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    • 简介:1分子生物学检测技术分子生物学检测技术分子生物学诊断技术是现代分子生物学与分子遗传学取得巨大进步的结晶,是在人们对基因的结构以及基因的表达和调控等生命本质问题的认识日益加深的基础上产生的。近年来,分子生物学诊断技术的方法学研究取得了很大进展,先后建立了限制性内切酶酶谱分析、核酸分子杂交、限制性片段长度多态性连锁分析等方法。1985年由美国CETUS公司人类遗传学研究室MULLIS等创立并随后迅速发展起来的DNA体外扩增技术(POLYMERASECHAINREACTION,PCR),以及90年代发展起来的DNA芯片技术(DNACHIP),又将分子生物学诊断技术提高到一个崭新的阶段。一、一、核酸分子杂交核酸分子杂交(一)概述具有一定互补序列的核苷酸单链在液相或固相中按碱基互补配对原则缔合成异质双链的过程叫核酸分子杂交。应用该技术可对特定DNA或RNA序列进行定性或定量检测。到目前为止,分子杂交技术在基因诊断中仍占重要地位,它按反应支持物可分为固相杂交和液相杂交两种,前者应用较广,有SOUTHERN印迹杂交、点杂交、夹心杂交(三明治杂交)、原位杂交和寡核苷酸探针技术等。核酸分子杂交主要涉及两个方面待测的DNA或RNA,以及用于检测的DNA或RNA探针。探针标记的好坏决定检测的敏感性。1、SOUTHERN印迹杂交是最经典和应用最广泛的杂交方法。根据基因探针与待测DNA限制酶酶解片段杂交的带谱,可以直接确定宿主基因的缺陷所在或病原体的存在状态。3光检测核酸的含量。BDNA技术是目前核酸直接量化检测技术中灵敏度最高的方法之一。但该方法成本较高,不利于其普及应用。5、原位杂交直接在组织切片或细胞涂片上进行杂交反应。该技术可检出细胞中单拷贝MRNA,估算病毒在宿主细胞中复制和转录的程度,对于病毒感染(特别是具有长潜伏期的病毒感染)和其它退行性疾病的诊断很有用。6、液相杂交液相杂交酶免疫法量化检测核酸扩增产物这种方法同固相杂交量化检测核酸扩增产物原理大致相同,只是将反应体系换为液相环境。应用液相杂交量化检测维生素D结合蛋白基因,在PCR扩增时通过掺入法使产物上挂有地高辛分子,再通过液相杂交与标记有生物素的探针结合后,被包被有链亲和素的酶标微孔板捕获,利用辣根酶标记的地高辛抗体使酶反应底物OPD或TMB显色。据报道,核酸扩增产物与特异性探针在液相中的杂交效率要高于在酶标微孔板上的结合,液相杂交的灵敏度通常是固相杂交的10~20倍,可以检测到PG水平。二、二、聚合酶链反应(聚合酶链反应(PCR)PCR是近年来发展起来的一种快速的DNA片段扩增技术,它通过分别与双链目的DNA序列两个3’端互补的寡核苷酸引物,由TAQDNA聚合酶从5’到3’进行一系列DNA聚合反应,扩增出所需要的目的DNA。由于每个循环中合成的引物延伸产物可作为下一循环中的模板,因而每次循环中靶DNA的拷贝数几乎呈几何级数增长,因此,20次PCR循环将产生约一百万倍(220)的扩增产物。这种1985年由KARYMULLIS建立的方法最早在美国CETUS公司人类遗传学
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    • 简介:第1页共3页分子生物学分子生物学B基因组与基因、基因组与基因、DNADNA复制测验题复制测验题学号学号专业专业班级班级姓名姓名一、名词解释(每小题一、名词解释(每小题3分,共分,共30分)分)1、复制子复制子2、单复制子、单复制子3、多复制子、多复制子4、端粒端粒是真核生物染色体的两个末端序列,与特定的蛋白质形成复合物。、端粒端粒是真核生物染色体的两个末端序列,与特定的蛋白质形成复合物。5、端粒酶是由、端粒酶是由RNARNA和蛋白体组成的复合体,属专一的依赖和蛋白体组成的复合体,属专一的依赖RNARNA的逆转录酶,能以自身的逆转录酶,能以自身RNARNA为模板反转录合成端粒为模板反转录合成端粒DNADNA序列,以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短,保持端粒长度序列,以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短,保持端粒长度的稳定,恢复端粒的功能。的稳定,恢复端粒的功能。6、滚环式复制、滚环式复制DNA聚合酶III以3OH为引物,以负链为模板,从3OH端逐步增添脱氧核苷酸,随着复制的进行,5‘端长度即不断增加。这一过程中,单链尾巴的延伸伴随着双链DNA的绕轴滚动,故称为滚环式复制。7、基因是编码一条多肽链或功能、基因是编码一条多肽链或功能RNARNA所必需的全部核苷酸序列。所必需的全部核苷酸序列。8、基因组是指某一特定生物单倍体染色体的数目及其所携带的全部基因。、基因组是指某一特定生物单倍体染色体的数目及其所携带的全部基因。9、假基因没有功能的基因称为假基因。、假基因没有功能的基因称为假基因。第3页共3页5、真核生物和原核生物复制起点在数量上有什么不同在复制完成之前,它们复制启动的、真核生物和原核生物复制起点在数量上有什么不同在复制完成之前,它们复制启动的次数又有什么差异(次数又有什么差异(5分)分)6、什么叫拓扑异构酶拓扑异构酶、什么叫拓扑异构酶拓扑异构酶Ⅰ和拓扑异构酶和拓扑异构酶Ⅱ各自的特点是什么旋转酶是属于哪各自的特点是什么旋转酶是属于哪一类(一类(1010分)分)7、多数生物的遗传物质是、多数生物的遗传物质是DNADNA,请问,请问DNADNA的复制方式有哪些(的复制方式有哪些(1010分)分)
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    • 简介:第1页共3页2014201520142015学年第一学期学年第一学期分子生物学分子生物学B基因组与基因、基因组与基因、DNADNA复制测验题复制测验题学号学号专业专业班级班级姓名姓名一、名词解释(每小题一、名词解释(每小题3分,共分,共30分)分)1、复制子复制子2、单复制子、单复制子3、多复制子、多复制子4、端粒端粒是真核生物染色体的两个末端序列,与特定的蛋白质形成复合物。、端粒端粒是真核生物染色体的两个末端序列,与特定的蛋白质形成复合物。5、端粒酶是由、端粒酶是由RNARNA和蛋白体组成的复合体,属专一的依赖和蛋白体组成的复合体,属专一的依赖RNARNA的逆转录酶,能以自身的逆转录酶,能以自身RNARNA为模板反转录合成端粒为模板反转录合成端粒DNADNA序列,以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短,保持端粒长度序列,以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短,保持端粒长度的稳定,恢复端粒的功能。的稳定,恢复端粒的功能。6、滚环式复制、滚环式复制DNA聚合酶III以3OH为引物,以负链为模板,从3OH端逐步增添脱氧核苷酸,随着复制的进行,5‘端长度即不断增加。这一过程中,单链尾巴的延伸伴随着双链DNA的绕轴滚动,故称为滚环式复制。7、基因是编码一条多肽链或功能、基因是编码一条多肽链或功能RNARNA所必需的全部核苷酸序列。所必需的全部核苷酸序列。8、基因组是指某一特定生物单倍体染色体的数目及其所携带的全部基因。、基因组是指某一特定生物单倍体染色体的数目及其所携带的全部基因。9、假基因没有功能的基因称为假基因。、假基因没有功能的基因称为假基因。第3页共3页5、真核生物和原核生物复制起点在数量上有什么不同在复制完成之前,它们复制启动的、真核生物和原核生物复制起点在数量上有什么不同在复制完成之前,它们复制启动的次数又有什么差异(次数又有什么差异(5分)分)6、什么叫拓扑异构酶拓扑异构酶、什么叫拓扑异构酶拓扑异构酶Ⅰ和拓扑异构酶和拓扑异构酶Ⅱ各自的特点是什么旋转酶是属于哪各自的特点是什么旋转酶是属于哪一类(一类(1010分)分)7、多数生物的遗传物质是、多数生物的遗传物质是DNADNA,请问,请问DNADNA的复制方式有哪些(的复制方式有哪些(1010分)分)
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    • 简介:第1页共2页2014201520142015学年第一学期学年第一学期分子生物学分子生物学B转录与翻译测验题学号专业班级姓名一、名词解释(每小题一、名词解释(每小题3分,共分,共30分)分)1、转录2、启动子3、密码子的简并性4、多核糖体循环5、增强子6、多顺反子MRNA7、HNRNA8、SD序列9、分子伴侣10、终止子第2页共2页二、问答题(二、问答题(70分)分)1、试列出TRNA分子上与多肽合成有关的位点。(10分)2、试述RNA分类,各类RNA的结构特点及其在蛋白质合成中的作用。(10分)3、真核生物蛋白质合成后的运输是怎样进行的(10分)4、原核和真核细胞在蛋白质翻译过程有哪些不同之处(20分)5、真核生物三种RNA聚合酶的启动子的结构各有何特点(10分)6、说明原核生物RNA合成的终止机制。(10分)
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    • 简介:临床分子生物学检验技术试题及答案临床分子生物学检验技术试题及答案1、分子生物学检验技术是以核酸或蛋白质为分析材料,通过分析基因的结构、表达的变化和由此而导致的基因功能的改变,为疾病的研究和诊断提供更准确、更科学的信息和依据的一门学科。2、请说明分子生物学检验技术在临床试验诊断中的应用。(1)感染性微生物的检测。如用PCR技术进行甲型肝炎病毒的检测、乙型肝炎病毒的检测和解脲脲原体的检测等。(2)基因突变的检测。如用PCR一限制性片段长度多态性(RFLP技术检测地中海贫血基因突变。(3)法医学检测。如用PCR微卫星检测技术进行亲子关系的鉴定和个体识别。(4)基因异常表达的检测。如用CDNA表达的芯片技术进行基因异常表达的检测。(5)基因定位。如用原位杂交技术进行组织与细胞中基因表达的定位。3、基因组是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质。4、基因是基因组中一个功能单位,是贮存有功能的蛋白质多肽链信息或RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。5、原核生物是细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋双链RNA和单链RNA;有环状分子,也有线性分子。但无论是哪种核酸类型,一种病毒颗粒中核酸成分只能为一种,或DNA,或RNA。(3)基因组中有基因重叠现象,这种结构的意义在于使较小的基因组能携带较多的遗传信息。(4)基因组中具有操纵子结构。(5)病毒基因可连续也可间断。(6)基因组中重复序列少。(7)基因组中非编码区少。(8)病毒基因组是单倍体。(9)病毒基因组核酸序列中功能相关的蛋白质基因往往丛集在基因组的一个或几个特定部位,形成一个功能单位或转录单元。(10)病毒基因组含有不规则的结构基因。11、真核生物基因组的结构特点(1真核生物基本上不存在操纵子结构,一个结构基因转录生成一条MRNA,即MRNA是单顺反子,许多蛋白是由相同或不同的亚基构成,因此涉及多个基因的协调表达。(2)基因组中非编码的区域多于编码区域,并且,编码蛋白质的基因一般是不连续的断裂基因,即有外显子和内含子,在转录后经剪切成成熟MRNA后,才能翻译成蛋白质。(3)基因组DNA有重度、中度和低度三种重复序列。(4)
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    • 简介:专业课复习资料(最新版)专业课复习资料(最新版)封面
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    • 简介:最新精品WORD欢迎下载可修改1SNRNA小核RNA,只存在于细胞核或者核质核仁中的一类小分子量的RNA,具有独特功能并且独立存在的实体,约为70300个核苷酸,可参与真核生物的RNA剪接。2SIRNA即干扰RNA,一类小分子量的RNA,可以高效,特意地阻断体内同源基因的表达,促使同源MRNA降解,诱使细胞表现出特定的基因缺失。3核酶一类具有催化活性的核糖核酸,呈锤头状,参加RNA的剪切和降解。与RNA酶有显著区别,它是RNA,后者是蛋白质。4反义RNA又称调节RNA,是指能与特定MRNA互补结合的RNA片段,即碱基序列正好与有意义的MRNA互补的RNA分子。5三链DNA是在DNA双螺旋结构基础上形成的,由多聚嘧啶核苷酸或者多聚嘌呤核苷酸与DNA双螺旋形成的。/由于双螺旋的一股轻微折叠后,该股中的碱基可与双螺旋的碱基以HOOGSTEEN氢键相连如TAT、CGC、TAA、CGG。6RNAI即RNAI干扰,SIRNA高效特异地阻断体内同源基因表达,促使同源RNA降解,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型的现象。7何谓反义RNA其功能和医学意义如何答又称为调节RNA,是指能与特定MRNA互补结合的RNA片段,也即碱基序列与有意义的MRNA互补的RNA分子。功能A阻断MRNA的翻译,B抑制DNA复制和MRNA的转录,C选择性的关闭基因。意义参与基因调控可用于基因治疗(病毒、肿瘤);8什么叫做核酶如何发挥作用有何应用价值答即一类具有催化活性的核糖核酸。主要催化RNA的剪接反应和剪切反应。应用意义通过设计合成特异性切割病毒以及病毒的RNA的核酶,对病毒和肿瘤的基因治疗将发挥重要作用。9何谓RNAI其作用机理和应用前景如何答即RNAI干扰,SIRNA高效特异地阻断体内同源基因表达,促使同源RNA降解,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型的现象。作用机理分为起始阶段和效应阶段。起始阶段DICER酶以依赖ATP的方式切割外源性的双链RNA为小分子干扰RNA,清除病毒,阻断转座子表达;效应阶段小分子干扰RNA结合核酶复合物形成RNA诱导活化的复合物及RISC,然后RISC结合至MRNA转录本上并切割它,从而发挥作用。应用前景大通量研究基因功能的工具;基因敲除中的应用;用于基因治疗;基因表达的调控。第二章第二章1移动基因又叫转位因子(TRANSPOSABLEELEMENTS),由于它可以在染色体基因组上移动,甚至可在不同染色体间跃迁,故又称跳跃基因(JUMPINGGENE)。2断裂基因真核细胞的结构基因,其核苷酸序列中含有与氨基酸编码无关的DNA间隔区段,从而被分割成不连续的若干区域。将这种编码序列不连续,有间隔区段的DNA片断称为断裂基因3RNA剪接将断裂基因的内含子删除和表达子连接并最终形成成熟MRNA的过程。4重叠基因不同基因的核苷酸序列有时为相邻两个基因共用,将核苷酸彼此重叠的两个基因称为重叠基因。5假基因在珠蛋白基因簇各片段核苷酸序列分析时发现,除了有正常的功能基因之外,还有功能失活的特殊序列片段,它不能行使表达功能。该类核苷酸序列中存在的无表达功能的畸变核苷酸序列片段。6卫星DNA又称随体DNA,不编码蛋白质和转录RNA的小片段高度重复一类小片段DNA序列,多富含GC碱基在DNA浮力密度实验中会在主峰旁形成些小峰,形似卫星分布而称之。一般510BP短序列,人类为171BP,保护和稳定染色体7基因组表示某物种单倍体的总DNA。对于二倍体高等生物其配子的DNA总和即为一组基因组不同生物基因组数目不同。8LTR即长末端重复序列,为RNA基因组的两端含有的U3RU5两个完全相同的正向重复序列。具随机整和能力,可用作病毒载体问答1什么叫做基因何谓基因的新概念基因的主要功能是什么答基因就是指编码有最新精品WORD欢迎下载可修改活性,可独立存在与上游区、下游区或基因内部,可进行远距离增强启动作用,而且无方向性。问答1真核表达调控的顺式作用元件有哪些其作用特点是什么答顺式作用元件有启动子,增强子,沉默子,衰减子,终止子。作用特点是能够与DNA结合蛋白质结合的特定序列的DNA片段,决定转录起始位点和RNA聚合酶的转录效应。2真核表达调控的反式作用因子有哪些其作用特点答反式作用元件主要分为通用转录因子和转录调节因子两大类。作用特点一,同一DNA序列可被不同蛋白质识别;二同一蛋白质因子可与多种不同DNA序列发生联系,多通过蛋白质蛋白质先结合再影响DNA。三蛋白质蛋白质或蛋白质DNA的结合,导致构象上细微的改变,从而发挥调控作用。四反式作用元件在合成过程中有相当大的可变性和可塑性。4常用的真核表达载体有哪些并简述其特点。答主要有一下几种逆转录病毒载体,痘类病毒载体,HSVI单纯疱疹病毒载体。特点一,逆转录病毒载体对细胞的感染效率高,并能表达整合的病毒基因;可以同时感染大量细胞;长时间感染细胞并不会发生毒害作用;宿主范围十分广泛;可以进行DNA的单拷贝整合;但稳定性差,安全性差,重组病毒滴度不高而且局限于感染分裂细胞。二,痘类病毒载体对多种细胞敏感易于培养利于大量生产制备;对外环境相对稳定并易于保存运输;接种途径简单易行;利于多价疫苗的研究开发;利于大片段的外源性基因的插入,且不影响病毒的正常复制和表达,但是基因组分子量大不易操作,没有MRNA的剪切功能故不宜采用基因组DNA,需使用无内含子的CDNA。三,HSVI单纯疱疹病毒载体比较大利于大片段的外源性基因插入提供条件,而且插入容量大;可以感染神经细胞。5简述真核,原核俩大表达系统的优缺点答一,真核生物DNA只有一小部分是裸露的,有核膜包裹;原核生物大部分属于非结合状态,且无核膜的阻隔,转录的MRNA直接在胞质中进行蛋白合成。二,真核生物DNA都有内含子,可以剪接加以去除;原核生物MRNA的剪接加工能力。三,真核生物可以在需要时可以重排某些DNA片段和扩增特定基因的机制,而原核生物没有。四,真核生物有三种MRNA酶,可参与不同类型的RNA分子转录作用,而原核生物只有一种RNA酶。五,真核生物产生的MRNA分子寿命大多比原核生物长。六,真核生物具有对初级转录产物的剪接能力。七,真核生物不存在操纵子结构,原核生物多是。八,真核生物基因多拷贝,而原核生物含有很少的重复序列。第五章第五章名词解释1限制性核酸内切酶是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列,并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶。2同尾酶有一些限制性核酸内切酶识别的碱基顺序不完全恒定,即识别顺序不同,但酶切后产生同样黏性末端的两种酶称为同尾酶,如BAMHⅠ和BGLⅡ。3同裂酶识别序列相同,对甲基化切点敏感性不同的两种酶。如MBOⅠ和SAU3AⅠ共同识别序列GATC,但对GMEATC切点,前者不能切,后者能切。4甲基化酶常见的有DAM甲基化酶和DCM甲基化酶,可使相应碱基甲基化。常用于使酶切位点中的碱基甲基化而避免降解,保护酶切位点。5KLENOW酶为DNA聚合酶Ⅰ大片段,分子质量为76KD,是经过枯草杆菌蛋白酶或胰蛋白酶分解DNA聚合酶Ⅰ,切除小亚基,保留的大亚基部分。这种酶只有DNA聚合酶的活性和3/外切酶的活性,但是没有5/外切酶活性。6碱性磷酸酶该酶的功能是以单链或双链的DNA、RNA为基质,将DAN或RNA片段的5’端的磷酸切除,产生5’OH7逆转录酶又称为依赖RNA的DNA聚合酶,可以RNA为模板,逆转录成CDNA第一链,这种酶具有聚合酶活性和3’外切酶活性。8DNA连接酶LIGASE)是一种能够催化在双股DNA链的3′OH和5′P之间形成磷酸二酯键的酶,可连接互补粘性末端或平端以及缺口修复,不能连接单链DNA,被连接的DNA链必须是双螺旋DNA分子的一部分。
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    • 简介:最新精品WORD欢迎下载可修改分子生物学知识点(修改)分子生物学知识点(修改)染色体与染色体与DNADNA▲基因基因DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列,是遗传物质最小的功能单位。▲基因的分子生物学定义基因的分子生物学定义产生一条多肽链或功能RNA所必需的全部核苷酸序列▲基因组基因组单倍体细胞中含有的整套染色体。▲染色体染色体细胞在有丝分裂(或减数分裂)时遗传物质存在的特定形式,是间期细胞染色质结构紧密组装的结果。▲染色体组成DNA、组蛋白、非组蛋白、部分RNA▲染色体的特征1、分子结构相对稳定2、能够自我复制,使亲子代之间保持连续性3、能够指导蛋白质的合成,掌握整个生命过程4、可以产生可遗传的变异▲组蛋白组蛋白与DNA结合但没有序列特异性的蛋白,是染色体的结构蛋白,与DNA共同组成真核生物染色质的基本结构单位核小体▲组蛋白的特性1、进化上保守,不同生物组蛋白的氨基酸组成和相似2、无组织特异性3、肽链上氨基酸分布不对称4、组蛋白有修饰作用▲非组蛋白非组蛋白与DNA结合但有序列特异性的蛋白▲非组蛋白的特性1、具有多样性和异质性,不同组织细胞中其种类和数量都不相同2、具有识别、结合特异性,能够识别特异的DNA序列,在不同的基因组之间,这些非组识别的DNA序列在进化上是保守的3、具有功能的多样性,包括基因表达的调控和协助染色质高级结构的形成★真核与原核生物基因组的区别★真核与原核生物基因组的区别原核生物基因组真核生物基因组结构简单,几乎所有基因都用来编码蛋白质结构庞大,存在大量重复序列和非编码序列功能相关的RNA和蛋白质基因,往往集中在一起形成功能或转录单位,可以一起被转录为多个MRNA(多顺反子MRNA)基因的转录产物为单顺反子有重叠基因(完全重叠、部分重叠、只有一个碱基对的重叠)基因分布在一个染色体上基因分布在多个染色体上几乎每一个基因都是完整的连续的DNA片段基因是不连续的,中间存在不被翻译的内含子序列基因转录和翻译是同步的基因组转录后的绝大部分前体RNA必须经过剪接过程才能形成成熟的MRNA原核生物的基因组一般是一个复制子基因组的复制起点多,缺少明显的操纵最新精品WORD欢迎下载可修改有关),拓扑异构酶II(切断双链,作用是将负超螺旋引入DNA分子,同复制有关)。◆解旋酶是解开双链的酶蛋白,每解开1对碱基,需要消耗2分子ATP。◆单链结合蛋白(SSB)是一些能够和单链DNA结合的蛋白质因子,用于稳定DNA单链,保护单链DNA,避免核酸酶的降解。◆引发酶参与构成引发体,合成RNA引物,提供复制所需要的3’OH端,引发体由引发酶和引发前体组成。◆DNA聚合酶需DNDP为原料,MG2激活,需模板和3’OH端引物。◆DNA连接酶催化两段DNA之间磷酸二酯键的形成,但不能将两条游离的单链连接起来◆DNA复制的过程起始(DNA母链形成复制叉,DNA合成从复制起始点出沿着两个方向进行,和RNA引物形成的阶段)。延长(复制叉的移动和新生链的延长,包括前导链和后随链的延长)。终止(新生子链和母链形成新生的双链DNA)▲原核生物DNA聚合酶◆DNA聚合酶I5’3’的聚合酶活性,3’5’,5’3’外切酶活性,在切除因紫外线照射而形成嘧啶二聚体中有重要作用,也可用来切除冈崎片段5’端的RNA引物,使冈崎片段间缺口消失,保障连接酶的连接。◆DNA聚合酶II5’3’的聚合酶活性,3’5’外切酶活性,主要是起修复DNA的作用。◆DNA聚合酶III5’3’的聚合酶活性,3’5’外切酶活性提高复制的保真性,是DNA复制中链延长的主导聚合酶。▲真核生物DNA聚合酶◆DNA聚合酶Α(分布在核内,主要作用是引物合成)◆DNA聚合酶Β(分布在核内,主要起对损伤的修复,属高忠实性修复酶)◆DNA聚合酶Γ(分布在线粒体内,对线粒体DNA的复制发挥作用)◆DNA聚合酶Δ(分布在核内,主要负责DNA复制的酶,参与前导和后随链的合成)◆DNA聚合酶Ε(分布在核内,与后随链的合成有关)▲DNA的复制体系DNDP为原料,DNA的两条链为模板链,一段RNA引物,引物酶,聚合酶等多种酶。▲DNA的复制的几种方式◆线性DNA复制(主要是真核生物)◆环状DNA复制(大肠杆菌Θ型,质粒滚环型(不需要RNA引物,只有一个复制叉),线粒体D型)★真核与原核生物★真核与原核生物DNADNA复制的比较复制的比较相同点1、都以DNTP为底物,需要MG激活,需要能量2、聚合时需要模板和引物,都为半保留、半不连续复制3、方向为5’3’不断延长的是3’OH4、复制为高保真、有多种机制不同点真核生物原核生物多复制子,多复制起点,双向为主也有单向单个复制子,单个复制起点,双向一个复制单元一个复制叉,复制叉移动慢一个复制单元有多个复制叉,复制叉移动快DNA聚合酶种类较多,有15种以上DNA聚合酶种类相对较少DNA复制需要起始点识别复合物不需要
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    • 简介:最新精品WORD欢迎下载可修改第二章DNA的结构一、选择题单选或多选1.证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是肺炎球菌在老鼠体内的毒性和T2噬菌体感染大肠杆菌。这两个实验中主要的论点证据是A从被感染的生物体内重新分离得到DNA,作为疾病的致病剂BDNA突变导致毒性丧失C生物体吸收的外源DNA而并非蛋白质改变了其遗传潜能DDNA是不能在生物体间转移的,因此它一定是一种非常保守的分子E真核生物、原核生物、病毒的DNA能相互混合并彼此替代21953年WATSON和CRICK提出A多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋BDNA的复制是半保留的,常常形成亲本子代双螺旋杂合链C三个连续的核苛酸代表一个遗传密码D遗传物质通常是DNA而非RNAE分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变3双链DNA中的碱基对有AAUBGTCCGDTAECA4DNA双螺旋的解链或变性打断了互补碱基间的氢键,并因此改变了它们的光吸收特性。以下哪些是对DNA的解链温度的正确描述A哺乳动物DNA约为450C,因此发烧时体温高于420C是十分危险的B依赖于AT含量,因为AT含量越高则双链分开所需要的能量越少C是双链DNA中两条单链分开过程中温度变化范围的中间值D可通过碱基在260MM的特征吸收峰的改变来确定E就是单链发生断裂磷酸二醋键断裂时的温度5DNA的变性A包括双螺旋的解链B可以由低温产生C是可逆的D是磷酸二醋键的断裂E包括氢键的断裂6在类似RNA这样的单链核酸所表现出的“二级结构“中,发夹结构的形成A基于各个片段间的互补,形成反向平行双螺旋B依赖于AU含量,因为形成的氢键越少则发生碱基配对所需的能量也越少C仅仅当两配对区段中所有的碱基均互补时才会发生D同样包括有像GU这样的不规则碱基配对E允许存在几个只有提供过量的自由能才能形成碱基对的碱基7.DNA分子中的超螺旋A仅发生于环状DNA中。如果双螺旋在围绕其自身的轴缠绕后即增加缠绕数才闭合,则双螺旋在扭转力的作用下,处于静止B在线性和环状DNA中均有发生。缠绕数的增加可被碱基配对的改变和氢键的增加所抑制C可在一个闭合的DNA分子中形成一个左手双螺旋。负超螺旋是DNA修饰的前提,为酶接触DNA提供了条件D足真核生物DNA有丝分裂过程中固缩的原因E是双螺旋中一条链绕另一条链的旋转数和双螺旋轴的回转数的总和8DNA在10MM纤丝中压缩多少倍长度A6倍B10倍C40倍D240倍E1000倍F10000倍9DNA在3MM纤丝中压缩多少倍A6倍BL0倍C40倍D240倍ELO00倍F10000倍10DNA在染色体的常染色质区压缩多少倍A6倍B10惜C40倍D240倍E1000倍F10000倍11DNA在中期染色体中压缩多少倍A6倍B10倍C40倍D240倍E1000倍F10000倍12组蛋白的净电荷是A正B中性C负13.核小体的电性是A正B中性C负最新精品WORD欢迎下载可修改一选择题1基因组是“A一个生物体内所有基因的分子总量(B)一个二倍体细胞中的染色体数C遗传单位D生物体的一个特定细胞内所有基因的分子的总量2多态性可通过表型或DNA分析检测到是指A在一个单克隆的纯化菌落培养物中存在不同的等位基因B个物种种群中存在至少两个不同的等位基因C个物种种群中存在至少三个不同的等位基因D一个基因影响了一种表型的两个或更多非相关方面的情况E一个细胞含有的两套以上的单倍体基因组3.核基因经常被断开“A反映了真核生物的MRNA是多顺反子B因为编码序列“外显子“被非编码序列“内含子“所分隔C因为真核生物的DNA为线性而且被分开在各个染色体上,所以同一个基因的不同部分可能分布于不同的染色体上D表明初始转录产物必须被加工后才可被翻译E表明真核基因可能有多种表达产物,因为它有可能在MRNA加工的过程中采用不同的外显子重组方式4下面叙述哪些是正确的AC值与生物体的形态复杂性呈正相关BC值与生物体的形态复杂性呈负相关C每个门的最小C值与生物体形态复杂性是大致相关的5选出下列所有正确的叙述。A外显子以相同顺序存在于基因组和CDNA中B内含子经常可以被翻译C人体内所有的细胞具有相同的一套基因D人体内所有的细胞表达相同的一套基因E人体内所有的细胞以相同的一种方式剪接每个基因的MRNA6下列关于酵母和哺乳动物的陈述哪些是正确的A大多数酵母基因没有内含子,而大多数哺乳动物基因有许多内含子B酵母基因组的大部分基因比哺乳动物基因组的大部分基因小C大多数酵母蛋白比哺乳动物相应的蛋白小D尽管酵母基因比哺乳动物基因小,但大多数酵母蛋白与哺乳动物相应的蛋白大小大致相同7下列哪些基因组特性随生物的复杂程度增加而上升A基因组大小B基因数量C基因组中基因的密度D单个基因的平均大小8以下关于假基因的陈述哪些是正确的A它们含有终止子B它们不被转录C它们不被翻译D它们可能因上述任一种原因而失活E它们会由于缺失或其他机理最终从基因组中消失F它们能进化为具有不同功能的新基因9假基因是由于不均等交换后,其中一个拷贝失活导致的。选出下面关于此过程的正确叙述。A失活点可通过比较沉默位点变化的数量和置换位点变化的数量来确定B如果假基因是在基因复制后立即失活,则它在置换位点比沉默位点有更多的变化C如果假基因是在基因复制后经过相当长一段时间才失活,则它在置换位点与沉默位点有相同数量的变化10下列哪些基因以典型的串联形式存在于真核生物基因组A球蛋白基因B组蛋白基因CRRNA基因D肌动蛋白基因11根据外显子改组EXONSHUFFLING假说A蛋白的功能性结构域由单个外显子编码
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    • 简介:最新精品WORD欢迎下载可修改一、一、简述DNA二级结级结构的特点构的特点双螺旋双螺旋DNA两条核苷酸两条核苷酸链反向平行,以一定平行距离反向平行,以一定平行距离绕一个轴盘轴盘旋,形成一个右旋的双螺旋体。旋,形成一个右旋的双螺旋体。主链磷酸和核苷酸排列在双螺旋外磷酸和核苷酸排列在双螺旋外侧,彼此通,彼此通过35磷酸二磷酸二脂键相连接,形成主接,形成主链。碱基配碱基配对两条主两条主链相对应对应的碱基按照的碱基按照AT和GC的配的配对原则由氢键氢键相连,其中,其中AT之间由两个由两个氢键氢键相连,GC之间由三个由三个氢键氢键相连。主。主链上碱基排列上碱基排列顺序储藏了藏了遗传遗传密码信息。信息。结构尺寸和大小沟构尺寸和大小沟DNA双螺旋分子直径双螺旋分子直径为2NM,螺距,螺距为34NM,其中包括,其中包括10个碱基个碱基对,碱基与碱基之,碱基与碱基之间距离距离为034NM。螺旋外部有两个凹槽,根据大小分螺旋外部有两个凹槽,根据大小分为大小沟,都能使蛋白大小沟,都能使蛋白质分子分子进入而与碱基相接触。入而与碱基相接触。二、核酸的二、核酸的变性DNA二级结级结构和三构和三级结级结构受到物理化学因素的破坏而解体,构受到物理化学因素的破坏而解体,但其一但其一级结级结构核苷酸构核苷酸间共价共价键并不断裂。并不断裂。DNA分子由分子由稳定的双螺旋定的双螺旋结构松解构松解为无规则线规则线性结构的构的现象。象。变性时维时维持双螺旋持双螺旋稳定性的定性的氢键氢键断裂,碱基断裂,碱基间的堆的堆积力遭到破力遭到破坏,但不涉及到其一坏,但不涉及到其一级结级结构的改构的改变。凡能破坏双螺旋。凡能破坏双螺旋稳定性的因定性的因素,如加素,如加热、极端的、极端的PH、有机、有机试剂试剂甲醇、乙醇、尿素及甲甲醇、乙醇、尿素及甲酰胺等,胺等,最新精品WORD欢迎下载可修改DNA损伤损伤又称前突又称前突变,如果,如果细胞不能将胞不能将损伤损伤完全修复,完全修复,DNA不能恢复不能恢复损伤损伤前的前的结果形果形态,就形成不可逆的永久性、可,就形成不可逆的永久性、可遗传遗传的改的改变,即,即发生了基因突生了基因突变。因此三者之因此三者之间的关系是,的关系是,DNA损伤损伤是突是突变的基的基础,而修复,而修复时阻止阻止损伤变损伤变成突成突变的手段,突的手段,突变时损伤变时损伤无法修复造成的后果。无法修复造成的后果。六、六、DNA损伤损伤主要的修复方式主要的修复方式DNA修复可以在三个水平上修复可以在三个水平上进行行1、DNA复制前水平或非复制复制前水平或非复制DNA的修复如回复修复和切的修复如回复修复和切除修复。除修复。回复修复包括回复修复包括酶学光修复(修复学光修复(修复嘧啶嘧啶二聚体),二聚体),单链单链断裂重断裂重组(连接缺口接缺口5磷酸根和磷酸根和3羟基形成磷酸二基形成磷酸二酯键酯键),),嘌呤直接插入(修呤直接插入(修复无复无嘌呤位点)。切除修复包括碱基切除修复和核苷酸切除修复。呤位点)。切除修复包括碱基切除修复和核苷酸切除修复。步骤为识别骤为识别、切除、修、切除、修补、连接。接。DNA复制水平的修复,如复制水平的修复,如错配修复。配修复。错配修复将配修复将DNA复制复制过程中未得到校正的程中未得到校正的错配碱基配碱基进行二行二次校正。次校正。DNA复制水平后的修复,如重复制水平后的修复,如重组修复及修复及SOS修复。修复。重组修复利用含有正常修复利用含有正常遗传遗传信息的同源姐妹信息的同源姐妹DNA分子分子进行重组修复。修复。这种修复常种修复常发生在修复后,可以生在修复后,可以对发对发生在生在DNA两条两条链
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    • 简介:綄氜Ŝ耀睭ʐ냔긊币〉Ц㎀먡睶ヅ礞㳄핒뗦롇奲賋㶞龧㸫䀀쾯넗魹Ⓜﷳ鉘㇛ꈐ蚶휟㚞몌୰ﺱ웶ꇢᄇ囍奧鵁䜵娕㈘㦓⍙紐㶐咯捗춌腰솣賉蟊⡸칩冺␙栭仹诸湷Ὧ憌⃠㸁ᾛ퉎業䉺펚ꀜ臲翐葵尴첒罻䰌㘨缍ᴁꉁ航得剒읾嚯⨹㔏㑔栞뤠┤ꃨ핿䅶⤴儋�ℑ轴ꊾ깄羼羍姙쀁軖ꁲ篠虇嫛퍡뉱䥣毂쩧�廓뿒왵홗�㘬位쉛召숙䇻袎谦꿛ﻕ㝑갞鿅䳅ㅔ얡媤⥆ꃹ鶛蹧ꄡ賎광Ῡ쪘̎罬快흀ೀꁾ䥢酛덲帐刯컏湍퐱픒쩅䮅袋䴟샨䌘넡笎�漅ꐟ㮖ீᶤ彍殐⬖ཀྵ魮䭆ﴕ䍿쏼킱Ặ㯋⑇뢟칳鸜䐦杯葬☷薖찟葥ே扻빔鶈왳�涬퇊깾徛ב蔥癹礷ㅴ뼎ట蜞瀚ꋙ䤻平䒋䄁熒嘙쏈䮇碷㸬O牤Ҳﺾ閠ﯔ儼㧠��ᆃ钦猿�곓귄榋맠檂윮徖໐訚荭蠈招靎욻妍쮷Ǘ欫␖轳쑍䰎�먨㏕윾ꐿ锫夬ᡩﰞ㘡蹗跴틃袄픦ঝ㖇윿骞伐圐蛛ꑶ룲睟饨㧔攬ユ㒼皦蛫ﴖ猢騖袋⧞㚎Ѫ翈㥐䜉嗏�禥昸묡飹펫否鶆諣홃㒛窵析촢�틝嗕㡾䐹컥톑৴홭鰅둚华뉨盖鶳親퉐⎌ㅼ焆쏙樂匿誚亵鞦肵ꍛ棘ﳱ㺗㼔袕ꋆ맲弩Ʀ欲勭볋녩몘䜴摔幭ꈯ般䊾�뜬鉱帮ꋝḀ⢠呃孖ಙ㆟ꅑ�픅윺譾餓䘌铋瓎ﻏ⠌鹟遹鍥㷽Ᵽ힋淴䑬ఠﳾ譈�햟딀퇷歁붐朗뼜�☜⁵졲ꉭ鶧畊䬑單戥敄쀃㠔婱�韴훀芘邏댧氠DZ鍴鬩찱냂뚞폝䇪탩귖̼四풛㘭排觳洭ﶾ嚌ㆇ㩶풼匸馢质䥲�䥼ֽ哅ㅳ頨㧾㊞王糊Ş襖쭆䙍毳戎辵桧즠촉츫䏍밺쐙굒塷琽餚鲛箇䉕崭蠁䬖辖放ㄫ⢅↕伳ﵗ㩍҆瞥␘犎맃큠擾�慄菥㩮퐁퓘鄋「ڗ滾༭⍍炲憞셓쏄4쇼뻍鲾ꑍ�蚓낥宣䃵筂雽Ậ뇘㍩㺚晗ꂭ㷯廠�瞿행�Ʉ嫲嘳樆⩐黬퀛鲴ఏ즀ꑉ諶㭷봁丧튺㺍뾞彲諮┐릍㟚삼桎῟䈳�ଛ莙�㆑퍺�﹨籷Պꃭ䙢妙뼖�츴䪕邒銌䫛䄃蘌懟緈�∊�䣞瞡萃省찎�붾₣傺廛쯧홏莛풛ؼ憯학�悛�硫띭奐寈芚൧칇榰潮鄼ꆔ谼蚳⑁∾㍦ꎰ蕜뻈메ॉ轓첑뺺͗馚�杩䃯잵㙘홟崎쯘潡⻙⩢䥬狆檍ぬ●醝걢㘊槠햢䓵忿躋ꄉ褉畼Μ幚琏ꋙ읹㮯℟Ⱙ紖ﭻ荃㹨Ͽ倀͋؀℀뵶鼀省牯牟汥潤畣敭瑮砮汭爮汥Ң⠁葬䬶遝〬듊厴눽窗䋯윓浼쐁菨歧ת㇜콀ㇼ䏍昋ଗŇೇ儶涷滰⥌좶㒖䛰㈧꺃醝늨6鑪㥽⍡董נプ곊綳㓁䦎瑶밡వ挌䳹馀쵚鎩敷줄た嚢팱뤙똓僚⧮얏벋煡뮡彉骈ര틻跶㎠䰎옠鳔ฎ⇻렧芲鯴⨕랭⺝湙侉䤈籫镥찛ㆬ欧珍芪䐡╎鸆๚톿嫓淮ĶӃ葲�緡핶ِ♁掳∥질쌮ᵗꆸ씯⚩梂㧠혂窞제켮탊㰈⏌衱╳샍懍痉떻ꆴ㣒免∪☻Ɖ�袙鬓㟃だ濱㡙鍟⁄긩⎒�퀁挬⍲摍㯧ﰈ呻裘엵荑桢玡Ὦ愁䃢觞┤鮫햃ഐ⌟䨼ꂯ泺딕家⒌�尘ฃ㐸굓髷ꂦ䛅瀙함➳䝥峁荙歭肊⢯ᅭﱆ汳䪽立摲搯捯浵湥浸�뻿ﭕ倿佼各ꆒ㬻�寬寫됭픂顠⟌ꂼ㝸騱覨馷큄⨤梊ﳕ쌫滩촾낿퍏蠠齏㽛켹쯹罟麘劈盳궘鍦痨峺ຣ翳緾훿덝바섮ᶊ쁢罻폾䉟霎�荺㐦鸸槠ぷ矨뒴鰄拝诳㱞㵉튷隣䄞�뿫ꂅ펻燭鼇�妻왯懗问ຼ覽㵛뫸쎊헗盥慠纜鯹홃決䒑옏먆ﻝ뙀麵孊뎻㲍㘩➉鸽뵬뾐�鉜숐蝡鉼鳹⁢튀說ꍃ墥刂옓ꄌ쾰䣬Ѻ虨㸷淞뱼�锵怞펩竧뽊卾LJ瑘흽뙡汘噭ᶛ紗瘫봉⟹뒊Ṇ爓粻澡�듳䅐넸桢厯䰄뱢盖巀⇈Մ䁅纑燧哓浬蕀莐빮䂠㸈蔐큀㖬쮰ྂ皭缋뷲༓ພ↸뱊鉃揮ĸ筶ᄱ胫㩵隵뼻栉亿잟攧늛寙淭茖싚徯鍯嚦蹃㷠얛䛚Ԝ띹㽚홗벙₷⻯떳뙍冽亳뛯橚韖댲責쳼섰扴䖒�듶롞ꆽ閔㘙致轅謕ਤ䘆鮟뺖縘М휈椄摦蚑闟㒃퐹裰㩝鴢尅뭴찻䭟Ů㉔죤䢢馇웅哧㞵徐뻈䉳잎拍躔膭댟혅̋縿憪»僥ꍁՒ繋樑폨㿹牑帉쒡蒦⪮䵥㬹숽�ꏂ寸걸柹挈獙༅쯹瞗懻䴧훪劕ヌ鳹﨏㤚퀿嗑睑ɺ숃㰻늝Ӈ翈烺겇즶钞ཟ퇊灻첗題㴨�꼚藀㢲泣铡輚爋₲ؓ혪嬯隨蒎諏敌怄툛ᅭ쌡厨쭞妭欵鼵⚈홗�磛ᢪ��Ɫ䳘ﶻ纎帐脙磘싩㌳횭짬�氨尔ਦ떻�曞땩�㞵낃棿�ᅰ痶茐ᶭ织�౦끣阫魹�伟挩涑攨퇊晊帆覠蛌骦쾭톱癒鉡䌳묰ꌹ읠嗆賈თ耎Ῐ唜亖쪝寽舲鲠늍ᶥ얦玌蜅椌ﴛ퐥霡쨑Ⓤ熌懯쌿䠑娩鞇��講⅘눭躆숞梙쑚樍徂訛휘铋枹禙芭뉶䬪둜ꐴ㢩궢員暈妭涏Ṕ猉躵띴褌位鬨퐻믅甕ᾴ퀗팴눮㩱饽㷕扑䯴疾㵤㥇粝㩏Š㽊펇팶匟蕢赘ﰽҢ욃鱣䶟썧K砸�⓺殜㕭쁫죓뮽�밒箏땣튷襧놟ൎ穤胖克䞳椔溧Ď㕎Ğ嚈뿞Ƈ鹚鶧䨆偲≉莸῎跖⬟㡚汝뤕ळ뇼O⛑耢鶁ᶼ뤥暀잩욼惲虧㡡쎡賊냁柩귮툀囥薻㿼什駠䚁賀㡜怞䖟詨퉜쇚≥瀓찞陳퓤졍뎠댌칛寰끄嗊ொ푌垬�싲匫悻霪쬷麕졖║�Տ筘�⫿㹖礀쒧遪Ⓕ�ﶪ℺㜸讉季໗彊५貥䨕쩗괯삣ヽ付基䊿맏⛗뀉榪풫ﳳ峱锤锽ᅣ饉䗈넒㩬謝ꉅ匝얦唢돬㛣淕쭉빙컑恅禿㊆ⓌΜ䤑讚䭸쵻丒삥늙魭㑲㣪콎엤⣪稱ꌔ俤侪㐺ﴟ퓑刌吘쑍짢㱬켞쨀뵓壩䗏呰윻妈镖ﻑ蛬�≩㪗虦攌鋔溚란钥蕩㵘䦆塵䊬ᡬ劲살ꎈڊ捬梙蠺ౢ覔ꉞ雽綐⇳忾뗊鑃쐳刦↟瘪톕�ꁩ쀟澋쟓喆뢰ᅔἘ䍜Ộ酖觷Ἐꏰ϶Ѐ㺶禮㌘㊜ԥ㐫儭瘜锉哗簓䍐ㄭ嚙鰼彽玈➿얲ᆔ୰॰涠浆貥ᅤ퇳뒲큌�漹䡠㛕嫀Ṅ눯訵뛣粤琠憁�除蹽उ賂擵졬챂㖰苜瓜닥멨�≴건呔㊛卉뤫潈,㱡筕�栦ꁠ샩鐧‴졡諑ﻉ�핋唵䢧䇋牠尚明䡌뉑㤩댲싔阦안餓䣞㔸焴數掸�麌죭媎鰰䌁馷檁쁱䑚䰁㣣⤲嚂䘎槒惡禡⇭Ⱊ勞ʢ웇␈赖茖☹님恁隭䊢锳졨伅寷漳맆뽲畮凮쇀DŽ墎㐱薃撙㔦劏㘆궗烉�㘫鍙蠃쎃猔箠薠�崊䜪鵭㢀織㫀�ﶮ徹풻몜煟漷횅铚磷뿝퀝俾ꌹ諀쓒擝ノ鮯䎶Ϭ흡퓞㮎擐학쬡Ⱄ咝ꈤ執규뛦駲窷뿗햳府囱萷㕓믔鯝绢�定쇷ﶳୗ뗻닍罟컮�웜㞌睛強�賦랷귨祭㛗潚媖溏嶾᷾税晏馼떒縐胗뮹ﴏ彟빶췦뺯巛㝲쵫妝癯禮ᵫ甘翖ﶖ喙老榽淸뼽竚棓뇾峑붮�槭도랐绾栌獊臾뢲汜舭À琕췢붮㞽确첿ℕ滭燐鳆뎻悂澶㮸뵏瞧謁ﭟ쮵뷭叙㏉颃禡ﱲ烧㳮ꏎ댺≳䮨撏嶧櫖뒬뾮勨ਖ㈧ⁿ낞ユ㟺짯㑳쏲曹䇛拀㾙魲媌趔⥁ᴭ倂ゞ茩縧쨔끾谶石땙荬�蜖꺈㱔鷻क़톞䚄ꍁ뇼椥㒑䨎侁�붱硺ໆ珠後瓅ꃿ溷懅胹┕ﻜ㩜ﭶ䬋ㄸ飺벫␗�ঙ彆Ɐ別ㄻ蘇뻯ꆙ젚挚萣䅠˻勍傐⨻烶奣瀞㙐譂冔셝뎐蠡酳웣⑁萧誚Ɔ鵇詈易˩팖䏐꿷퀲�偤魙攄ꉓ恕甌⬚죴憼ۛ姴㋡ਸ਼嗭ﺀ慴鹩Ѯ닙맰釅啋瞛䄤뿘ꒀ栩룫샷魗䱳�봀싞䣣췐⋦솛숊鰀অ쁎픍簊ཻ￿䭐Ѓ䵻鉠ŲϞ潷摲是潯湴瑯獥砮汭銬櫛ッ蘌蝻ﯠ䧖䤋ꃊ竬鸀㓣녦汥大统燊坛熻撈ス䬯啃⍁鎬厠초霡郺힒螗雅츄鴳ળ䢴凉눸滋鉯밀聜ۢ⛷풦勱悖욄Ťㅖ뾏䃶댕뗯灙虐凉⬦迩戲┠햵裱⡘⠸坼䌒䡑옮哏꽡毀됥稕楊䓜罓憥椄㔮멪髗푫쭲��壜신谹蟮䳤슌�Ϣ衶ଚ㔿✧䦊挽餸㳿▼輎�䎴㕽澂綑趠퇽줠쌉ॠ撆銞뾰霏缵䃂Ὸ尻㇐K藘땨�츩㐂⡋晴듧柙熍廐뫪鱟叧톓鬿⬼쥶瘰뤲￿�䭐ЃӍ充Ɂ೮潷摲栯慥敤ㅲ砮汭埬滍䃓븐혎椻䑂䜹㳼훀흞�汮侩쒀쓠宑淡烚␟䉕誒䔊嚜�뻹曹훆ר鵋⢌Ս倏蜡僰鑄Ҟ冓辫洜輰⩰स铐瑨렴䢓뗍膟ㄣ渚蓃갰䋛ฒ壎蘨㰍憗糵嬢悡䱺橓溦ᆂ騁䘭╃袴䗱팜咐ᵇ횡蜣鰢숰셍⫨䊒舎蓫嵊놣텭所荒摄괬ᵲ䢶셚㋒峭䢨ᄪ괒㫁鴬戍寇巅퀕㑂イ姏쉧谍谝ﺅ촷䍫��債蒿〆퉆緉뼘凨㲀뮯惶⫤ﮃﵹ썻捑鈜优獒㟸腓嘼䳘Ɓ͎箄뗈柖浡뷐Ê棜❰Δ섍㳚瞗쯴횇恕㭵뉂奎쀁䊅峒雾㵵禆�칟ﮙ
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