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    • 简介:同济医科大学硕士学位论文调宁蛋白的功能位点及其在慢性缺氧时的变化的研究姓名唐艳霞申请学位级别硕士专业病理生理学指导教师王迪浔唐大椿19990401竺篓苎竺竺』苎4、连续多代缺氧培养的肺动脉平滑肌细胞第2、4、6代CA|PONIN含量比常氧组分别增加13倍,2倍,25倍。结果提示1、THR184可能是CAP磷酸化作用的一个位点,与血管收缩反应有关;2、长期缺氧可致CALPONIN水平升高,这可能是缺氧导致肺动脉对缺氧的收缩反应减弱的机制之一。7L,、。2
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    • 简介:中国人民解放军军事医学科学院博士学位论文新的红细胞分化相关基因的功能研究姓名王敦成申请学位级别博士专业分子免疫学指导教师沈倍奋200161博士学位论文英文缩略词表IL一6RHUMANINTERLCUIN6RECEPTOR白介素6受体INOSHUMANINDUCIBLENITRICOXIDESYNTHASE诱导型氮氧化物合酶KBKILOBASES千碱基LCRLOCUSCONTROLREGION基因座位控制区MCSFIFAMNMACTOPBAGECOLONYSTIMUIA曲GFACTOR巨噬细艚集落生成因子MCSFHUMANMACROPHAGECOLONYSTIMULATINGFACTOR巨噬细胞集落生成因子MCSFRHUMANMACROPHAGECOLONYSTIMULATINGFACTOR人巨噬细胞集落生成因子受体RECEPTORMHCCLASSMAJORHISTOCOMPATIBILITYCOMPLEXCLASS1人主要组织相容性复合物I类LMTNMUHVTISSUENORTHERN多组织NONHCMNCBINATIONALCENTERFORBIOTECHNOLOGYINFORMATION美国家生物技术信息中心NFE2NULEARFACTORERYTHROID2红系核因子2ODOPTICALDENSITY光密度P50HUMANNFKAPPABETA核因子X的B链PAGEPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESIS聚丙烯酰氨凝胶电泳PBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸盐缓冲液PBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸盐缓冲液PCRPOLYMERASECHAINREACTION聚合酶链式反应PDGFAHUMANPLATELETDERIVEDGROWTHFACTORA血小板【源性长因子APDGFEHUMANPTATELETDARIVEDGROWTHFACTOR0娅小板【源】生长因子BPEGPOLYETHYLENEGLYCOL聚乙二醇PKCPROTEINKINASCC蛋白激酶CRACERAPIDAMPLIFICATIONOFEDNAENDSCDNA末端快速扩增RTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAINREACTION反转录PCRSCFSTEMCELLFACTOR千细胞园子SCLHUMANSTEMCELTLEUKEMIAGENE干细胞白血病基因SDSSODIUMDODECYLSULFATET二烷基磺酸钠SSCSTANDARDSALINECITRATE标准柠檬酸盐缓冲液STATSIGNALTRANSDUCERANDACTIVATOROFTRANSCRIPTION信号转导子与转录激活子TGFAHUMANTUMORNECROSISFACTORRECEPTOR人肿瘤坏死因子ATGFAHUMANTRANSFORMINGGROWTHFACTORN转化生长因子ⅡTGPB1HUMANTRANSFORMINGGROWTHFACTOR8I转化生长因子B1TGFB2HUMANTRANSFORMINGGROWTHFACTOR目2转化生眭园子B2TNFRIHUMANTUMORNECROSISFACTORRECEPTORT55KD人肿瘤坏死因子受体ITNFRIIHUMANTUMORNECROSISFACTORRECEPTOR人肿瘤坏死因子受体III75KDATNFBHUMANTUMORNECROSISFACTORBB2MHUMAN82MIEROGLOBULIN人肿瘤坏死因子B02微球蛋白
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    • 简介:目的建立三色法流式细胞术检测T淋巴细胞内细胞因子的方法;探讨核因子ΚB在支气管哮喘患者T淋巴细胞表达TH1TH2类细胞因子Γ干扰素ΓIFN白细胞介素4IL4的调控信号传导中的作用。方法1正常人外周血在12肉豆蔻酰13乙酸佛波酯PMA、IONOMYCIN和MONENSIN存在的条件下在体外短期培养,进行细胞膜表面抗原和细胞内细胞因子染色,用流式细胞仪对淋巴细胞内细胞因子进行测定,并对分析方法中细胞膜表面抗体的选择和不同刺激时间对测定结果的影响等进行了探讨。2选取轻中度急性发作期哮喘患者20例,正常对照20例。正常对照组取外周血加入PMA培养。哮喘患者取外周血并分成2组培养。第一组加入PMA第二组同时加入PMA和核因子ΚB抑制剂二硫代氨基甲醇吡咯烷PDTC。将培养的外周血用三色法流式细胞术检测T淋巴细胞亚群。结果1选用不同的单抗和刺激剂的刺激时间不同,对实验结果有较大影响。2加入PMA培养的哮喘患者T淋巴细胞TH1,TH2,TH1TH2与正常对照组比较差异有显著性,且与同时加入PMA和PDTC培养的哮喘患者外周血T淋巴细胞组比较也有显著性。哮喘患者TH1细胞、TH1TH2较正常人明显降低,而哮喘患者的TH2细胞较正常人明显升高。同时加入PMA和PDTC培养的哮喘患者外周血T淋巴细胞组TH1细胞、TH1TH2较哮喘患者明显升高,TH2细胞明显降低。结论1流式细胞术是单细胞水平检测细胞内细胞因子的较为理想的方法;2细胞内细胞因子检测的影响因素较多,分析时需选择适当的测定条件;3T淋巴细胞活化后使淋巴细胞亚群改变可能是通过核因子ΚB来传导的。T淋巴细胞核因子ΚB信号传导途径的激活可能是哮喘的发病机制之一。
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      上传时间:2022-07-27
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    • 简介:中山大学硕士学位论文华支睾吸虫CSSCCRO基因的发现及其功能初步研究姓名赵玉利申请学位级别硕士专业病原生物学指导教师余新炳20060401赵玉利硕士学位论文中文摘要尽管有充分的证据表明,华支睾吸虫的感染是引发肝胆管癌的一个重要因素,但是至今仍缺乏明确的分子水平的实验证据;另一方面,华支睾吸虫是否存在与人鳞状上皮癌肿瘤相关基因相类似的基因,是否也具有与其相类似的作用都值得进一步探讨。研究目的从华支睾吸虫成虫CDNA文库中筛选出与人鳞状上皮癌肿瘤相关基因相类似的基因,探讨其与肝胆管癌发生、发展的关系,为华支睾吸虫感染引起肝胆管肿瘤提供分子生物学依据,同时丰富华支睾吸虫基因组学和功能基因组学研究。研究方法L华支睾吸虫CSSCCRO基因的发现和生物信息学分析从华支睾吸虫成虫CDNA文库测序后UNIGENE归并、拼接,获得与人鳞状上皮癌相关肿瘤基因相类似的基因,暂命名为CSSCCRO。测序、分析是否为全长基因,然后利用生物信息学分析软件对此基因的CDNA序列进行结构、性质和功能分析,包括核酸水平和氨基酸水平的同源性分析、以及推导的DSCCRO蛋白的理化性质及空间结构分析。2华支睾吸虫CSSCCRO基因克隆、表达和WESTERNBLOTTING鉴定21华支睾吸虫成虫CSSCCRO基因的扩增、克隆根据目的基因的ORF和原核表达质粒PET30A设计引物,PCR扩增CSSCCRO基因的CDNA全长编码区。限制性内切酶XHOI、ECORV双酶切空质粒PET30A矛DPCR产物,T4连接酶连接。用PCR、酶切及测序鉴定。22华支睾吸虫成虫CSSCCRO基因的表达和纯化将PET30A一CSSCCRO重组质粒转化的大肠杆菌BL21中表达,IPTG诱导后超声裂解破碎,最后用NINTAAGAROSE蛋白纯化柱纯化目的蛋白,核酸蛋白定量分析仪DU530BECKMANNU浓度。23华支睾吸虫成虫CSSCCRO蛋白的WESTERNBLOTTING鉴定
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      上传时间:2022-07-26
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    • 简介:●●●分类号聊弓密级单位代码10422学号沙口7/罗/圹∥1|I●T,厶蒙夕;孥硕士学位论文SHANDONGUNIVERSITYMASTER’STHESIS论文题目U形病喜雠缝爰们孑耕挑√舷膊动能丝千恸一6叫‘M溉朔腑曳漱锄训纠‘作者姓名专业导师合作导师艘上U鞋硪O/O年D岁月汐日么I觑L多●●●原创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。保密论文在解密后应遵守此规定触新虢驻巡虚差上母嘲
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      上传时间:2022-07-26
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    • 简介:南京师范大学硕士学位论文抗FSH自身抗体对雄性生殖系统的影响及其作用机制的初步研究姓名徐会茹申请学位级别硕士专业发育生物学指导教师姚兵20070525南京师范大学硕士论文抗FSH自身抗体作用机制的初步研究THEEFFECTOFANTISERAAGAINSTFSHONMALEABSTRACTREPRODUCTIVESYSTEMTOSTUDYWHETHERANTISERAAGAINSTFSHWASEXISTEDINTHESERUMOFINFERTILITYPATIENTS,WEESTABLISHEDTHEELISAMETHODFORTHEDETECTIONOFANTISERAAGAINSTFSHTHESERUMANTISERAAGAINSTFSHINSOMEINFERTILEORFERTILEMENWASDETECTEDTHERESULTINDICATEDTHATTHEINCIDENCEOFTHEANTISERAAGAINSTFSHINTHEPATIENTSWITHOLIGOSPERMIAANDAZOOSPERMIAWASSIGNIFICANTLYHIGHERTHANTHATINFERTILITYMENWEPRESUMEDTHATTHEANTISERAAGAINSTFSHMIGHTAFFECTTHESPERMATOGENESISOFTHEMALETESTISTOFURTHERRESEARCHTHEEFFECTOFANTISERAAGAINSTFSHONMALESPERMATOGENESIS,WEESTABLISHEDTHERATMODELOFANTISERAAGAINSTFSHWEHADFOUNDTHATINMODELRATS,THENUMBEROFSPERMATOGENICCELLSINSEMINIFEROUSTUBULEANDTHESPERMCOUNTSINTUBULARLUMINADECREASED,WHENCOMPAREDWITHCONTROLGROUPITCONFIRMEDOURPREVIOUSPRESUMPTIONTHATTHEANTISERAAGAINSTFSHMIGHTAFFECTTHESPERMATOGENESISOFTHEMALETESTISBASEDONTHEABOVEEXPERIMENTALRESULTS,THESERUMHORMONESANDTHEAPOPTOSISOFTESTICULARCELLSWEREDETECTEDTOEXPLORETHEACTIONMECHANISMOFANTISERAAGAINSTFSHTHEEXPERIMENTALRESULTSSHOWEDTHATTHESERUMFSHLEVELINMODELRATIMMUNIZEDWITHPOLYPEPTIDEFOR77U
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    • 简介:本论文分为三个部分对ARHT2、RHEBL1、STK40和LDHAL基因的克隆及其功能进行了研究。第一部分利用EST策略克隆了新的人和小鼠小G蛋白基因ARHT2、RHEBL1和假激酶基因STK40,在一至三章进行了论述。第一章中我们用EST策略获得了一个新的小GTP酶ARHT2基因,还用同源克隆策略获得了其它物种的ARHT2基因。第二章中,我们用EST策略获得了另外一个新的小GTP酶基因RHEBL1,它是MT通路的关键调节蛋白RHEB的同源基因。第三章中我们用EST策略拼接并克隆了人和小鼠的假激酶样基因STK0,并对其进行了分析研究。第二部分是用同源克隆策略获得在睾丸中特异表达的新型乳酸脱氢酶基因LDHAL。在这部分的研究工作中,用LDHA基因作为信息探针,结合EST策略,我们克隆了一个在睾丸特异表达的L乳酸脱氢酶基因LDHAL。并经过研究发现,LDHAL可能参与精子发生过程中的能量代谢。本文第一部分克隆了两个GTP酶基因和一个丝氨酸苏氨酸激酶样基因,发现ARHT2基因在小鼠睾丸中可能参与精子的成熟。而RHEBL1基因可以通过与BRAF的互作影响下游基因的转录,还可以激活NFB通路,并为TSC2找到了一个候选的靶分子;STK40基因可以激活NFB通路。第二部分获得的睾丸特异表达的乳酸脱氢酶LDHAL基因,可能参与精子发生过程中的能量代谢,为人类避孕研究和鼠害的防治提供了新的分子靶标。第三部分为综述,论述了RHEB基因功能的研究进展。
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      上传时间:2022-07-26
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    • 简介:华中科技大学博士学位论文SNAPIN对神经分泌的调节作用姓名吴政星申请学位级别博士专业生物物理指导教师徐涛周专20050429II实验采用同源重组方法产生失效突变,使SNAPIN基因不表达-即SNAPIN基因敲除,采用生物化学方法研究SNAPIN蛋白的缺失对与分泌相关的必需蛋白质和调节蛋白的表达水平、SNARE蛋白的聚合反应和SYNAPTOTAGMIN与SNARE复合体相互作用的影响。生物化学实验结果显示SNAPIN缺失不影响已知参与突触囊泡胞吐活动的必需蛋白质和调节蛋白的表达,表明SNAPIN基因敲除不会引起为神经元轴突末梢递质释放所必须的蛋白质的代偿性表达变化。此外,SNAPIN缺失也不影响SNARE蛋白的聚合反应。与野生型同胎小鼠相比较,基因敲除小鼠脑匀浆中的SYNAPTOTAGMIN1与SNAP25的结合显著降低343FROM11LITTERMATESP001。实验使用高时间分辨率的膜电容测量法测量囊泡与细胞膜的融合并同时使用微碳纤电化学检测法检测儿茶酚胺的释放,研究SNAPIN对嗜铬细胞分泌动力学和钙离子依赖性的影响;用高强度的短暂紫外光来裂解NPEGTA使细胞胞浆的游离钙离子浓度瞬时升高到某一较高浓度并维持一段时间,快速刺激细胞分泌。实验结果表明SNAPIN基因敲除小鼠嗜铬细胞胞吐簇发相的幅度显著减少而持续相没有变化,野生型SNAPIN在基因敲除细胞中的过表达可以完全消除SNAPIN基因的敲除对胞吐的抑制作用,使胞吐簇发相恢复到野生型细胞的水平。电子显微镜观察和分析显示SNAPIN基因敲除对嗜铬细胞囊泡的数目和空间分布没有影响,即囊泡的锚定不受影响。RAMP实验结果显示SNAPIN的缺失不改变囊泡胞吐的钙离子敏感性和协同作用,即胞吐的钙依赖性没有改变。因此,SNAPIN基因敲除小鼠的生物化学和电生理研究表明SNAPIN参与对囊泡胞吐活动的调节,其分子机制可能是促进SYNAPTOTAGMIN与SNARE复合体的相互作用,稳定SYNAPTOTAGMINSNARE复合物,降低激活过程的逆反应去激活速率,从而稳定激活囊泡,维持可释放囊泡库的正常大小。简要地介绍了细胞分泌研究领域常用的几种先进生物物理技术和手段;描述了全内反射荧光显微镜的构建和消散场的校准。用全内反射荧光显微成像技术观察了PC12细胞单个囊泡的锚定、去锚定和与细胞膜的融合,为囊泡锚定是可逆性过程的学说提供了直接的观察证据。关键词关键词SNAPIN胞吐嗜铬细胞囊泡激活膜电容测量电化学检测SYNAPTOTAGMINSNAP25
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      上传时间:2022-07-26
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    • 简介:南京医科大学硕士学位论文肌动蛋白磷酸化及其作用的研究姓名李迎春申请学位级别硕士专业生理学指导教师顾洛戈应滨20050701南京医科人学顶学位论文化的肌动蛋白存在于细胞骨架部分,而不存在于细胞浆内。本研究结果提示,在ATP缺乏时兔肾脏近端小管上皮细胞内肌动蛋白的磷酸化与肌动蛋白的捕获密切相关。关键词肌动蛋白细胞骨架磷酸化ATP缺乏二维电泳免疫印迹法
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      上传时间:2022-07-26
      页数: 61
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      ( 4 星级)
    • 简介:第二军医大学博士学位论文人单核细胞(THP1)CDNA表达文库的构建及趋化因子CXCL14(MIP2ΓBRAK)受体的寻找姓名刘斌申请学位级别博士专业免疫学指导教师曹雪涛20050501笙三呈堕盔堂堕主笙奎丝堕型重缩写APBLASTCLLAPS缩略词表英文名称ALKALINEPHOSPHATASEBASICLOCALALIGNMENTSEARCHTOOL3一【3CHOLAMIDOPROPYUDIMETHYLAMMONO1PMPANESULFONATE中文名称碱性磷酸酶基本局部对齐搜索工具3【3胆胺丙基二甲基氨】1丙烷磺酸酯CODEHOPSCONSENSUSDEGENERATE共同简并杂合寡核苷酸引物HYBRIDOLIGONUCLEOTIDEPRIMERSDTTEGIAEST同LORFGPCRGSTIPLRGMGCNCBIPNPPREFSEQRTPCRDITHIOTHREITOL硫苏糖醇ETHYLENEGLYCOLBISBAMINOETHYL7醇双乙胺醚NN’四乙酸ETHERN,N,N’,N’TETRAACETICACIDEXPRESSIONSEQUENCETAG表达序列标签FULLLENGTHOPENREADINGFRAME全长开放读框GPROTEINCOUPLEDRECEPTORG蛋白耦联受体GLUTATHIONESTRANSFERASE谷胱甘肽S转移酶ISOPROPYLTHLOBDGALACTOSIDE异丙基BD硫代半乳糖苷MAMMALIANGENECOLLECTION哺乳动物基因集合NATIONALCENTERFORBIOTECHNOLOGYINFORMATIONPNITROPHYLPHOSPHATE,DISODIUMSALT,HEXAHYDRATE美国国家生物技术信息中心对硝基苯磷酸二钠REFERENCESEQUENCE参照序列REVERSETRANSCRIPTASEPOLYMERASE逆转录酶一多聚酶链式反应CHAINREACTION
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      上传时间:2022-07-26
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    • 简介:浙江大学硕士学位论文遗传毒物苯并芘/非遗传毒物诱导ΓH2AX焦点形成能力的研究姓名周春仙申请学位级别硕士专业病理学与病理生理学指导教师杨军20060501浙江大学硕士学位论文遗传毒物苯并芘/非遗传毒物诱导丫H2AX焦点形成能力的研究浙江大学医学院2004级硕士研究生导师病理擘与病理生理学周春仙扬军教授中文摘要日前,与环境致癌物相关的肿瘤发病率呈上升趋势,准确地检测环境中的致癌物是预防和治疗癌症的重要任务之一。致癌物包括遗传毒物和非遗传毒物。遗传毒物通过损伤遗传物质DNA而起细胞毒作用。非遗传毒物包括一些细胞毒素、免疫抑制剂等等,它们不通过与DNA作用而促进癌症的发生。迄今所知的大多数致癌物都是遗传毒物,它们对DNA的损伤包括DNA单链断裂DNASINGLESTRANDBREAL【S,SSBS、双链断裂DNADOUBLES仃ANDB懈LKS,DSBS、DNA加合物形成、链内,链间交联及碱基置换等等,其中DSBS被认为是最严重的损伤方式之一。因此,如何准确对DSBS的检测有助于癌症的预防和治疗。近年来研究发现,DSBS出现后,组蛋白家族成员H2AXC.端139位丝氨酸残基SCR可被磷脂酰肌醇3一激酶PHOSPHATIDYL血OSITOL3城ILASE,P13K样家族成员磷酸化形成YH2AXGA咖AMAX。TMAX可以募集其它DNA修复蛋白到损伤位点,形成焦点FOCI结构,共同完成DNA修复过程。在电离辐射R后,在损伤位点快速形成YMAX焦点,并且焦点的数量与LR造成的DSBS的数量存在一一对应关系,表明证王2AX焦点的形成可用于检测R诱导的DSBS。另外发现,其它间接导致DSBS的遗传毒物如顺铂、喜树碱也诱导他AX焦点的形成。因此,直接或者间接导致的DSBS的产生都能诱导Y磁AX2
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      上传时间:2022-07-26
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      上传时间:2022-07-26
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    • 简介:研究背景与意义二十世纪九十年代人类基因组计划HUMANGENOMEPROJEETHGP的提出及完成极大地促进和带动了一系列生物基因组计划的蓬勃发展。截止到目前为止GENBANK已经登录了数千种生物的基因组序列并且还有数百种生物的基因组测序正在进行之中。在登录的基因组数据中有的完成了初步注释有的仅仅是完成了测序工作。尽管测序工作进展神速但基因功能研究明显滞后这给科研工作者提出了新的课题。因此基因功能研究成为了后基因组学或功能基因组学时代的艰巨任务之一。本室在前期工作中分离鉴定了3株铜绿假单胞菌噬菌体分别命名为PAP1、PAP2和PAP3PSEUDOMONASAERUGINOSAPHAGE。目前溶源性噬菌体PAP2和PAP3全基因组测序及基因初步注释工作已经完成并提交到GENBANK。裂解性噬菌体PAP1基因组也已经完成了部分测序。根据分析这三种噬菌体所预测的基因中大多数为功能未知基因。因而展开对这些基因的分析及功能验证成为我们面临的重要任务。在功能基因研究中我们首先把目标集中在与噬菌体裂解细菌有关的基因上。这是因为噬菌体是以细菌为宿主的病毒噬菌体在感染宿主菌时必须穿过细菌的细胞壁肽聚糖层或者将其核酸注入到宿主菌体内进行复制。噬菌体在完成复制、组装后又必须破坏宿主肽聚糖层释放子代噬菌体进而感染新的细菌。因此噬菌体完成其繁殖必须“一进一出”两次穿越宿主菌的细胞壁屏障。与单链DNARNA噬菌体不同的是双链DNA噬菌体感染宿主的结果往往最终杀死宿主菌。因此噬菌体在感染过程中必然产生一种能够破坏宿主细胞壁肽聚糖层的相关酶类。而细胞壁是细菌赖以生存的基础能够破坏细胞壁的酶类也就有可能成为潜在的抗感染药物。根据文献报道控制双链DNA噬菌体进出宿主细胞的物质是一种由噬菌体编码的蛋白称作内溶素或者肽聚糖解聚酶ENDOLYSIN或者LYSIN简写为ELYS。内溶素作为一种酶蛋白可以破坏噬菌体宿主菌的细胞壁肽聚糖。因而内溶素有可能成为某些致病细菌特别是耐药性致病菌的潜在的抗感染药物。另外大部分噬菌体的内溶素由于缺少信号肽不能够穿透宿主细胞膜通常需要噬菌体编码的一种穴蛋白HOLIN辅助才能够穿过宿主细胞膜进入周间质进而作用于宿主细胞壁肽聚糖层。因此对于噬菌体内溶素及穴蛋白进行广泛深入的研究不但有助于了解噬菌体与宿主的相互作用、揭示生命的多样性而且将内溶素作为生物制剂应用于噬菌体治疗PHAGETHERAPY也有重要的研究意义。材料与方法收集GENBANK中已经登录的全部铜绿假单胞菌双链DNA噬菌体基因组序列含我室提交的噬菌体PAP2和PAP3基因组序列及我室未提交的噬菌体PAP1部分基因组序列。首先初步分析各基因组组成特点并进行比较基因组分析其次通过对所有基因组可能编码的F进行BLAST检索从而推定所有可能的内溶素及穴蛋白基因再次对发现的铜绿假单胞菌噬菌体内溶素及穴蛋白进行比较、归类、三级结构预测、系统发生进化分析及跨膜结构域预测最后克隆、表达推定的铜绿假单胞菌噬菌体PAPL内溶素基因纯化基因表达产物分析这些表达产物对底物肽聚糖的降解活性及抑菌作用通过实验证实推定的内溶素的生物学功能。结果与讨论1铜绿假单胞菌噬菌体基因组比较经过搜集整理共有20种铜绿假单胞菌双链DNA噬菌体基因组序列。除10种铜绿假单胞菌噬菌体基因组已完成了初步注释外其余铜绿假单胞菌噬菌体基因组仅仅是完成了测序工作未作任何注释。通过对基因组序列比较分析除这三对噬菌体外其它铜绿假单胞菌噬菌体基因组序列相互之间相似性极低。这三对噬菌体分别是PA7与PA16、119X与PAP2、SD1M与PHHIKZ其中噬菌体PA7与PA16基因组序列之间相似性达99%以上噬菌体119X和PAP2基因组序列之间相似性为93%噬菌体SD1M与PHIKZ基因组序列之间相似性为99%。这些相似性的序列有的表现为大片段完全相同呈嵌合体状态有的表现为突变碱基呈点状分散且基因组两端序列变化显著。这种结构模式表明噬菌体基因组的进化与其它物种的进化类似分为渐变式和爆发式。其中爆发式进化可以用模块进化理论MODULAREVOLUTION来解释基因或蛋白的进化并不是通过连续的一个个的核苷酸或者氨基酸的替换而是通过装配已经存在的编码蛋白多肽的核苷酸区段完成的而进化的结果则表现在噬菌体基因组呈镶嵌型结构且基因组两端序列变化显著。2铜绿假单胞菌噬菌体内溶素基因的推定根据铜绿假单胞菌噬菌体在GENBANK登录的序列及基因注释已有12种内溶素基因被发现与命名。而我们对20种铜绿假单胞菌噬菌体基因组重新分析新发现8种内溶素基因。这8种噬菌体内溶素基因分别是噬菌体F10的F37273~37890、噬菌体的F8OPF24127~26709及F34978~35637、噬菌体M6的F13111~13932、噬菌体PALL的F21764~22279、噬菌体SD1M的F147382~148161及F190416~197138、噬菌体PAP1的F25043~25603。3铜绿假单胞菌噬菌体内溶素分类对20种噬菌体内溶素基因编码的氨基酸序列经过CLUSTALW多重序列比对后生成的进化树结果来看铜绿假单胞菌噬菌体内溶素可以分为4类包括N乙酰胞壁酸酶类、葡萄糖苷酶类、转糖基酶类和未知功能类。新发现的8种噬菌体内溶素中属于N乙酰胞壁酸酶类的内溶素只有1种是噬菌体PALL的F21764~22279编码产物属于葡萄糖苷酶类的内溶素有2种分别是噬菌体F8的F34978~35637和F10的F37273~37890编码的产物属于转糖基酶类的内溶素有4种分别是噬菌体M6的F13111~13932、噬菌体F8的F24127~26706及噬菌体SD1M的F147382~148161及F190416~197138编码的产物均而噬菌体PAP1的F25043~25603编码的产物由于同时与肽链内切酶和酰氨酶在N端序列上有一定的相似性目前尚不能归类本文将之归为未知功能类。4铜绿假单胞菌噬菌体穴蛋白基因推定在20种噬菌体中已有3种噬菌体编码穴蛋白的基因被注释。我们对20种噬菌体基因组重新分析新发现了2种穴蛋白基因分别是噬菌体F10的F36944~37276及噬菌体M6的F12887~13219。5种穴蛋白的基因序列及编码的氨基酸序列具有共同的基本特征编码穴蛋白的基因位于内溶素基因的上游通常含有至少两个疏水区和一段较短的连接序列蛋白质多肽链氨基酸残基个数在71~111之间。此外穴蛋白基因在噬菌体基因组内与内溶素基因均有多个碱基的重叠现象GENESOVERLAP。在其它未发现穴蛋白噬菌体的基因组序列中均能发现一个或几个编码含有跨膜区结构的基因这些含有跨膜区结构的基因是否是噬菌体穴蛋白的候选基因值得深入研究。5噬菌体PAP1内溶素基因ELY的克隆、表达与纯化本文选择铜绿假单胞菌噬菌体PAP1内溶素基因进行验证。通过对PCR反应体系和条件的优化以噬菌体PAP1基因组DNA为模板通过PCR扩增获得噬菌体PAP1内溶素基因全长序列。将该基因构建到表达载体PQE31中然后转化大肠埃希菌M15PREP4并诱导表达。在一定范围内随IPTG浓度的增加重组蛋白表达率增加至04~06MM时基本达到最高峰值重组蛋白表达最佳诱导时间为6H重组蛋白表达形式主要以可溶性状态存在。经过NINTA亲和柱层析、UNOSPHERES阳离子交换层析及分子筛脱盐后获得了与预测分子量大小相符的单一条带的目标蛋白。6底物的提取与ELY6H重组融合蛋白酶活性检测7ELY6H重组融合蛋白的抑菌活性检测结论本研究通过对铜绿假单胞菌噬菌体内溶素的基因推定共发现20种内溶素基因和6种穴蛋白基因其中8种内溶素基因和2种穴蛋白基因为本研究新发现基因。推定的内溶素基因分属于4个类群转糖基酶类、N乙酰胞壁酸酶类、N乙酰葡萄糖苷酶类和功能未知类。选择一推定的噬菌体PAP1ELY基因进行克隆和表达同时对表达的ELY6H重组融合蛋白进行了纯化得到较纯的重组融合蛋白。对该重组融合蛋白对底物肽聚糖的降解活性检测及抑菌活性检测。结果表明推定的噬菌体PAP1重组内溶素融合蛋白对铜绿假单胞菌细胞壁肽聚糖具有降解活性并且对金黄色葡萄球菌活菌具有一定的抑菌活性。该研究从实验方面证实了推定的噬菌体PAP1内溶素基因的生物学功能。但该基因的工程菌表达产物在医学抗感染方面可能不具有直接应用意义。
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      上传时间:2022-07-27
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    • 简介:中国科学技术大学博士学位论文生物医学超声中若干非线性问题的研究姓名杜宏伟申请学位级别博士专业生物医学工程指导教师冯焕清彭虎20070501中国科学技术大学博士学位论文ABSTRACTABSTRACTINTHEORYANDAPPLICATIONOFBIOMEDICALULTRASOUND,THESTUDYOFNONLINEARPHENOMENAISONEOFTHEHIGHLIGHTSANDDIFFICULTIESDURINGTHELASTSEVERALYEARSBETTERRESOLUTIONANDCONTRASTCALLBEOBTAINEDBYEMPLOYINGNONLINEARPRINCIPLESINULTRASONICIMAGINGULTRASOUNDIMAGESWITHHIGHERQUALITYTHENCANBECONSUUCTEDTODESCRIBETHEIMAGINGOBJECTSMORECLEARLYANDTRULYITHASSHOWNUSREMARKABLEADVANTAGESAND勰ATTRACTIVEFUTUREAILRESEARCHWORKINTRODUCEDINTHISTHESISFOLLOWSTHERIGOROUS、FEASIBLEANDEFFECTIVEPRINCIPLE,ANDOFFERSSYSTEMATICTHEORY,MODELING、NUMERICALCOMPUTATIONANDSIMULATIONMETHODSINSOLVINGSOMEIMPORTANTPROBLEMSINTHEPRINCIPLEANDAPPLICATIONOFNONLINEARULTEASOUNDTHERESEARCHACHIEVEMENTSPRESENTEDINTHISDOCTORALDISSERTATIONHASFOLLOWINGFEATURES1ANEWMETHODBASEDONTHEFOURIERBESSELSERIESISPROPOSEDTOCALCULATETHEHIGHERORDERHARMONICCOMPONENTSOFANONLINEARULTRASOUNDFIEIDINABSORBINGMEDIUMANDANANALYTICALSOLUTIONOFASERIESFORMISOBTAINEDACLOSEDANALYTICALSOLUTIONOFTHEHLGHERORDERHARMONICSINTHEZ譬ROTHORDERBESSELULTRASOUNDFIELDANDTHEFOCUSEDGAUSSIANULTRASOUNDFIELDISDEDUCEDTOSTUDYTHEFIELDPROPERTYESPECIALLYTHENEARFIELDPROPERTY2THEFUNDAMENTALANDHIGHERORDERHARMONICULTRASOUNDFIELDSOFAZEROTHORDERBESSELULTRASOUNDFIELDANDFOCUSEDGAUSSIANFIELDINABSORBINGMEDIUMARECOMPUTEDANDSIMULMEDBYSOLVINGTHEKZKEQUATIONUSINGAFREQUENCYDOMAINFINITEDIFFERENCEMETHOD111ECOMPUTATIONANDSIMULATIONRESULTSVERIFIEDTHETHEORETICALCONCLUSION3APRELIMINARYSTUDYOFTHEHARMONICIMAGINGTHEORYANDMODELISINTRODUCED,ANDASIMPLECOMPUTATIONMODELFRAMEISPROPOSEDNIISRESEARCHISSPONSOREDBYTHENATIONALSCIENCEFOUNDATIONOFCHINAPROJECT“STUDYONHIGHRESOLUTIONANDHIGHFRAMERATENLTMSONICIMAGINGSYSTEM”NO60471057ANDTHEYOUTHFOUNDATIONOFTHEUNIVERSITYOFSCIENCEANDTECHNOLOGYOFCHINA‘‘STUDYOFTHEPROPERTYOFNONLINEARNONDIFFRACTIONBEAMANDITSAPPLICATIONINMEDICALULTRASOUND”NOKA2100230001KEYWORDSULTRASOUND;NONLINEARULTRASOUNDFIELD;KZKEQUATION;FOURIERBESSELSERIES;BCSSELULTRASOUNDFIELD;FOCUSEDGAUSSIANULTRASOUNDFIELD;FREQUENCYDOMAINFINITEDIFFERENCEMETHOD;HARMONICIMAGINGH
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    • 简介:慢病毒载体因为可以介导外源基因在非分裂细胞中稳定高效地表达而成为转基因动物和基因治疗研究的重要工具。本实验以人免疫缺陷病毒HIV1的复制缺陷型载体系统为研究材料该载体系统包括4个质粒由编码病毒的核心蛋白包括基质蛋白、衣壳蛋白、核衣壳蛋白的基因GAG和编码病毒复制所需要的酶的基因POL组成的质粒PLP41编码调节蛋白REV的质粒PLP2编码水泡性疱疹病毒包膜糖蛋白VSVG的质粒PLPVSVG以及慢病毒基因转移载体PLENTI6V5DTOPO组成。通过瞬时转染上述质粒到293FT细胞可以产生复制缺陷型的慢病毒但费时、费力和得到的病毒滴度较低是这种方法的主要缺点。本研究提出了一种全新的包装慢病毒的方法即借助伪狂犬病毒载体的共感染生产慢病毒载体。首先对慢病毒基因转移载体进行改造得到了一个可表达绿色荧光蛋白基因的重组基因转移载体质粒PLENTI6EGFP并将其与3个辅助质粒共转染得到了表达绿色荧光蛋白的慢病毒。然后将上述四个质粒上的PUC18复制子换成了适用于接合转移的条件型R6K复制子然后用MAGIC的方法分别将这4个质粒上的元件转移到BAC化的伪狂犬病毒PRV载体上得到4种重组伪狂犬病毒PRVPLP1、PRVPLP2、PRVPLPVSVG、以及PRVPLENTI6EGFP载体。然后这四种包含慢病毒包装元件的四种伪狂犬病毒共感染PK15细胞得到表达了带外源表达GFP基因的重组慢病毒载体。本实验还结合了大肠杆菌介导的对哺乳动物的基因转移即用含有4种目的质粒和PGBOINVHLY的大肠杆菌DH10B菌株分别与哺乳动物细胞混合培养包装伪狂犬病毒。这样我们获得重组慢病毒的过程就不需要使用转染试剂并且省去了质粒的制备大大的降低了慢病毒的生产成本。
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