阿霉素即时释放的特性；CCK8法考察MPEGPCL胶束对人静脉内皮HUVEC细胞和肝癌HEPG2细胞的毒性；还考察了载阿霉素药物MPEGPCL胶束对肝癌HEPG2细胞的生长抑制作用；构建了肝癌HEPG2细胞肿瘤球模型，通过激光共聚焦显微镜观察四种载药胶束在肿瘤球内和单层细胞的分布，观察到单层细胞对药物的摄取情况，通过比较肿瘤球内DOX荧光强度定性的模拟了药物在肿瘤中渗透的情况。将肝癌HEPG2细胞接种于BALBC裸鼠皮下，形成皮下移植瘤后再移植到裸鼠肝内，尾静脉注射载荧光胶束，通过小动物活体成像观察药物的分布。结果表明MPEGPCL成功合成，所合成的聚合物分子量与设计分子量相符；激光动态光散射（DLS）测定四种胶束粒径均小于100NM，随着共聚物疏水链的增加粒径逐渐增大。电镜照片可以清晰的看出空白胶束呈圆球形，且大小分布均匀。PCL疏水链段越长的共聚物降解越缓慢，增加抗肿瘤药物稳定性，在体内可以实现长循环；细胞存活率都在90％以上，表明材料生物相容性好。四种载药胶束对癌细胞生长均有明显抑制作用，IC50与释放曲线吻合。比较加入载药胶束4H后单层细胞和三维肿瘤球的荧光强度，胶束被细胞内吞然后释放药物发挥作用，载体将药物运载至肿瘤细胞并且一部分已经释放入核。相比较单层细胞，肿瘤球同一种化疗药物敏感性差，与人体内环境下药物的治疗情况相似。相同的培养时间和药物浓度，MPEG5000PCL5000更容易穿透肿瘤球模型。说明尺寸为80100NM的粒子有更好的肿瘤球穿透性。裸鼠肝癌原位移植模型构建成功率高，尾静脉注射载近红外染料卟啉的MPEG5000PCL5000和MPEG5000PCL8000聚合物胶束后用小动物成像系统扫描荧光，体内体外肿瘤穿透试验显示载药MPEG5000PCL5000聚合物胶束有较好的透过实体肿瘤的效果。因此，高分子聚合物通过控制合适的亲疏水链长和比例，可作为疏水性抗癌药物的良好载体，控制载体粒径的大小的有利于穿透肿瘤模型，为后续纳米胶束设计提供一定依据。

简介：缺血性心脏病（ISCHEMICHEARTDISEASE，IHD）是一类冠状动脉疾病，它是世界范围内最常见的死亡原因之一。国内外公认的传统疗法有药物治疗、介入治疗和外科手术治疗三种，其中药物治疗安全有效，但许多治疗药物不能有效浓集于心肌，所以探索新的更具靶向性的药物载体已经成为该领域的研究趋势。脂质体是最常用的靶向给药系统之一，通过配体修饰脂质体表面，脂质体可经受体或电荷介导的内吞作用进入细胞，可有效地提高靶向效率，精确地靶向靶细胞或靶组织，从而提高生物利用度，减少副作用。PCM（WLSEAGPVVTVRALRGTGSW）是通过噬菌体展示技术筛选出的由20个氨基酸组成的肽段，是一种心肌细胞特异性靶向肽。TAT是近年来广泛应用于修饰药物和药物载体的一种细胞穿膜肽，它由11个氨基酸YGRKKRRQRRR组成，可将与之相连的药物或药物载体以一种浓度依赖的方式高效、快速地导入细胞内。本文制备了PCM和TAT修饰的脂质体，以香豆素6和EGFP质粒分别作为传统药物和基因药物的模型药物。通过体外和体内实验研究了载香豆素6的PCM和TAT双修饰脂质体的心肌靶向性，结果表明，PCM和TAT双修饰的脂质体具有良好的心肌靶向性。通过体外实验初步研究了载EGFP质粒的PCM修饰的脂质体的心肌转染效率，结果表明，PCM修饰的脂质体具有良好的心肌细胞转染效率。本文设计并构建了PCM和TAT双修饰的脂质体，用以提高脂质体向心肌的传递能力。第一部分对载香豆素6的PCM和TAT双修饰的脂质体的制备工艺和处方进行了筛选。首先采用操作简单，制备工艺稳定的薄膜分散超声法制备脂质体，再利用PCMCYS和TATCYS中半胱氨酸的巯基与DSPEPEG2000MAL中马来酰亚胺的双键发生加成反应，将多肽连接于脂质体表面。以包封率为指标，筛选了香豆素6的最佳用量及PCM和TAT的连接方式。通过研究H9C2细胞对不同脂质体的摄取率，筛选出PCM的最佳用量为脂质的3，TAT的最佳用量为脂质的1。筛选得到的双修饰脂质体形态圆整，粒径在115NM左右。第二部分对载香豆素6的PCM和TAT双修饰脂质体进行了体外评价，初步验证了双修饰脂质体的心肌靶向性。制备了载香豆素6和未载香豆素6的未修饰的普通脂质体LIP，3PCM修饰的脂质体3PLIP，1TAT修饰的脂质体1TLIP以及1PCM和1TAT双修饰的脂质体3P1TLIP。通过CCK8试验测定了各种未载香豆素6的脂质体的毒性，结果表明脂质体用量小于等于04MM时，各种脂质体无明显毒性。通过共聚焦显微镜和流式细胞术定性和定量地研究了原代心肌细胞对不同脂质体的摄取，结果各种脂质体的细胞摄取率3P1TLIP3PLIP1TLIPLIP。同时还研究了游离多肽PCM和TAT对脂质体摄取的影响，结果游离PCM抑制PCM修饰脂质体的摄取，而游离TAT对TAT修饰脂质体的摄取无明显抑制。第三部分对载香豆素6的PCM和TAT双修饰脂质体进行了体内评价，进一步验证了双修饰脂质体的心肌靶向性。首先对尾静脉给予了载香豆素6的各种脂质体的昆明小鼠心脏组织冰冻切片进行定性观察，然后对尾静脉给予载香豆素6的各种脂质体后香豆素6在各脏器内的含量采用HPLCFLD法进行定量测定。定性观察和定量测定结果显示各种脂质体的心脏蓄积量3P1TLIP3PLIP1TLIPLIP，说明双修饰脂质体具有较好的心肌靶向性。3P1TLIP，3PLIP，1TLIP和LIP在肝、脾、肺、肾等器官也有一定的分布，但3P1TLIP与对照组相比心肌蓄积量明显增加，而在肝、脾、肾、肺的分布没有明显增高。第四部分对载增强绿色荧光蛋白表达质粒（PEGFP）的PCM修饰脂质体的制备工艺和体外靶向性进行了研究，拟用于提高载基因治疗药物的脂质体的心肌传递能力。此部分增加DOTAP为阳离子脂质材料，采用薄膜分散超声法制备脂质体，再将DSPEPEG2000PCM制成胶束插入脂质体。制备了未修饰的普通脂质体LIP，1PCM修饰的脂质体1PLIP，3PCM修饰的脂质体3PLIP和5PCM修饰的脂质体5PLIP。通过测定PCM的连接率筛选了PCM的连接方法，通过琼脂糖凝胶电泳考察了脂质体的载药能力。通过定性观察和定量测定考察了不同量PCM修饰脂质体对心肌细胞的转染效果，筛选了PCM的最佳用量为3。制备得到的载PEGFP的LIP和3PLIP的粒径分别为2124±295NM和2619±220NM，连接PCM后脂质体粒径增大。综上所述，本课题成功制备了载香豆素6的PCM和TAT双修饰脂质体，经体内外实验研究表明该系统是具有潜力的心脏疾病药物传递系统。还制备了载PEGFP的PCM单修饰的脂质体，体外实验初步证明PCM修饰的脂质体具有一定的心肌靶向性，但该系统还待进一步验证其体内靶向性。

简介：DEFENSIN是宿主防御肽（HOSEDEFENSEPEPTIDESHDPS）家族的重要成员之一，广泛存在于几乎所有物种，包括脊椎动物、无脊椎动物、昆虫、植物甚至微生物。DEFENSINS除了具有直接的杀菌功能外，还具有免疫调节功能，是连接宿主自然免疫和获得性免疫的桥梁。目前，DEFENSIN成为少数几类进入临床研究的肽类抗生素之一，该家族的PMX30063已经完成了系统性感染适应症的Ⅰ期临床，金葡菌引起的急性细菌性皮肤感染适应症也已完成临床Ⅱ期。爬行纲物种的肽类分子由于活性强、效价高，成为了先导模板发掘的重要来源。而爬行纲DEFENSIN却鲜有报道，且仅限于基因克隆，缺少相应的功能验证。本研究在NCBI爬行纲数据库中定向发掘得到了26条全新的ΒDEFENSINS序列，属于爬行纲龟鳖目鳖科中华鳖属（PELODISCUSSINENSIS），分别命名为PSBD126。PSBDS具有ΒDEFENSIN家族共有的特征其前体由高度保守的信号肽区域，极短的中间间隔区以及成熟肽区域组成。尽管PSBDS成熟肽区是高度变异的，但仍含有ΒDEFENSIN家族6个保守的CYS残基以及GXC基序。通过构建的系统发育树分析得出ΒDEFENSIN是一类高速率序列替换的进化速率较快的基因，而多重基因复制是导致其成熟肽区域高度差异性的原因。随后对PSBDS的组织表达谱及结构进行研究，试图解析ΒDEFENSIN在宿主体内可能参与的防御反应及行使生物学功能的结构基础。通过RTPCR获得了PSBD2、PSBD6、PSBD11、PSBD16以及PSBD21的组织表达谱，结果显示在与外源性物质发生直接接触的器官（皮肤，肺，胃）以及与机体免疫相关的器官（肝脏，肾脏，小肠）中PSBDS的表达量均较高。利用ROSETTAABINITIO对5条代表性PSBDS同源建模，揭示了PSBDS主要含有Β片层结构，少数还含有两亲性的ΑHELIX结构，而这两种二级结构恰是ΒDEFENSIN家族行使生物学功能的结构基础。最后，我们构建了毕赤酵母真核表达载体，对PSBD2进行了高效表达，纯化后得到重组蛋白RPSBD2，并进行了生物学功能验证。结果表明RPSBD2具有广谱抗菌活性，相较于革兰氏阴性菌以及真菌，其对革兰氏阳性菌的活性更强。同时RPSBDS对正常细胞几乎没有毒性，对红细胞无溶血性。进一步证明了DEFENSIN在宿主对抗外界病原微生物感染起重要作用，同时RPSBD2在未来的临床应用上也具有一定的指导意义。

简介：目的急性肺损伤（ACUTELUNGINJURYALI）是临床上危及生命的急重症，急性呼吸窘迫综合征（ACUTERESPIRATYDISTRESSSYNDROMEARDS）是其严重形式。ALI发病机制复杂，病死率高，失控性炎症反应是ALI发生发展的关键机制。腺苷酸活化蛋白激酶（AMPACTIVATEDPROTEINKINASEAMPK）是细胞内的重要代谢调节酶，但近年来研究表明AMPK可在多种体内外模型中发挥抗炎效应。临床上常用的降糖药二甲双胍（METFMINMET）可通过激活AMPK而发挥降糖及抗炎效应。本研究探讨了MET在ALI中的潜在药理学效应及相关机制。方法选用雄性BALBC小鼠，采用脂多糖（LIPOPOLYSACIDELPS）腹腔注射（15MGKG）模拟全身感染诱发的ALI小鼠模型，MET（400MGKG）在LPS注射前30MIN经腹腔注入。为探讨MET的药理效应是否与AMPK有关，AMPK抑制剂COMPOUNDC（15MGKG）在MET注射前30MIN经腹腔注入，或采用AMPK激活剂A769662（30MGKG）替代MET在LPS注射前30MIN经腹腔注入。为探讨AMPK是否通过激活沉默信息调节因子1（SIRTUIN1SIRT1）或抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1（MAMMALIANTARGETOFRAPAMYCINCOMPLEX1MTC1）发挥效应，SIRT1抑制剂EX527（10MGKG）或MTC1激活剂3BDO（100MGKG）在A769662注射前30MIN经腹腔注入。上述小鼠均在LPS注射后18H断颈处死，收集血浆及肺组织标本，ELISA法检测血浆及肺组织中促炎细胞因子肿瘤坏死因子Α（TUMNECROSISFACTΑTNFΑ）和白细胞介素6（INTERLEUKIN6IL6）的水平，HE染色法观察肺组织形态学异常，免疫印迹法检测肺组织中AMPK的总蛋白及其磷酸化水平、MTC1下游靶蛋白P70S6K1和4EBP1的总蛋白及其磷酸化水平。结果（1）MET处理可抑制LPS诱导的ALI模型小鼠血浆和肺组织中促炎细胞因子TNFΑ和IL6的表达，这伴随有模型小鼠肺组织形态学异常的减轻。（2）MET处理也可使AMPK的磷酸化水平升高，而采用AMPK抑制剂COMPOUNDC抑制MET对AMPK的激活效应后，MET在模型小鼠中的抗炎及肺组织保护效应被阻断。（3）与此相一致，采用AMPK激活剂A769662可模拟MET在ALI中的抗炎保护效应，表现为血浆中IL6的水平明显降低、肺组织学异常显著减轻。（4）AMPK激活剂A769662对IL6产生的抑制效应不能被SIRT1抑制剂EX527所阻断，但MTC1激活剂3BDO可显著阻断A769662对IL6产生的抑制效应及其对肺组织损伤的保护作用。（5）LPS暴露可诱导肺组织中MTC1下游靶蛋白P70S6K1和4EBP1的磷酸化水平升高，而MET处理可抑制P70S6K1和4EBP1的磷酸化；MET对P70S6K1和4EBP1的抑制效应也可被AMPK抑制剂COMPOUNDC阻断。结论本研究的实验数据提示MET可在LPS诱导的ALI模型中发挥抗炎保护作用，其机制可能与MET激活AMPK从而下调MTC1活性有关。本研究揭示了MET通过AMPK发挥抗炎效应的一个新机制，也提示MET可能在ALI中具有潜在的应用价值。