简介：1分子生物学检测技术分子生物学检测技术分子生物学诊断技术是现代分子生物学与分子遗传学取得巨大进步的结晶，是在人们对基因的结构以及基因的表达和调控等生命本质问题的认识日益加深的基础上产生的。近年来，分子生物学诊断技术的方法学研究取得了很大进展，先后建立了限制性内切酶酶谱分析、核酸分子杂交、限制性片段长度多态性连锁分析等方法。1985年由美国CETUS公司人类遗传学研究室MULLIS等创立并随后迅速发展起来的DNA体外扩增技术（POLYMERASECHAINREACTION,PCR），以及90年代发展起来的DNA芯片技术（DNACHIP），又将分子生物学诊断技术提高到一个崭新的阶段。一、一、核酸分子杂交核酸分子杂交（一）概述具有一定互补序列的核苷酸单链在液相或固相中按碱基互补配对原则缔合成异质双链的过程叫核酸分子杂交。应用该技术可对特定DNA或RNA序列进行定性或定量检测。到目前为止，分子杂交技术在基因诊断中仍占重要地位，它按反应支持物可分为固相杂交和液相杂交两种，前者应用较广，有SOUTHERN印迹杂交、点杂交、夹心杂交（三明治杂交）、原位杂交和寡核苷酸探针技术等。核酸分子杂交主要涉及两个方面待测的DNA或RNA，以及用于检测的DNA或RNA探针。探针标记的好坏决定检测的敏感性。1、SOUTHERN印迹杂交是最经典和应用最广泛的杂交方法。根据基因探针与待测DNA限制酶酶解片段杂交的带谱，可以直接确定宿主基因的缺陷所在或病原体的存在状态。3光检测核酸的含量。BDNA技术是目前核酸直接量化检测技术中灵敏度最高的方法之一。但该方法成本较高，不利于其普及应用。5、原位杂交直接在组织切片或细胞涂片上进行杂交反应。该技术可检出细胞中单拷贝MRNA，估算病毒在宿主细胞中复制和转录的程度，对于病毒感染（特别是具有长潜伏期的病毒感染）和其它退行性疾病的诊断很有用。6、液相杂交液相杂交酶免疫法量化检测核酸扩增产物这种方法同固相杂交量化检测核酸扩增产物原理大致相同，只是将反应体系换为液相环境。应用液相杂交量化检测维生素D结合蛋白基因，在PCR扩增时通过掺入法使产物上挂有地高辛分子，再通过液相杂交与标记有生物素的探针结合后，被包被有链亲和素的酶标微孔板捕获，利用辣根酶标记的地高辛抗体使酶反应底物OPD或TMB显色。据报道，核酸扩增产物与特异性探针在液相中的杂交效率要高于在酶标微孔板上的结合，液相杂交的灵敏度通常是固相杂交的10～20倍，可以检测到PG水平。二、二、聚合酶链反应（聚合酶链反应（PCR）PCR是近年来发展起来的一种快速的DNA片段扩增技术，它通过分别与双链目的DNA序列两个3’端互补的寡核苷酸引物，由TAQDNA聚合酶从5’到3’进行一系列DNA聚合反应，扩增出所需要的目的DNA。由于每个循环中合成的引物延伸产物可作为下一循环中的模板，因而每次循环中靶DNA的拷贝数几乎呈几何级数增长，因此，20次PCR循环将产生约一百万倍（220）的扩增产物。这种1985年由KARYMULLIS建立的方法最早在美国CETUS公司人类遗传学

简介：第1页共3页分子生物学分子生物学B基因组与基因、基因组与基因、DNADNA复制测验题复制测验题学号学号专业专业班级班级姓名姓名一、名词解释（每小题一、名词解释（每小题3分，共分，共30分）分）1、复制子复制子2、单复制子、单复制子3、多复制子、多复制子4、端粒端粒是真核生物染色体的两个末端序列，与特定的蛋白质形成复合物。、端粒端粒是真核生物染色体的两个末端序列，与特定的蛋白质形成复合物。5、端粒酶是由、端粒酶是由RNARNA和蛋白体组成的复合体，属专一的依赖和蛋白体组成的复合体，属专一的依赖RNARNA的逆转录酶，能以自身的逆转录酶，能以自身RNARNA为模板反转录合成端粒为模板反转录合成端粒DNADNA序列，以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短，保持端粒长度序列，以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短，保持端粒长度的稳定，恢复端粒的功能。的稳定，恢复端粒的功能。6、滚环式复制、滚环式复制DNA聚合酶III以3OH为引物，以负链为模板，从3OH端逐步增添脱氧核苷酸，随着复制的进行，5‘端长度即不断增加。这一过程中，单链尾巴的延伸伴随着双链DNA的绕轴滚动，故称为滚环式复制。7、基因是编码一条多肽链或功能、基因是编码一条多肽链或功能RNARNA所必需的全部核苷酸序列。所必需的全部核苷酸序列。8、基因组是指某一特定生物单倍体染色体的数目及其所携带的全部基因。、基因组是指某一特定生物单倍体染色体的数目及其所携带的全部基因。9、假基因没有功能的基因称为假基因。、假基因没有功能的基因称为假基因。第3页共3页5、真核生物和原核生物复制起点在数量上有什么不同在复制完成之前，它们复制启动的、真核生物和原核生物复制起点在数量上有什么不同在复制完成之前，它们复制启动的次数又有什么差异（次数又有什么差异（5分）分）6、什么叫拓扑异构酶拓扑异构酶、什么叫拓扑异构酶拓扑异构酶Ⅰ和拓扑异构酶和拓扑异构酶Ⅱ各自的特点是什么旋转酶是属于哪各自的特点是什么旋转酶是属于哪一类（一类（1010分）分）7、多数生物的遗传物质是、多数生物的遗传物质是DNADNA，请问，请问DNADNA的复制方式有哪些（的复制方式有哪些（1010分）分）

简介：第1页共3页2014201520142015学年第一学期学年第一学期分子生物学分子生物学B基因组与基因、基因组与基因、DNADNA复制测验题复制测验题学号学号专业专业班级班级姓名姓名一、名词解释（每小题一、名词解释（每小题3分，共分，共30分）分）1、复制子复制子2、单复制子、单复制子3、多复制子、多复制子4、端粒端粒是真核生物染色体的两个末端序列，与特定的蛋白质形成复合物。、端粒端粒是真核生物染色体的两个末端序列，与特定的蛋白质形成复合物。5、端粒酶是由、端粒酶是由RNARNA和蛋白体组成的复合体，属专一的依赖和蛋白体组成的复合体，属专一的依赖RNARNA的逆转录酶，能以自身的逆转录酶，能以自身RNARNA为模板反转录合成端粒为模板反转录合成端粒DNADNA序列，以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短，保持端粒长度序列，以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短，保持端粒长度的稳定，恢复端粒的功能。的稳定，恢复端粒的功能。6、滚环式复制、滚环式复制DNA聚合酶III以3OH为引物，以负链为模板，从3OH端逐步增添脱氧核苷酸，随着复制的进行，5‘端长度即不断增加。这一过程中，单链尾巴的延伸伴随着双链DNA的绕轴滚动，故称为滚环式复制。7、基因是编码一条多肽链或功能、基因是编码一条多肽链或功能RNARNA所必需的全部核苷酸序列。所必需的全部核苷酸序列。8、基因组是指某一特定生物单倍体染色体的数目及其所携带的全部基因。、基因组是指某一特定生物单倍体染色体的数目及其所携带的全部基因。9、假基因没有功能的基因称为假基因。、假基因没有功能的基因称为假基因。第3页共3页5、真核生物和原核生物复制起点在数量上有什么不同在复制完成之前，它们复制启动的、真核生物和原核生物复制起点在数量上有什么不同在复制完成之前，它们复制启动的次数又有什么差异（次数又有什么差异（5分）分）6、什么叫拓扑异构酶拓扑异构酶、什么叫拓扑异构酶拓扑异构酶Ⅰ和拓扑异构酶和拓扑异构酶Ⅱ各自的特点是什么旋转酶是属于哪各自的特点是什么旋转酶是属于哪一类（一类（1010分）分）7、多数生物的遗传物质是、多数生物的遗传物质是DNADNA，请问，请问DNADNA的复制方式有哪些（的复制方式有哪些（1010分）分）

简介：第1页共2页2014201520142015学年第一学期学年第一学期分子生物学分子生物学B转录与翻译测验题学号专业班级姓名一、名词解释（每小题一、名词解释（每小题3分，共分，共30分）分）1、转录2、启动子3、密码子的简并性4、多核糖体循环5、增强子6、多顺反子MRNA7、HNRNA8、SD序列9、分子伴侣10、终止子第2页共2页二、问答题（二、问答题（70分）分）1、试列出TRNA分子上与多肽合成有关的位点。（10分）2、试述RNA分类，各类RNA的结构特点及其在蛋白质合成中的作用。（10分）3、真核生物蛋白质合成后的运输是怎样进行的（10分）4、原核和真核细胞在蛋白质翻译过程有哪些不同之处（20分）5、真核生物三种RNA聚合酶的启动子的结构各有何特点（10分）6、说明原核生物RNA合成的终止机制。（10分）

简介：临床分子生物学检验技术试题及答案临床分子生物学检验技术试题及答案1、分子生物学检验技术是以核酸或蛋白质为分析材料，通过分析基因的结构、表达的变化和由此而导致的基因功能的改变，为疾病的研究和诊断提供更准确、更科学的信息和依据的一门学科。2、请说明分子生物学检验技术在临床试验诊断中的应用。（1）感染性微生物的检测。如用PCR技术进行甲型肝炎病毒的检测、乙型肝炎病毒的检测和解脲脲原体的检测等。（2）基因突变的检测。如用PCR一限制性片段长度多态性（RFLP技术检测地中海贫血基因突变。（3）法医学检测。如用PCR微卫星检测技术进行亲子关系的鉴定和个体识别。（4）基因异常表达的检测。如用CDNA表达的芯片技术进行基因异常表达的检测。（5）基因定位。如用原位杂交技术进行组织与细胞中基因表达的定位。3、基因组是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质。4、基因是基因组中一个功能单位，是贮存有功能的蛋白质多肽链信息或RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。5、原核生物是细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋双链RNA和单链RNA；有环状分子，也有线性分子。但无论是哪种核酸类型，一种病毒颗粒中核酸成分只能为一种，或DNA，或RNA。（3）基因组中有基因重叠现象，这种结构的意义在于使较小的基因组能携带较多的遗传信息。（4）基因组中具有操纵子结构。（5）病毒基因可连续也可间断。（6）基因组中重复序列少。（7）基因组中非编码区少。（8）病毒基因组是单倍体。（9）病毒基因组核酸序列中功能相关的蛋白质基因往往丛集在基因组的一个或几个特定部位，形成一个功能单位或转录单元。（10）病毒基因组含有不规则的结构基因。11、真核生物基因组的结构特点（1真核生物基本上不存在操纵子结构，一个结构基因转录生成一条MRNA，即MRNA是单顺反子，许多蛋白是由相同或不同的亚基构成，因此涉及多个基因的协调表达。（2）基因组中非编码的区域多于编码区域，并且，编码蛋白质的基因一般是不连续的断裂基因，即有外显子和内含子，在转录后经剪切成成熟MRNA后，才能翻译成蛋白质。（3）基因组DNA有重度、中度和低度三种重复序列。（4）

简介：分子生物学实验室安全及常用仪器介绍,授课方旅平联系方式2186772（O）；13950188980,内容介绍,,分子生物学实验安全常识11分子生物学实验室的基本要求12实验室电、气、水、火13化学试剂的安全使用14微生物的危害及处理15放射性物质的安全使用16紫外线辐射的危害及防护17废弃物的处理分子生物学功能实验室使用注意事项,分子生物学实验安全常识,11分子生物学实验室的基本要求,遵守公共平台管理办法遵守公共平台通行证管理办法遵守公共平台安全管理制度遵守公共平台有偿使用管理办法遵守公共平台检查制度及违规处罚条例,,分子生物学实验安全常识,12实验室电、气、水、火,连线仪器连线必须使用带有接地的三根线的护套线，不可使用普通的塑料绞线。电话线可用普通的塑料绞线。严禁私拉乱扯。接地仪器应有良好的接地，提高仪器的稳定性及安全系数。维修仪器出现故障时，应切断电源，立即向实验室负责人报告。维修仪器时必须切断电源，方可拆机修理。墙电不得私自对墙电进行维修、改造，该工作由实验室负责人进行计划，由相关专业人员进行维修、改造。检查如遇线路老化或损坏应及时地更换。触电断电或绝缘脱离急救电灯进入实验室，有需要时打开电源开关、排气扇；离开实验室时若无人请关闭电灯及排气扇。空调进入实验室，有需要时可打开空调，温度不得低于27℃；每天下班时实验室负责人将关闭空调。若在非上班时间内打开空调，离开时请关闭,电,,,危险,节约,,分子生物学实验安全常识,12实验室电、气、水、火,气,搬运搬运或转动钢瓶时，不得用手执着开关阀移动。使用按气瓶的类别选用减压器，安装时螺扣应拧紧，并检漏。开启钢瓶逆时针方向为开；先开总阀，后开减压阀。关闭钢瓶顺时针方向为关；先关总阀，后关减压阀。气嘴保护用死扳手夹紧气嘴后再开总阀。安全气瓶内的气体不可用尽。惰性气体应剩余005MPA以上压力的气体。可燃气体应剩余02MPA以上压力的气体。氢气应剩余20MPA以上压力的气体。存放分类分处存放直立放置时要稳妥；气瓶要远离热源；避免曝晒和强烈振动；一般实验室内存放气瓶量不得超过两瓶。氢气瓶和氧气瓶不能同存一处。,,分子生物学实验安全常识,12实验室电、气、水、火,水,上水水龙头或水管漏水时，应及时向实验室负责人报告，以便及时维修。下水水池内不得倒入培养基、琼脂糖胶等凝胶物质；清洗废液缸时请注意将其中的固体物质倒入到垃圾桶后才能冲洗，特别是TIP和EPPENDORF管。下水道排水不畅时，应及时向实验室负责人报告，以便及时疏通。冷却水输水管必须使用橡胶管，不得使用乳胶管；上水管与水龙头的连接处及上水管、下水管与仪器或冷凝管的连接处必须用管箍夹紧；下水管必须插入水池的下水管中。纯净水应按照“操作规程”进行操作；取水时应注意及时地关闭取水开关，防止溢流。,分子生物学实验安全常识,12实验室电、气、水、火,火,报警119（说明火源、火情、单位名称、地理位置，或明显标志）措施早发现、早处理、早报告灭火学会使用灭火器（一拔、二握、三瞄、四扫）沉着、冷静易燃固体、易燃气体、易燃液体和带电物体着火时，可用干粉灭火器灭火；导线或电器着火时，应先断电，再用干粉灭火器灭火。切不可用泡沫灭火器，此灭火器导电。衣服着火时，应尽快地脱掉衣服，并用水灭火。或就地滚动，切忌外跑。防火火灾不能预期、不能杜绝、只能预防消除火灾隐患（电、火、气、试剂）备逃生四件宝（灭火器、绳、手电筒、防毒面具）,分子生物学实验安全常识,13化学试剂的安全使用,标识自配试剂应贴标签，并注明化合物名称、浓度、配制日期，以及配制人姓名。,总原则药品状态定口径，瓶塞取决酸碱性；受热见光易分解，存放低温棕色瓶；特殊试剂特殊放，互不反应要记清。,分子生物学实验安全常识,13化学试剂的安全使用,易燃易爆化学试剂一般将闪点在25℃以下的化学试剂列入易燃化学试剂，它们多是极易挥发的液体，遇明火即可燃烧。有毒化学试剂以较小剂量进入人体而导致疾病或死亡的才被划为有毒物质。腐蚀性化学试剂化学试剂碰到皮肤、粘膜、眼、呼吸器官都有及时清洗，如各种酸和碱、溴、苯酚等。强氧化性化学试剂包括过氧化物和含有强氧化能力的含氧酸及其盐，如硝酸铵、高氯酸及其盐、重铬酸及其盐等。放射性化学试剂同位素示踪技术的发展，广泛应用于生物化学与分子生物学。由于其特殊性，该种试剂不得带入公共实验室，在各自实验室进行专项管理或者由学院进行统一管理。不相容化学试剂一些化学试剂在储存和操作过程中不能与其他物质接触，否则就发生爆炸，这些化学试剂称为不相容化学试剂。如叠氮化物通常用作溶液中的抗菌剂，由于轻微碰撞就可能造成叠氮化铜的爆炸，因此不能与铜接触（如污水管及管道设施）。,分子生物学实验安全常识,13化学试剂的安全使用,EB,EB是一种强诱变剂（可能造成遗传性危害），直接接触有中等毒性。EB可以通过皮肤吸收，因此应当避免一切与EB的直接接触。EB对皮肤，眼睛，口腔和上呼吸道系统有刺激性作用。应将EB安全密封，并密闭存放于干燥避光处。,提取组织和细胞RNA的一种重要试剂，在提取RNA时一定要在通风橱进行。如皮肤接触TRIZOL，请立即用大量去垢剂和水冲洗，废液埋入地下。,TRIZOL,分子生物学实验安全常识,13化学试剂的安全使用,RNA酶的强抑制剂，一种潜在的致癌物质。操作时戴口罩，在通风橱中进行。沾到手上立即冲洗，废液通过废液道排泄。,DEPCDIETHYLPROCARBONATE二乙基焦碳酸酯,常用于DNA和RNA提取，对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有强烈的刺激作用和腐蚀性，易损害肝和肾。操作时戴手套在通风橱里进行，废液收集后埋入地下。,CHCL3（CHLOROFORM，氯仿）,ACRYLAMIDE（丙烯酰胺）,DNA测序、SSR及蛋白质分离等技术中作电泳支持物，具神经毒性，聚合后毒性消失。操作时戴手套在通风橱内进行，聚合后的聚丙烯酰胺凝胶没有毒性，可随普通垃圾一起扔掉，千万不要倒入下水道。,分子生物学实验安全常识,13化学试剂的安全使用,DMSO（二甲亚砜）,是一种既溶于水又溶于有机溶剂的非质子极性溶剂，常用作细胞的冻存液和配制AS。皮肤沾上之后用大量的水洗及15稀氨水洗涤。,有毒，易损害眼睛。质粒提取时作裂解液破坏细胞膜和SOUTHERN杂交时的洗膜液中的去垢剂。戴合适的手套和安全护目镜，不要吸入其粉末。,十二烷基硫酸钠SDS,强神经毒性，防止误吸，操作时快速，存放时密封。,TEMED,分子生物学实验安全常识,13化学试剂的安全使用,很强的还原剂，散发难闻的气味。可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。当使用固体或高浓度储存液时，戴手套和护目镜，在通风橱中操作。,DTT二硫苏糖醇,一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂。它对呼吸道黏膜、眼睛和皮肤有非常大的破坏性。可因吸入、咽下或皮肤吸收而致命。戴合适的手套和安全眼镜，始终在化学通风橱里使用。在接触到的情况下，要立即用大量的水冲洗眼睛或皮肤，已污染的工作服作为有害废物处理。,PMSF苯甲基磺酰氟,引起严重的眼睛刺激和灼伤。可因吸入、咽下或皮肤吸收而受害。戴合适的手套和护目镜。,TRITONX100,分子生物学实验安全常识,13化学试剂的安全使用,对黏膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性。吸入可致命。操作时戴合适的手套、安全眼镜和防护服。始终在通风橱里操作，操作完后彻底洗手。,过硫酸铵NH42S2O8,毒性非常大。它阻断细胞色素电子运送系统。含有叠氮钠的溶液要标记清楚。可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。戴合适的手套和安全护目镜，操作时要格外小心。,叠氮钠（NAN3）,染料咽下可致命或引起眼睛失明，通过吸入和皮肤吸收是有毒的。其可能的危险是不可逆的效应。戴合适的手套和安全护目镜。在化学通风橱里操作，不要吸入其粉末。,吉姆萨（GIEMSA）,分子生物学实验安全常识,14微生物的危害及处理,,生物安全,,重点任务实验室感染的控制、实验室对周围环境影响的控制以及实验室和感染性实验材料的管理控制。,分子生物学实验安全常识,14微生物的危害及处理,动物病原微生物分类名录（2005年农业部令第53号）,第三类多种动物共患病病原微生物低致病性流感病毒、伪狂犬病病毒、破伤风梭菌、气肿疽梭菌、结核分支杆菌、副结核分支杆菌、致病性大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、致病性链球菌、李氏杆菌、产气荚膜梭菌、嗜水气单胞菌、肉毒梭状芽孢杆菌、腐败梭菌和其他致病性梭菌、鹦鹉热衣原体、放线菌、钩端螺旋体。水生动物病病原微生物流行性造血器官坏死病毒、传染性造血器官坏死病毒、马苏大麻哈鱼病毒、病毒性出血性败血症病毒、锦鲤疱疹病毒、斑点叉尾鮰病毒、病毒性脑病和视网膜病毒、传染性胰脏坏死病毒、真鲷虹彩病毒、白鲟虹彩病毒、中肠腺坏死杆状病毒、传染性皮下和造血器官坏死病毒、核多角体杆状病毒、虾产卵死亡综合症病毒、鳖鳃腺炎病毒、TAURA综合症病毒、对虾白斑综合症病毒、黄头病病毒、草鱼出血病毒、鲤春病毒血症病毒、鲍球形病毒、鲑鱼传染性贫血病毒。,分子生物学实验安全常识,14微生物的危害及处理,高致病性动物病原微生物是指来源于动物的、动物病原微生物分类名录中规定的第一类、第二类病原微生物。,第三类病原微生物是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。,采用遗传工程技术人为设计出更多带有新型遗传物质的生物，既涉及到有生命活性的载体自身对实验室人员的生物安全，还存在大量投放于环境后的生物污染问题此类问题造成的影响更是深远而不易觉察。当考虑要构建或使用遗传修饰生物时，对实验室工作的危害度评估可能比从事遗传学正常生物（未修饰）工作的危害度评估更为重要，不能仅凭经验或未经验证的文献来评估此类生物的潜在危害。例如构建转基因动物常用的逆转录病毒载体，重组将外源基因转入体内的同时，伴随有致病性增强的过程。必须经过验证明确所必需的生物安全级别，并对供体生物的特性、将要转移的核酸序列的性质、受体生物的特性以及环境特性做一综合评估，才能确定遗传修饰生物体所要求的生物安全水平，并做到安全操作目标基因。,14微生物的危害及处理,分子生物学实验安全常识,重组核酸技术和生物安全,生物表达系统由符合一系列标准并可安全使用的载体和宿主细胞组成。如果所要插入的外源基因序列不要求更高级别的生物安全水平，大部分常规遗传工程实验可以按BSL1安全操作大肠杆菌工程菌。用于基因治疗和有效转移基因到组织培养细胞的病毒载体，大多是复制缺陷型的，但操作时应采用与构建这些载体时的亲本病毒相同的生物安全水平。携带外源性遗传信息的动物（转基因动物）应当在靶基因编码产物特性的防护水平下进行操作，定点缺失特性基因的动物（基因敲除动物）一般不表现特殊的生物危害。基因产物是否具有潜在的药理学活性是必须考虑的一项重要因素。比如，克隆、表达编码毒素的基因就需要较高的生物安全水平，因为当采用病毒载体过量表达这些毒素蛋白时有可能产生难以预料的后果。危害度评估一种动态过程，必须密切跟踪该生物因子研究的最新进展，一旦获得载体/宿主的新信息时，需要随时将相关工作归入更高或更低的生物安全水平。,14微生物的危害及处理,分子生物学实验安全常识,重组核酸技术和生物安全,放射性药品使用后残留和剩余部分被称为放射性废物。放射性废物处理不当会造成环境的放射性污染,影响工作人员和周围居民的健康。固体废物的处理主要采用放置法，被放射性药物污染的固体废物应存在固定的指定地点并采用适当的屏蔽物加以防护,待其自然衰变后,当作非放射性废物处理即可。如为过期的发生器吸附柱应标明日期并用塑料袋包装后置于贮源室,待其自然衰变后再处理。,分子生物学实验安全常识,15放射性物质的安全使用使用同位素，防护先行,基本任务和目的按照辐射防护的三项基本原则，即辐射事业的正当化、防护水平的最优化和个人剂量的限额化。,液体废物的处理应根据放射性物质的最大容许浓度、化学性质、放射性强度、废液的容积以及下水道的排水设备等情况进行不同的处理。一般采用放置法,半衰期短的也可用稀释法达到容许排放水平。放射性强度低的废水也可直接排入下水道,但其放射性浓度不得超过露天水源中限制尝试的100倍。不能直接排入下水道的放射性废液,可采用衰变池贮存十个半衰后排入下水道。注意未经固化处理的放射性废液和浓缩物以及尚未选定最终处置方案的固化体等放射性废物，都应在固定地点贮存在专用的容器中，贮存过程中注意安全，不能使反射性废物泄漏。不同的比活度的废物要求使用不同的贮罐。放射性废物的转运放射性废物转运的关键是废物的包装容器，事先要做好安全检验，对容器的强度、屏蔽防护、密封系统、包装的标志等都有严格的规定。要求做到安全运输，防止发生火灾、容器颠覆及包装破损而使放射性废物泄漏，污染环境。,分子生物学实验安全常识,15放射性物质的安全使用,分子生物学实验安全常识,,16紫外线辐射的危害和防护,紫外辐射是指波长范围在100NM400NM的光辐射，一般把100NM280NM称作UVC，把280NM315NM称作UVB，把315NM400NM称作UVA。其中我们观察胶体用的最多的就是280NM315NM的紫外线。紫外线的有害效应主要是由于紫外线对脱氧核糖核酸（DNA）的作用造成的。最有害的效应是细胞致死，其它的效应则包括致突、致癌、干扰DNA、核糖核酸（RNA）和蛋白质的合成、细胞分裂的延迟、以及在通透性和能动性上的变化等。1紫外光对眼睛的损伤白内障被认为过量紫外光辐射的主要原因，经紫外光照射后，射线大部分被角膜上皮细胞核蛋白吸收，导致细胞核膨胀，碎裂和细胞死亡，以至损伤眼角膜和晶状体，导致浑浊。总的说来，紫外光辐射增加，人类的白内障患者增加。,分子生物学实验安全常识,,16紫外线辐射的危害和防护,2、紫外光对人皮肤的损伤紫外光的影响有积累作用，它的主要机理蛋白质受紫外光照射后，形成光解产物，此外，其溶解度和粘度，对热变性的敏感性及荧光等物理化学和光学性质均有显著的改变。紫外光对皮肤的作用分为急性作用和慢性作用。急性作用表现为红斑效应其症状为水肿脱皮，全身症状有寒战，发烧，恶心，罕见循环衰竭。慢性作用如致皮肤老化，色素沉着，加速老化，甚至引起肿瘤。轻者皮肤出现水肿性红斑，重者会出现水疱或大疱，还可伴有休克，发热，畏寒，恶心，心悸和头昏等症状。3、紫外光对其他部位的损伤紫外光辐射对免疫系统的影响，免疫系统的一些成分存在于皮肤中，皮肤暴露在紫外光下，使得免疫系统受紫外光辐射，使其功能受到干扰。研究表明，紫外光辐射的免疫抑制作用可导致皮肤癌，同时引起一些传染病和其他一些疾病。,分子生物学实验安全常识,16紫外线辐射的危害和防护,在实验室里常用的紫外光源包括手提式紫外灯和紫外透射仪、凝胶成像系统。只能通过吸收有害波长的滤片或安全玻璃片才能观察。在紫外光下操作时要戴合适的预防性手套。应佩戴具有紫外线防护功能的护目镜和/或防护面罩，并遮蔽暴露的皮肤。建议使用荧光染料，切胶在DARKREADER上操作。DARKREADER荧光透射仪TRANSILLUMINATORS的特点1DARKREADER使用新的无毒DNA染料SYBRGREEN,SYBRGOLD等,避免了ETHIDIUMBROMIDEEB染料对人体的伤害。2DARKREADER使用可见光（400500NM）,没有UV（紫外线），将其对人体的伤害降低至零。同时，大大降低了对DNA样本的损伤，克隆DNA的效率将成百倍的提高。3灵敏度高，远远高于UV检测仪。4适用染料范围广；荧光素（FLUORESCEIN）,ATTOPHOS,GELSTAR,VISTRAGREEN,SYPROORANGE,REDSHIFTEDGFPVARIANTS等都可使用。对于RHODAMINES,ETHIDIUMBROMIDEEB等激发光大于500NM的染料亦可适用；可以广泛用于DNA、RNA以及蛋白质的检测。5DARKREADER同时提供琥珀色镜片的观察眼镜（AG16），供切割凝胶时使用。紫外照射消毒后由于空气中臭氧富集，不宜立即开始工作，应在停止紫外照射30MIN后开始工作，有条件的实验室，可安装无臭氧紫外灯。超净工作台中进行紫外照射消毒后，也应用强风进行吹扫后再进行工作，以免臭氧危害身体健康。,分子生物学实验安全常识,17废弃物的处理,含有EB的废弃物,分子生物学实验安全常识,17废弃物的处理,SIGMA公司ETHIDIUMBROMIDE/SYBR®GREENREPLACEMENTCARTRIDGES5REPLACEMENTCARTRIDGESFORDECONTAMINATIONOFSOLUTIONSCONTAININGETHIDIUMBROMIDEORSYBR®GREENBINDINGCAPACITYFORABOVEMENTIONEDFLUORESCENTSTAINS50MGPRICE约700RMB,QBIOGENE公司ETBRGREENBAG™DISPOSALTHEETBRGREENBAG™KITALLOWSRAPIDANDTROUBLEFREECONCENTRATIONOFETHIDIUMBROMIDEFROMLARGEVOLUMESOFSOLUTIONSINTOASMALL“TEABAG“WHICHISTHENCONVENIENTLYDISPOSEDALONGWITHOTHERSOLIDHAZARDOUSWASTESONEKITHASTHECAPACITYTOREMOVE500MGOFETHIDIUMBROMIDEFROMSOLUTIONS10MGETBR/BAGPRICE约1608RMB,含有EB的废弃物,分子生物学实验安全常识,17废弃物的处理,含有微生物的废弃物,大肠杆菌ESCHERICHIACOLI,ECOLI是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，主要寄生在大肠内。它侵入人体一些部位时，可引起感染，如腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等。人在感染大肠杆菌后的症状为胃痛、呕吐、腹泻和发热。感染可能是致命性的，尤其是对孩子及老人。该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。大肠杆菌废弃物应分类收集进行消毒、烧毁处理，对大肠杆菌废弃物处理有如下方法1固体废弃物固体含菌培养基及一次性使用废弃物如枪头、塑料管、手套、帽子、口罩等使用后放入专用垃圾袋内集中烧毁。可重复利用的玻璃器材如试管、玻瓶等或塑料制品，可以先用朗索消毒片溶液浸泡3片/1000ML水，浸泡3小时以上，然后清洗，再高压蒸汽灭菌后使用。2液体废弃物液体含菌培养物加朗索消毒片处理后5片/1000ML水，浸泡3小时以上，根据菌液浓度可酌情增加消毒片剂量或延长浸泡时间或者直接将菌液煮沸30MIN后方可倒入下水道，切勿直接将未处理含菌废液排入下水道。实验室大肠杆菌多为带抗性菌体，为防止实验室大肠杆菌实验废弃物随意排放对环境造成污染以及确保实验室工作人员安全，请各实验室积极配合，做好。,分子生物学实验安全常识,17废弃物的处理,移液器吸头使用过的移液器吸头应放入含有10次氯酸钠溶液的容器内浸泡，浸泡时间不宜少于24H。PCR产物含有PCR产物的所有液体及废弃物应放入含有1MOL/LHCL的容器中浸泡，浸泡时间不宜少于6H；采用PCRELISA方法检测时洗板机洗板所产生的废液应收集至1MOL/LHCL溶液中。阳性样品和质粒阳性质粒宜放入1MOL/LHCL溶液中浸泡，浸泡时间不宜少于6H。,分子生物学实验操作常见废弃物,分子生物学实验安全常识,2分子生物学功能实验室使用注意事项,414台面长期台面，每半年申请一次；短期台面，每月申请一次；公共台面，随时有空即可用。注意事项台面的卫生在每天的500PM检查，每个课题组申请的台面必须将台面整理整齐，每个台面各自的垃圾桶内的废液、废固已经带离414公共台面不设置垃圾桶，请各位使用公共台面的研究人员自带废液缸，实验结束后带离。公共台面实行抽检制度。若出现台面脏乱，按照公共平台检查制度及违规处罚条例进行处理。严重者将取消台面使用权。不得将耗材等物品随意放置在公共台面上，做完实验后请将各自物品带离公共台面。不得擅自开窗，进出实验室请随手关门。不得带手套触摸无污染区的所有物品。不得私自带无通行证人员进入实验室进行实验。无通行证不得进入实验室，大型仪器必须取得资格才能上机操作。必须遵守公共平台的各项管理规定，特别是有关实验室安全的管理规定。,THANKYOU,

简介：304512MOLECULARBIOLOGYANDRECOMBINANTDNATECHNOLOGY,MONTAROPYAMABHAI,SCHEDULETUE,TH10AM1PM,JULYTUE24THR26AUGUSTTUE7THR9,TOPIC,RECOMBINANTDNATECHNOLOGYJULY24,26BRIEFREVIEWOFMOLECULARBIOLOGYMOVIEHISTORYDNAANDPROTEINELECTROPHORESISDNASEQUENCINGPCRBASICBIOINFORMATICSGENETICENGINEERINGPLASMIDSVECTORDNALIBRARYSOUTHERNBLOTANALYSISPCRCLONINGMUTAGENESISTHESTUDYOFGENEEXPRESSIONSAUGUST7NORTHERN/WESTERNBLOTANALYSISMICROARRAYREPORTERFUSIONPROTEINS/IMMUNOLOCALIZATIONTRANSGENICANIMALMODERNMETHODSINMOLECULARBIOLOGYAUGUST9PRODUCTIONOFRECOMBINANTPROTEINSMOLECULAREVOLUTIONRNAITECHNOLOGYREALTIMEPCR,READING,MOLECULARCLONINGALABORATORYMANUALSAMBROOKC1999CELLANDMOLECULARBIOLOGYCONCEPTSANDEXPERIMENTS,5THEDITIONGERALDKARP,FORMERLYOFTHEUNIVOFFLORIDA,GAINESVILLEISBN9780470042175,©2008,864PAGES,EVALUATION,ASSIGNMENTS50SELECTACOMPANYTHATSALEANYBIOTECHPRODUCTSTHATYOULIKETHEN,WRITEA“PRODUCTREVIEW”DESCRIBINGTHISPRODUCTINASMUCHDETAILASPOSSIBLEBUTNOMORETHANONEA4PAGEEXAM50CLOSEBOOK,3HRS,RECOMBINANTDNATECHNOLOGY,BRIEFREVIEWOFMOLECULARBIOLOGYMOVIEDNAANDPROTEINELECTROPHORESISDNASEQUENCINGPCRBASICBIOINFORMATICSGENETICENGINEERINGPLASMIDSVECTORPCRCLONINGDNALIBRARYSOUTHERNBLOTANALYSISSITEDIRECTEDMUTAGENESIS,REVIEW,2006CRAIGCMELLOANDANDREWFIRESRECEIVEDANOBLEPRIZEFORRNAI,DNAANDPROTEINELECTROPHORESIS,AGAROSEGELELECTROPHORESISPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISPAGEHTTP//GSLCGENETICSUTAHEDU/,GELELECTROPHORESIS,DNASEQUENCING,DIDEOXYMETHODAUTOMATEDDNASEQUENCING,,PCR,,BIOINFORMATICS,WHATISBIOINFORMATICSUSEFULWEBSITESTOOLSBIOLOGICALDATABASESSEQUENCEALIGNMENTSTRUCTURALBIOINFORMATICSMOLECULARPHYLOGENETICSGENOMICS/PROTEOMICS,WHATISBIOINFORMATICS,INTERDISCIPLINARYSUBJECTINVOLVINGCOMPUTERANDBIOLOGICALSCIENCES,THESCIENCEOFINFORMATICSASAPPLIEDTOBIOLOGICALRESEARCHINFORMATICSISTHEMANAGEMENTANDANALYSISOFDATAUSINGADVANCEDCOMPUTINGTECHNIQUESBIOINFORMATICSISPARTICULARLYIMPORTANTASANADJUNCTTOGENOMICSRESEARCH,BECAUSEOFTHELARGEAMOUNTOFCOMPLEXDATATHISRESEARCHGENERATESWWWFOODGOVUK/SCIENCE/OURADVISORS/TOXICITY/COTMEETS/49737/49750/49831THECOLLECTION,ORGANIZATIONANDANALYSISOFLARGEAMOUNTSOFBIOLOGICALDATA,USINGNETWORKSOFCOMPUTERSANDDATABASESWWWABCNETAU/SCIENCE/SLAB/GENOME2001/GLOSSARYHTMTHEPROCESSOFDEVELOPINGTOOLSANDPROCESSESTOQUANTIFYANDCOLLECTDATATOSTUDYBIOLOGICALSYSTEMSLOGICALLYWWWALSNET/ALS101/GLOSSARYASPTHEASSEMBLYOFDATAFROMGENOMICANALYSISINTOACCESSIBLEFORMSITINVOLVESTHEAPPLICATIONOFINFORMATIONTECHNOLOGYTOANALYZEANDMANAGELARGEDATASETSRESULTINGFROMGENESEQUENCINGORRELATEDTECHNIQUESWWWDOYLEFOUNDATIONORG/ICSU/GLOSSARYHTMTHEUSEOFCOMPUTERSINSOLVINGINFORMATIONPROBLEMSINTHELIFESCIENCESITMAINLYINVOLVESTHECREATIONOFEXTENSIVEELECTRONICDATABASESONGENOMES,PROTEINSEQUENCESETCALSOINVOLVESTECHNIQUESSUCHASTHREEDIMENSIONALMODELLINGOFBIOMOLECULESANDBIOLOGICALSYSTEMSWWWUNIVERSITYSCIENCEIE/PAGES/GLOSSARYPHPTHEUSEOFCOMPUTERSTOHANDLEBIOLOGICALINFORMATIONTHETERMISOFTENUSEDTODESCRIBECOMPUTATIONALMOLECULARBIOLOGY–THEUSEOFCOMPUTERSTOSTORE,SEARCHANDCHARACTERIZETHEGENETICCODEOFGENES,THEPROTEINSLINKEDTOEACHGENEANDTHEIRASSOCIATEDFUNCTIONSWWWSYNGENTACOM/EN/ABOUT_SYNGENTA/RESEARCH_TECH_GLOSSASPXABROADTERMTODESCRIBEAPPLICATIONSOFCOMPUTERTECHNOLOGYANDINFORMATIONSCIENCETOORGANIZE,INTERPRET,ANDPREDICTBIOLOGICALSTRUCTUREANDFUNCTIONBIOINFORMATICSISUSUSALLYAPPLIEDINTHECONTEXTOFANALYZINGDNASEQUENCEDATABIOMAGNIFICATIONAPROBLEMASSOCIATEDWITHTHEINTRODUCTIONOFXENOBIOTICCOMPOUNDSINTOTHEBIOSPHEREINWHICHTHECONCENTRATIONOFTHECOMPOUNDINCREASESASITPASSESUPTHEFOODCHAINWWWPLPAAGRIUMNEDU/SCAG1500/DEFINITIONSHTMLTHEFIELDOFSCIENCEINWHICHBIOLOGY,COMPUTERSCIENCE,ANDINFORMATIONTECHNOLOGYMERGEINTOASINGLEDISCIPLINEWWWEPAGOV/COMPTOX/GLOSSARYHTMLTHEFIELDOFBIOLOGYSPECIALIZINGINDEVELOPINGHARDWAREANDSOFTWARETOSTOREANDANALYZETHEHUGEAMOUNTSOFDATABEINGGENERATEDBYLIFESCIENTISTSWWWNIGMSNIHGOV/NEWS/SCIENCE_ED/GENETICS/GLOSSARYHTMLINFORMATIONABOUTHUMANANDOTHERANIMALGENESANDRELATEDBIOLOGICALSTRUCTURESANDPROCESSESPHARMACYUCSFEDU/GLOSSARY/I/ISRESEARCH,DEVELOPMENTORAPPLICATIONOFMATHEMATICALTOOLSANDAPPROACHESFOREXPANDINGTHEUSEOFBIOLOGICAL,MEDICAL,BEHAVIORALORHEALTHDATATHISINCLUDESMETHODSTOACQUIRE,STORE,ORGANIZE,ARCHIVE,ANALYZEORVISUALIZEDATAWWWMAYOUMINNESOTAPARTNERSHIPORG/GLOSSARYHTMLTHEUSEOFCOMPUTERSTOCOLLECT,ANALYZEANDSTOREGENOMICSINFORMATIONPBIIBPNRCCNRCGCCA/EN/MEDIA/GLOSSARYHTMTHEUSEOFCOMPUTERS,LABORATORYROBOTSANDSOFTWARETOCREATE,MANAGEANDINTERPRETMASSIVESETSOFCOMPLEXBIOLOGICALDATAWWWMEDUMICHEDU/GENETICS/GLOSSARY/THECOLLECTIONANDSTORAGEOFINFORMATIONABOUTGENOMICSINDATABASESWWWPUBACZA/RESOURCES/GLOSSARYHTMLTHEMANAGEMENTANDANALYSISOFDATAFROMBIOLOGICALRESEARCHWWWBIOTECHCA/EN/GLOSSARYHTMLDESCRIPTIONASCIENTIFICDISCIPLINETHATCOMPRISESALLASPECTSOFTHEGATHERING,STORING,HANDLING,ANALYSING,INTERPRETINGANDSPREADINGOFBIOLOGICALINFORMATIONINVOLVESPOWERFULCOMPUTERSANDINNOVATIVEPROGRAMMESWHICHHANDLEVASTAMOUNTSOFCODINGINFORMATIONONGENESANDPROTEINSFROMGENOMICSPROGRAMMESEUROPAEUINT/COMM/RESEARCH/BIOSOCIETY/LIBRARY/GLOSSARYLIST_ENCFMTHEDISCIPLINEOFOBTAININGINFORMATIONABOUTGENOMICORPROTEINSEQUENCEDATATHISMAYINVOLVESIMILARITYSEARCHESOFDATABASES,COMPARINGYOURUNIDENTIFIEDSEQUENCETOTHESEQUENCESINADATABASE,ORMAKINGPREDICTIONSABOUTTHESEQUENCEBASEDONCURRENTKNOWLEDGEOFSIMILARSEQUENCESDATABASESAREFREQUENTLYMADEPUBLICALLYAVAILABLETHROUGHTHEINTERNET,ORLOCALLYATYOURINSTITUTIONBIOINFOCNIOES/DOCUS/COURSES/SEK2003FILOGENIAS/SEQ_ANALYSIS/GLOSSARYHTMLANINTERDISCIPLINARYAREAATTHEINTERSECTIONOFBIOLOGICAL,COMPUTER,ANDINFORMATIONSCIENCESNECESSARYTOMANAGE,PROCESS,ANDUNDERSTANDLARGEAMOUNTSOFDATA,FORINSTANCEFROMTHESEQUENCINGOFTHEHUMANGENOME,ORFROMLARGEDATABASESCONTAININGINFORMATIONABOUTPLANTSANDANIMALSFORUSEINDISCOVERINGANDDEVELOPINGNEWDRUGSWWWISYEGATECHEDU/TG/PUBLICATIONS/ECOLOGY/EOLSS/NODE2HTMLTHEUSEOFCOMPUTERSINBIOLOGICALRESEARCHWWWEPIDAUROSCOM/CMS/EN/PHARMACOGENETICS/GLOSSARYHTMLUSEOFCOMPUTERSINTHEACQUISITIONANDANALYSISOFINFORMATIONRELATINGTOGENES,PROTEINSANDTHEIRSTRUCTURES,BIOLOGICALPATHWAYSANDDRUGSWWWSERENEXCOM/PAGE87THEORGANISATIONANDUSEOFINFORMATIONONBIOLOGICALANDMOLECULARSUBJECTSTHISINCLUDESORGANISINGBIOMOLECULARDATABASES,MANAGINGTHEQUALITYOFDATAINPUT,GETTINGUSEFULINFORMATIONOUTOFSUCHDATABASES,ANDINTEGRATINGINFORMATIONFROMDISPARATESOURCESONEAPPLICATIONOFBIOINFORMATICSISTOBRINGTOGETHERGENESEQUENCEDATEDWITHTHATABOUTTHEPHYSIOLOGICALFUNCTIONSOFTHEPROTEINSWHOSEPRODUCTIONTHEYSIMULATEWWWBIOTECHNOLOGYVICGOVAU/INFO/GLOSSARYASPTHEUSEOFCOMPUTERSANDINFORMATIONTECHNOLOGYTOSTOREANDANALYZENUCLEOTIDEANDAMINOACIDSEQUENCESANDRELATEDINFORMATIONWWWOUPCOM/UK/BOOKSITES/CONTENT/0199264724/STUDENT/GLOSSARYHTMACOLLECTIVETERMTHATDESIGNATESTHEUSEOFCOMPUTERSANDSPECIALIZEDSOFTWARETOANALYZEANDRETRIEVEDATAFROMGENOMICANDSCIENTIFICDATABASESWWWPAINCEPTORCOM/PAGEASPTHESTUDYOFCOLLECTING,SORTING,ANDANALYZINGDNAANDPROTEINSEQUENCEINFORMATIONUSINGCOMPUTERSANDSTATISTICALTECHNIQUESWWWBSCSORG/ONCO/GLOSSARYHTMTHESCIENCEOFMANAGINGANDANALYZINGBIOLOGICALDATAUSINGADVANCEDCOMPUTINGTECHNIQUESWWWPATIENTSHELPINGDOCTORSORG/PHD/DEFINITIONSBIOINFORMATICSORCOMPUTATIONALBIOLOGYISTHEUSEOFTECHNIQUESFROMAPPLIEDMATHEMATICS,INFORMATICS,STATISTICS,ANDCOMPUTERSCIENCETOSOLVEBIOLOGICALPROBLEMSRESEARCHINCOMPUTATIONALBIOLOGYOFTENOVERLAPSWITHSYSTEMSBIOLOGYMAJORRESEARCHEFFORTSINTHEFIELDINCLUDESEQUENCEALIGNMENT,GENEFINDING,GENOMEASSEMBLY,PROTEINSTRUCTUREALIGNMENT,PROTEINSTRUCTUREPREDICTION,PREDICTIONOFGENEEXPRESSIONANDPROTEINPROTEININTERACTIONS,ANDTHEMODELINGOFEVOLUTIONENWIKIPEDIAORG/WIKI/BIOINFORMATICS,USEFULSERVERWEBSITES,USANCBIHTTP//WWWNCBINLMNIHGOV/EUROPEEBIHTTP//WWWEBIACUK/GOOGLESEARCHWWWGOOGLECOM,TOOLS,BIOINFORMATICSOFTWAREBUYFROMCOMPANYFREEWEBBASEDSOFTWAREDNASEQUENCEANALYSISPRIMERDESIGNDNATRANSLATIONTOOLSSTRUCTUREPREDICTIONRESTRICTIONSITEANALYSISSEQUENCEALIGNMENTSETC,BIOLOGICALDATABASES,PRIMARYDATABASESECONDARYDATABASESPECIALIZEDDATABASE,PRIMARYDATABASE,RAWNUCLEICACIDSEQUENCEGENBANKEMBLDDBJUSEDIFFERENTFORMATTOPRESENTDATATHESEDATABASESARECLOSELYCONNECTEDANDEXCHANGEDDATADAILY3DSTRUCTUREPDBPROTEINANDNUCLEICACIDSTRUCTUREATOMICCOORDINATESFROMXRAYANDNMR,SECONDARYDATABASE,COMPUTATIONALPROCESSEDINFORMATIONPROVIDESEQUENCEANNOTATIONSWISSPROTTREMBLTRANSLATEDNUCLEICACIDSEQUENCEFROMEMBLOTHERUNIPORT,PFAM,BLOCKS,DALI,SPECIALIZEDDATABASE,FOCUSONPARTICULARORGANISMSFLYBASEWORMBASEACEDB,TAIRFOCUSONFUNCTIONALANALYSISGENBANKESTMICROARRAYGENEEXPRESSIONDATABASE,IMPORTANT,MANYDATABASEARECONNECTEDNCBIAREMOSTINTEGRATEDRELIABILITYTHEREAREMANYERRORSINTHEDATABASESEQUENCINGERRORESPECIALLYBEFORE1990SREDUNDANCYNONREDUNDANTDATABASEUNIGENECOALESCEEST,INFORMATIONRETRIEVAL,USEBOOLEANOPERATIONJOINASERIESOFKEYWORDSTEXTBASEDSEARCHPROVIDEACCESSTOMULTIPLEDATABASEFORRETRIEVALOFINTEGRATEDSEARCHRESULTENTREZNCBISRSSEQRETRIVALSYSTEMFROMEBI,SEQUENCEALIGNMENT,HEARTOFBIOINFORMATICANALYSISACONSEQUENEOFEVOLUTIONHELPTOIDENTIFYEVOLUTIONRELATIONSHIP,SEQUENCEHOMOLOGY≠SEQUENCESIMILARITY,SEQUENCEHOMOLOGYISA“QUANTITATIVETERMSHOWINGCOMMONEVOLUTIONORIGINSEQUENCESIMILARITYISA“QUANTITATIVETERM”CALCULATINGFROMSEQUENCEALIGNMENTSIMILARITYFROMSIMILARITYONECANCONCLUDETHATTHESEQUENCEISHOMOLOGORNONHOMOLOG,SEQUENCESIMILARITYCLUSTALW,CLUSTALXTCOFFEEPOAPRALINEPRRN,ETCEDITINGBIOEDITRASCAL,IMPORTANT,NOALIGNMENTPROGRAMISPERFECTCOMBINERESULTSFROMMULTIPLEPROGRAMTHEALIGNMENTSHOULDBEREFINEMANUALLYPROTEINSEQUENCEALIGNMENTISMOREACCURATEANDSHOULDBEALIGNEDFIRST,PREDICTIONOFGENEANDPROMOTER,VERYDIFFICULTPROKAROTICGENOMESAREMUCHEASIERTOPREDICTTHEGOODPROGRAMISBEINGDEVELOPEDGENEMARKGLIMMER,MOLECULARPHYLOGENETIC,EVOLUTION,DEVELOPMENTOFBIOLOGICALFORMFROMPREEXISTINGFORMTHROUGHNATURALSELECTIONANDMUTATIONPROTEINORDNASEQUENCEAREMOLECULARFOSSILS,,,NATURE392917920,1998,MAJORASSUMPTIONS,MOLECULARSEQUENCESUSEDINPHYLOGENETICCONSTRUCTIONAREHOMOLOGOUSEVOLUTIONARYTREEISALWAYSBINARYEACHPOSITIONINASEQUENCEEVOLVEINDEPENDENTLY,TYPESOFPHYLOGENETICTREES,STEPS,CHOOSINGMOLECULARMARKERSPERFORMINGMULTIPLESEQUENCEALIGNMENTCHOOSINGAMODELOFEVOLUTIONDETERMININGATREEBUILDINGMETHODASSESSINGTREERELIABILITY,SELECTIONOFMOLECULARMARKERS,FORCLOSELYRELATEDORGANISMSINDIVIDUALWITHINPOPULATIONS,DNASEQUENCEISUSED,ASITEVOLVESFASTFORMOREWIDELYDIVERGENTGROUPDIFFERENTSPECIESOFBACTERIA,FUNGIUSESLOWLYEVOLVINGSEQUENCESUCHASRIBOSOMALRNAORPROTEINFORGREATLYDIFFERENTORGANISMSBACTERIAA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简介：绪论,生物化学与分子生物学定义与其他学科关系发展简史实际应用,什么是生物化学,简单说，生物化学是生命的化学。生物化学是用化学的理论和方法作为主要手段，研究生物体的基本物质的结构（如CARBOHYDRATES,LIPIDS,PROTEINSANDNUCLEICACID、性质及其生命活动的变化规律（生命活动如生长、生殖、代谢、运动等）,是研究生物体的化学组成与性质（静态生化，STATICBIOCHEMISTRY，以及机体内所进行的化学变化DYNAMICBIOCHEMISTRY的科学。,分子生物学是研究核酸、蛋白质等所有生物大分子的形态、结构特征及其重要性、规律性和相互关系的科学。分子生物学MOLECULARBIOLOGY是生物化学的重要组成部分。,生物化学与分子生物学同有关学科的关系,生物化学与分子生物学是生物学的最深层次；生物化学与分子生物学是化学的最高层次；生物化学与分子生物学为农学、医学和食品科学提供理论依据和研究手段；物理学、信息科学和数学为生物化学与分子生物学提供研究手段。,与生物化学的关系最为密切,但存在一定的差别,分子生物学的三大原则,1构成生物大分子的单体是相同的共同的核酸语言共同的蛋白质语言,2生物遗传信息表达的中心法则相同,DNA,RNA,3生物大分子单体的排列（核苷酸、氨基酸）的不同,,不同的高级结构不同的生物大分子之间的互作,,不同的物种特性,,,准备和酝酿阶段时间19世纪后期到20世纪50年代初。两点重大突破确定了蛋白质是生命的主要基础物质；确定了生物遗传的物质基础是DNA。,现代分子生物学的建立和发展阶段,时间从50年代初到70年代初，1953年WATSON和CRICK的DNA双螺旋结构模型作为现代分子生物学诞生的里程碑。主要进展包括遗传信息传递中心法则的建立对蛋白质结构与功能的进一步认识,初步认识生命本质并开始改造生命的深入发展阶段,时间70年代后－至今基因工程技术作为新的里程碑，标志着人类深入认识生命本质并能动改造生命的新时期开始。,生物化学中的关键技术,电泳（1923）生物大分子的分离、分析超离心（1925）蛋白质、细胞亚器官的分离；分子量的确定同位素标记（1934）物质代谢途径、生物大分子结构测定层析（1944）生物大分子的分离纯化X光衍射、NMR生物大分子结构测定,超速离心（1920S）电泳（1930S）电镜（1930S）同位素示踪（1940S）柱层析（1940S）X射线衍射（1950S）氨基酸分析与测序（1950S）核酸杂交（1960S）核苷酸测序（1970S）重组DNA技术（1970S）DNA合成（1980S）单克隆抗体组织化学（1980S）聚合酶链式反应（1980S）,分子生物学常用技术,19012012111项生理医学诺贝尔奖中，69项（62）颁给了生物化学与分子生物学领域,发展历程,分子生物学中重大成就与突破者－－－NOBELPRIZE的获得者－－－构成了分子生物学发展的主要内容－－－里程碑,1910科赛尔KOSSEL（德）,蛋白质、细胞及细胞核化学的研究（首先分离到A、T和组氨酸）,1958莱德伯格LEDERBERG（美）噬菌体转导,比德尔BEADLE提出了碱基配对是核酸复制、遗传信息传递的基本方式；最后确定了核酸是遗传的物质基础；为认识核酸与蛋白质的关系及其在生命中的作用打下了最重要的基础。,,1962肯德鲁KENDREW＆佩鲁茨PERUTZ（英国）,KENDREW,PERUTZ,测定了肌红蛋白及血红蛋白的高级结构（三级）,成为研究生物大分子结构的先驱,1965雅各布JACOB＆莫诺MONOD（法国）,提出并证实了OPERON作为调节细菌细胞代谢的分子机制首次提出MRNA分子的存在,1969NIRENBERG（美）HOLLY＆KHORANA,尼伦伯格NIRENBERG,克拉纳KHORANA,霍利HOLLEY,破译了遗传密码,酵母PHETRNA的核苷酸序列并证明了所有TRNA三级结构的相似性,第一个合成了核酸分子，并人工复制了酵母基因,1975TEMIN，BALTIMORE美THISPHOTOGRAPHREQUIREDA24HOUREXPOSURETHEREALPOINTTHATTHISTECHNOLOGYALLOWSTHEINTRODUCTIONOFNEWTRAITSINTOPLANTSISNEVERTHELESSELEGANTLYMADE,烟草表达萤火虫荧光素基因,表达抗虫基因的西红柿,GLYPHOSATERESISTANTSOYBEANPLANTSTHEPHOTOGRAPHSSHOWTWOAREASOFASOYBEANFIELDINWISCONSINAWITHOUTGLYPHOSATETREATMENT,THISPARTOFTHEFIELDISOVERRUNWITHWEEDSBGLYPHOSATERESISTANTSOYBEANPLANTSTHRIVEINTHEGLYPHOSATETREATEDSECTIONOFTHEFIELDGLYPHOSATEBREAKSDOWNRAPIDLYINTHEENVIRONMENTAGRICULTURALUSEOFENGINEEREDPLANTSSUCHASTHESEPROCEEDSONLYAFTERCONSIDERABLEDELIBERATION,BALANCINGTHEEXTRAORDINARYPROMISEOFTHETECHNOLOGYWITHTHENEEDTOSELECTNEWTRAITSWITHCAREBOTHSCIENCEANDSOCIETYASAWHOLEHAVEASTAKEINENSURINGTHATTHEUSEOFTHERESULTANTPLANTSHASNOADVERSEIMPACTONTHEENVIRONMENTORONHUMANHEALTH,转草甘膦基因大豆,CLONINGINMICETHEGENEFORHUMANGROWTHHORMONEWASINTRODUCEDINTOTHEGENOMEOFTHEMOUSEONTHERIGHTEXPRESSIONOFTHEGENERESULTEDINTHEUNUSUALLYLARGESIZEOFTHISMOUSE,表达人生长激素的老鼠,喷洒工程菌清除石油污染,美国GE公司构造成功具有巨大烃类分解能力的工程菌，并获专利，用于清除石油污染。,生化与司法鉴定,司法鉴定是健全法制中的一个必需的工作环节，它包含了法律上要鉴定的一切事、屋和人。受伤与死亡现象中的生化ADNA含量随死亡时间而下降B心肌丁二酸脱氢酶、细胞色素氧化酶随死亡时间而上升C精子DNA,DNA指纹技术的应用,亲子鉴定（VNTR）,,亲子鉴定风行意大利（几十万）,现代家庭“情流感”,犯罪分析,血液、唾液、头发、精液和其他出现在犯罪现场的样品成为嫌疑犯被监禁或释放强有力的证据,误差率在百万分之一以下，结果非常精确。,,,,DNA身份证,,个人DNA基因身份证,第一章生物大分子的提取、沉淀和离心分离,第一节生物大分子的提取,蛋白质（包括酶），核酸，脂类，糖类等生物大分子的制备分四个阶段一选择材料和预处理二细胞的破碎及细胞组分的分离三提取和纯化四浓缩，干燥和保存,一选择材料及预处理动物，植物，微生物都可作为制备生物大分子的原材料，所选用的材料主要依据试验目的来确定。有效成份是指欲纯化的某种单一的生命大分子物质。而有效成分以外的其它物质则统称杂质。,1动物组织选材必须选择有效成分含量丰富且易分离的脏器组织为原材料。脱脂脏器中含量较高的脂肪，容易氧化酸败，导致原料变质影响纯度操作和制品的率。保存对预处理好的材料，若不立即进行实验，应冷冻保存。A冰冻剥去脂肪和筋皮等结缔组织，短期保存－10℃的冰箱内；长期保存－70℃低温冰箱内。B干燥对于像脑垂体一类小组织，可置丙酮液中脱水，干燥后磨粉储存备用；对于含耐高温有效成分（如肝素）的肠粘膜，可在沸水蒸煮处理，烘干后能长期保存。,2植物材料选材注意植物品种和生长发育状况不同，其中所含生物大分子的量变化很大，另外与季节性关系密切。A提取核DNA选用黄化苗（生长7－10天小麦，水稻），防止叶绿体DNA的干扰B提取RNA根据实验目的选用生长幼嫩组织为好。保存冷冻采样后尽快放于－4℃20℃冰箱内。DNA,RNA采样后，N2速冻，至－70℃冰箱。对RNA样，如不立即使用，冷冻保存尤为重要。,3微生物选材应注意它的生长期，在微生物的对数生长期，酶和核酸的含量较高，可以获得高产量，以微生物为材料时有两种情况A利用微生物菌体分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶等。一般用离心法收集上清液，上清液只能在低温下短期保存B利用菌体含有的生化物质，如蛋白质，核酸和胞内酶等。需破碎菌体细胞分离，湿菌体可低温短期保存，冻干粉可在4℃保存数月。3,二确定测定方法在效成分在原材料中含量较低，纯化是使其纯度增高的过程，因此，提取和分离的每个步骤均要测定有效成分的含量。测定方法要专一、准确、灵敏和简便。使用较多的测定方法有分光光度法、荧光分析法、生物活性如酶活力、激素活性测定、电泳分析等，有时可用电化学法和免疫分析法。,三细胞的破碎1机械破碎1研磨法剪碎的动物组织如鼠肝、兔肝等置研钵中，用研磨棒研碎。为了提高研磨效果，可加入一定量的石英砂。用匀浆器处理，也能破碎动物细胞。细菌和植物组织的细胞破碎均可用此法。,2组织捣碎器法用捣碎器转速800010000R/M处理3045S可将植物和动物细胞完全破碎。但是在捣碎期间必须保持低温，捣碎的时间不易太长，以防温度升高引起有效成分变性。现在多用细胞破碎仪。3超声波法借助声波的震动力破碎细胞壁和细胞器的有效方法。多用于微生物细胞的破碎，常采用间歇处理和降低温度的方法进行。,4压榨法是一种温和、彻底破碎细胞的方法。用30MPA左右的压力迫使几十毫升细胞悬液通过一个小孔＜细胞直径的孔，致使其被挤破、压碎。5冻融法将细胞置低温下冰冻一定时间，然后取出置室温下或40℃左右迅速融化。如此反复冻融多次，细胞可在形成冰粒和增高剩余胞液盐浓度的同时，发生溶胀、破碎。,2溶涨和自溶溶涨细胞膜为天然的半透膜，在低渗溶液如低浓度的稀盐溶液中，由于存在渗透压差，溶剂分子大量进入细胞，引起细胞膜发生胀破的现象称溶胀。例如红血球置清水中会迅速溶胀破裂并释放出血红素。自溶细胞结构在本身所具有的各种水解酶如蛋白酶和酯酶等作用下，发生溶解的现象称自溶。应用此法时要特别小心操作，因为水解酶不仅可使细胞壁、细胞膜破坏，同时也可将某些有效成分在自溶时分解。3化学处理用脂溶性的溶剂如丙酮、氯仿、甲苯或表面活性剂如十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠处理细胞时，可将细胞壁、细胞膜的结构部分溶解，进而使细胞释放出各种酶类或DNA等物质，并导致整个细胞破碎。,4生物酶降解生物酶如溶菌酶有降解细菌细胞壁的功能。在用此法处理细菌细胞时，先是细胞壁消解，随之而来的是因渗透压差引起的细胞膜破裂，最后导致细胞完全破碎。例如从某些细菌细胞提取质粒DNA时，不少方法都采用了加溶菌酶来自蛋清破坏细胞壁的步骤。当有些细菌对溶菌酶不敏感时，可加巯基乙醇（ME）或者8MOL/L的尿素，以促进细胞壁的消化。另外，也可加入蛋白酶K来提高破壁效果。,四抽提1抽提的含义抽提通常是指用适当的溶剂和方法从原材料中把有效成分分离出来的过程。经过处理的原材料中的有效成分可用缓冲液、稀酸、稀碱、或有机溶剂（如丙酮、乙醇）等抽提，有时还可用蒸馏水抽提。一般理想的抽提液应具备下述条件对有效成分溶解度大，破坏作用小；对杂质不溶解或溶解度很小；来源广泛、价格低廉、操作安全等。,2抽提的影响因子在抽提阶段，PH值、金属离子、溶剂的浓度和极性等因子，可明显影响有效成分的性质和数量。因此选择抽提液必须考虑这些因素。（1）PH值改变溶质解离状态。对蛋白质或酶等具有等电点的两性电解质物质，一般选择抽提液的PH值应在偏离等电点的稳定范围内。通常碱性蛋白质选用低PH值的溶液抽提，酸性蛋白质选用高PH值的溶液抽提。,2溶剂的极性和离子强度有些生物大分子在极性大、离子强度高的溶液中稳定；有些则在极性小、离子强度低的溶液中稳定。例如提取刀豆球蛋白A时，用015MOL/L甚至更高浓度的NACL溶液，都可使其从刀豆粉中溶解出来，稳定存在。而抽提脾磷酸二酯酶时，则需用02MOL/L蔗糖水溶液。一种物质溶解度大小与溶剂性质密切相关（相似相溶原理）；离子强度通过影响溶质的带电性也影响溶质的溶解度。降低极性在水溶液中加蔗糖，甘油，二甲亚砜，二甲基甲酰氨。,提高离子强度在水溶液中加中性盐（KCL,NACL,NH4CL,NH42SO4）一般离子强度较低的中性盐溶液可促进蛋白溶解（盐溶），高离子强度的中性盐可引起蛋白质沉淀，析出（盐析）。高离子强度使DNA溶解度增加；低离子强度使RNA溶解度增加（核酸分离依据）。常用的盐溶液是NACL溶液，浓度以015MOL/L为宜。但是在提取核蛋白或细胞器中的蛋白质时，为促使蛋白质与核酸、蛋白质与细胞器分离，则宜用高浓度0520MOL/L的盐溶液。,3水解酶细胞破裂后，许多水解酶释放出来。水解酶与欲抽提的蛋白质或核酸接触时，一旦条件适宜，就会发生反应，导致蛋白质或核酸分解，而使实验失败。为此，必须采用加入抑制剂，调节抽提液的PH、离子浓度或极性等方法，使这些酶丧失活性。如提取，纯化胰岛素时，为阻止胰蛋白酶活化，采用68％的乙醇溶液（PH2530,用草酸调节），在13－15℃抽提3H，可得到较高的回收率。因为68％乙醇可使胰蛋白酶暂时失活，草酸可除去蛋白酶的激活剂CA2，酸性环境也抑制酶蛋白活性。RNA提取需防止RNASE的水解作用，RNASE活性很高,4温度一般认为蛋白质或酶制品在低温如0℃左右时最稳定。例如在生产人绒毛膜促性腺激素HCG，糖蛋白制品时，一定要在低温下进行。当温度低于8℃时，从200公斤孕妇尿中可提取约100克HCG粗品活力为160U/MG；当温度高于20℃时，从400公斤孕妇尿中都提取不到100克粗品，而且活力很低。此外，高温下制备的HCG粗品很难进一步纯化至3500U/MG，原因是高温会使HCG受到微生物和/或糖苷酶的破坏。一般提高温度，溶解度增加，但易使大分子物质变性失活。小分子物质50－70℃；生物大分子0－10℃，最好控制在0－4℃,（5）搅拌搅拌能促使欲抽提物与抽提液的接触，并能增加溶解度。但是，一般宜采用温和的搅拌方法，速度太快时容易产生泡沫，导致某些酶类变性失活。（6）氧化一般蛋白质都含相当数量的巯基，该基团常常是酶和蛋白质的必须基团，若抽提液中存在氧化剂或氧分子时，会使巯基形成分子内或分子间的二硫键，导致酶或蛋白质失活或变性。在提取液中加入巯基乙醇，半胱氨酸。还原性谷胱甘肽等还原剂，可防止巯基发生氧化，使蛋白，酶失活。,（7）金属离子蛋白质的巯基还能和金属离子如铅、铁或铜作用，产生沉淀复合物。这些金属离子主要来源于制备缓冲液的试剂中。解决的办法①用无离子水或重蒸水配制试剂；②在配制的试剂中加入13MMOL/L的EDTA金属离子络合剂。（8）抽提液与抽提物的比例在抽提时，抽提液与抽提物的比例要适当，一般以5∶1为宜。如抽提液过多，则有利于有效成分的提取，但不利于纯化工序的进行。,第二节沉淀分离技术,沉淀法也称溶解度法，其纯化生物大分子的原理是根据物质的结构差异（如蛋白质分子表面疏水基团和亲水基团比例的差异）来改变溶液的某些性质（如PH值、极性、离子强度、金属离子等），使抽提液中有效成份的溶解度发生变化，从而达到从抽提液中分离有效成份的目的。蛋白质和核酸在组成、结构及性质等方面有明显差异，所以制备这两种大分子时，所用的试剂和操作方法也不完全相同。,一蛋白质的沉淀分离,（一）盐析沉淀法1盐析的原理定义一般在低盐浓度的情况下，蛋白质的溶解度随盐浓度的升高而增加，这种现象称为盐溶；而当盐浓度升高到一定程度后，蛋白质的溶解度又随着盐浓度的升高而降低，结果使蛋白质沉淀析出，这种现象称为盐析作用。在同一浓度的盐溶液中，不同蛋白质的溶解度不同，借此可达到彼此分离的目的。,2021年10月4日星期一,SWAU,,,,2盐的选择蛋白质的盐析通常采用中性盐，如硫酸铵、硫酸钠、硫酸镁、氯化钠、磷酸钠等，其中应用最广的是硫酸铵。硫酸铵是一中性盐，对蛋白质有相当好的安定作用。硫酸铵在水中的溶解度大而温度的影响小25℃时溶解度为41MOL/L，即767G/L0℃时溶解度为37MOL/L，即697G/L，而且价廉易得，不易引起蛋白质变性，分离效果比其他盐好。但是用硫酸铵盐析时，缓冲能力较差，而且铵离子会干扰蛋白氮的测定，故有时也要用其他盐来进行盐析。磷酸钾和硫酸钠的盐析系数KS较大，但由于在较低温度下的溶解度太低,受温度影响大，故应用不广泛。,3硫酸铵浓度的计算与调整方法通常硫酸銨的添加以百分饱和度來表示不是浓度百分比，例如大部分蛋白质可在80硫酸銨飽和度下沉淀。因为硫酸銨加入的体积很大，会改变最后的总体积，很难由浓度百分比來計算，因此使用百分饱和度作为沉淀蛋白质的度量。用硫酸铵进行盐析时，蛋白质溶液中硫酸铵浓度的调整方法主要有二种（1）加入饱和溶液法要求蛋白质溶液体积不大，所需调整的硫酸铵浓度不高VV0S2S1/（1S2）V所需加进的饱和硫酸铵溶液的体积；V0原溶液体积；S2所需达到的硫酸铵饱和度；S1原溶液的硫酸铵饱和度。饱和硫酸铵的配制方法在一定量的水中加入过量的硫酸铵，加热至50－60℃，趁热滤去沉淀，再在0℃或室温平衡1－2天，有固体析出时达100％饱和度。,2加入固体盐法要求饱和度高，不增大溶液体积TGS2S1/（1AS2）S2，S1分别代表所需达到的硫酸铵饱和度和原溶液的硫酸铵饱和度；T将1LS1饱和度的溶液提高到S2饱和度时所需加进的硫酸铵克数；G,A常数，与温度有关。实际使用时，T可直接查表得到。（注意0℃，25℃两张表，室温用25℃）,4影响蛋白质盐析的因素（1）蛋白质浓度蛋白质浓度高时，欲分离的蛋白质常常夹杂着其他蛋白质一起沉淀出来（共沉现象）。因此在盐析前要加等量生理盐水稀释，使蛋白质含量在25－30G/L。（2）离子强度和离子类型的影响A离子强度增加，溶解度下降，盐析易发生B不同蛋白质盐析时所需离子强度不同，可采用分步盐析，通过逐步增加离子强度，使不同蛋白分步沉淀出来C离子强度相同时，高价离子，半径小的离子盐析力强,（3）PH的影响大多数蛋白质在等点电时，在盐溶液中的溶解度最低。所以盐析时溶液PH值调到等电点效果最好。（4）温度的影响A在低离子强度或纯水中，温度升高，溶解度增加；B在高盐溶液中，温度升高，溶解度降低。一般在室温下进行盐析温度敏感的蛋白质在低温4℃进行也有个别酶在低温时失活，高温有活性,如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白在25℃比0℃时溶解度低，更容易盐析。,5盐析时的注意事项（1）添加的硫酸铵的纯度要高，添加后，要放30MIN以上使其充分溶解，且要不断搅拌，防止局部过浓，发生共沉淀；（2）同一溶液中欲分离几种蛋白质时，可采用分段盐析的方法。盐析通常与等电点沉淀法配合使用。（3）选择好温度，一般在室温下进行；（4）蛋白浓度不易过高，一般25－30G/L；低浓度盐析，可用离心分离；高浓度盐析（70－80％），用过滤（因为粘度大，离心操作慢）；盐析沉淀得到的蛋白质含量较高，纯品需经脱盐处理，如透析，凝胶过滤等。,（二）等电沉淀法利用蛋白质在等电点时溶解度最低以及不同的蛋白质具有不同等电点一这特性，对蛋白质进行分离纯化的方法称为等电点沉淀法。,（三）有机溶剂沉淀法作用机理（1）降低水溶液的介电常数，使溶质溶解度降低；（2）破坏大分子周围水膜，使溶解度降低。利用不同蛋白质在不同浓度的有机溶剂中的溶解度不同而使蛋白质分离的方法，称为有机溶剂沉淀法。经常使用的有机溶剂是乙醇和丙酮。优点比盐析法析出的沉淀容易过滤或离心分离，分辨力比盐析法好，溶剂也容易除去。,缺点有机溶剂沉淀法易使蛋白质和酶变性，所以操作必须在低温条件下进行。蛋白质和酶沉淀分离后，应立即用水或缓冲液溶解，以降低有机溶剂浓度，避免变性。有机溶剂沉淀法一般与等电点沉淀法联合使用。即操作时溶液的PH值应控制在欲分离蛋白质的等电点附近。,注意（1低温操作（2）样品浓度过大，易变性，共沉淀作用大，分离效果差；过小，易产生变性，回收率低。（3）样品稳定结构范围内，选择溶解度最低处的PH，即与等电点共沉淀结合使用。（4注意离子强度，离子种类的影响。,（四）选择性变性沉淀法选择一定的条件使溶液中存在的某些杂蛋白变性沉淀而不影响所需蛋白质的方法称为选择性变性沉淀法。例如利用加热，改变PH或加进某些重金属离子等使杂蛋白变性沉淀而除去。应用此法，应对欲提纯蛋白质和杂蛋白的理化性质有较全面的了解。,（五）非离子多聚物沉淀法聚乙二醇（PEG），葡聚糖，右旋糖苷硫酸钠等非离子多聚物可以沉淀蛋白质和细菌。沉淀机理空间位置排斥效应。试剂溶解度大，在水中占据大部分空间，将需沉淀物相互靠近，增加碰撞机率。优点（1）操作条件温和，不易引起变性；（2）具有极高的沉淀效率；（3）沉淀后多聚物容易除去。,二核酸的提取与沉淀分离,核酸类化合物都溶于水而不溶于有机溶剂。所以核酸可用水溶液提取，而用有机溶剂沉淀法沉淀分离。从生物材料中分离出的DNA和RNA，往往是以DNA蛋白质（DNP）或RNA蛋白质（RNP）复合物形式存在。因此，要制备初步纯化的核酸时，首先要分离出DNP或RNP，再将复合物解聚，除去蛋白质，然后通过沉淀法得到核酸。DNP在014MOL/L的氯化钠溶液中，RNP的溶解度相当大，而DNP的溶解度仅为在水中溶解度的1；当氯化钠的浓度达到1MOL/L的时候，RNP的溶解度小，而DNP的溶解度比在水中的溶解度大2倍。所以常选用014MOL/L的氯化钠溶液提取RNP，而选用1MOL/L的氯化钠溶液提取DNP。,DNP,1DNP/RNP复合物的解聚主要采用加入去污剂、有机溶剂和蛋白水解酶等试剂来实现。去污剂在破碎细胞的溶液中，加入适量的阴离子去污剂SDS、TRITONX100、TWEEN40和NP40等，有利于膜蛋白和脂肪溶解，将DNP/RNP复合物解聚，进而释放出核酸。有机溶剂苯酚、氯仿等是蛋白质的变性剂。根据抽提液中蛋白质的含量和溶剂的纯度，用变性剂反复处理抽提液，直到离心后，上层水相（含核酸）和下层有机相之间的界面处无变性蛋白为止。蛋白水解酶用此法除去复合物中的蛋白质的操作比较温和，常用的水解酶有溶菌酶、蛋白酶K和蛋白酶E，可以避免剪切和破坏核酸。,2多糖的消除采用动物或植物作材料提取核酸时，动物在宰杀前饥饿12H，植物在取材前暗室培养数天，其体内的糖原和淀粉类物质均会减少。混杂于核酸提取液中的多糖类物质，一般可用选择性沉淀剂如异丙醇、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）可达到分离目的。或用等体积的25MOL/L磷酸缓冲液和等体积的乙二醇甲醚处理，离心后，多糖位于中部，核酸存在上层乙二醇甲醚中。,3RNA的提取TRNA约占细胞内RNA的15的相对分子质量较小，在细胞破碎以后溶解在水溶液中，滤液用酸处理，调节到PH5得到的沉淀的中可分离得到TRAN。MRNA占细胞RNA的5左右，很不稳定，提取条件要严格控制。RRNA约占细胞内RNA的80，一般提取的RNA主要是RRNA。由于RNA是基因表达过程中非常重要的生物分子，如MRNA携带了DNA为蛋白质编码的信息。RNA的分离是研究基因功能的重要基础之一，在分子生物学中占有重要的地位。RNA的提取方法主要有稀盐溶液提取和苯酚溶液提取。,稀盐溶液提取将细胞破碎制成细胞匀浆，然后用014MOL/L的氯化钠溶液反复抽提，得到核糖核蛋白提取液，再进一步与脱氧核糖核蛋白、蛋白质、多糖等分离，可得RNA。苯酚溶液提取在细胞破碎制成匀浆后，用SDS变性蛋白并抑制RNASE活性，经多次酚/氯仿在一定条件下振荡一定时间，抽提除去蛋白、多糖、色素等后，用NAAC和乙醇沉淀RNA，将RNA与蛋白质分开。,4DNA的提取从细胞中提取DNA，一般在细胞破碎后用浓盐法提取。即用1MOL/L的氯化钠溶液从细胞匀浆中提取脱氧核糖核蛋白，再与含有少量辛醇或戊醇的氯仿一起振荡除去蛋白质。或者先以014MOL/L氯化钠溶液也可用01MOL/L

简介：最新精品WORD欢迎下载可修改1SNRNA小核RNA，只存在于细胞核或者核质核仁中的一类小分子量的RNA，具有独特功能并且独立存在的实体，约为70300个核苷酸，可参与真核生物的RNA剪接。2SIRNA即干扰RNA，一类小分子量的RNA，可以高效，特意地阻断体内同源基因的表达，促使同源MRNA降解，诱使细胞表现出特定的基因缺失。3核酶一类具有催化活性的核糖核酸，呈锤头状，参加RNA的剪切和降解。与RNA酶有显著区别，它是RNA，后者是蛋白质。4反义RNA又称调节RNA，是指能与特定MRNA互补结合的RNA片段，即碱基序列正好与有意义的MRNA互补的RNA分子。5三链DNA是在DNA双螺旋结构基础上形成的，由多聚嘧啶核苷酸或者多聚嘌呤核苷酸与DNA双螺旋形成的。/由于双螺旋的一股轻微折叠后，该股中的碱基可与双螺旋的碱基以HOOGSTEEN氢键相连如TAT、CGC、TAA、CGG。6RNAI即RNAI干扰，SIRNA高效特异地阻断体内同源基因表达，促使同源RNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型的现象。7何谓反义RNA其功能和医学意义如何答又称为调节RNA，是指能与特定MRNA互补结合的RNA片段，也即碱基序列与有意义的MRNA互补的RNA分子。功能A阻断MRNA的翻译，B抑制DNA复制和MRNA的转录，C选择性的关闭基因。意义参与基因调控可用于基因治疗（病毒、肿瘤）；8什么叫做核酶如何发挥作用有何应用价值答即一类具有催化活性的核糖核酸。主要催化RNA的剪接反应和剪切反应。应用意义通过设计合成特异性切割病毒以及病毒的RNA的核酶，对病毒和肿瘤的基因治疗将发挥重要作用。9何谓RNAI其作用机理和应用前景如何答即RNAI干扰，SIRNA高效特异地阻断体内同源基因表达，促使同源RNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型的现象。作用机理分为起始阶段和效应阶段。起始阶段DICER酶以依赖ATP的方式切割外源性的双链RNA为小分子干扰RNA，清除病毒，阻断转座子表达；效应阶段小分子干扰RNA结合核酶复合物形成RNA诱导活化的复合物及RISC，然后RISC结合至MRNA转录本上并切割它，从而发挥作用。应用前景大通量研究基因功能的工具；基因敲除中的应用；用于基因治疗；基因表达的调控。第二章第二章1移动基因又叫转位因子（TRANSPOSABLEELEMENTS）,由于它可以在染色体基因组上移动，甚至可在不同染色体间跃迁，故又称跳跃基因（JUMPINGGENE）。2断裂基因真核细胞的结构基因，其核苷酸序列中含有与氨基酸编码无关的DNA间隔区段，从而被分割成不连续的若干区域。将这种编码序列不连续，有间隔区段的DNA片断称为断裂基因3RNA剪接将断裂基因的内含子删除和表达子连接并最终形成成熟MRNA的过程。4重叠基因不同基因的核苷酸序列有时为相邻两个基因共用，将核苷酸彼此重叠的两个基因称为重叠基因。5假基因在珠蛋白基因簇各片段核苷酸序列分析时发现，除了有正常的功能基因之外，还有功能失活的特殊序列片段，它不能行使表达功能。该类核苷酸序列中存在的无表达功能的畸变核苷酸序列片段。6卫星DNA又称随体DNA,不编码蛋白质和转录RNA的小片段高度重复一类小片段DNA序列，多富含GC碱基在DNA浮力密度实验中会在主峰旁形成些小峰，形似卫星分布而称之。一般510BP短序列，人类为171BP，保护和稳定染色体7基因组表示某物种单倍体的总DNA。对于二倍体高等生物其配子的DNA总和即为一组基因组不同生物基因组数目不同。8LTR即长末端重复序列，为RNA基因组的两端含有的U3RU5两个完全相同的正向重复序列。具随机整和能力，可用作病毒载体问答1什么叫做基因何谓基因的新概念基因的主要功能是什么答基因就是指编码有最新精品WORD欢迎下载可修改活性，可独立存在与上游区、下游区或基因内部，可进行远距离增强启动作用，而且无方向性。问答1真核表达调控的顺式作用元件有哪些其作用特点是什么答顺式作用元件有启动子，增强子，沉默子，衰减子，终止子。作用特点是能够与DNA结合蛋白质结合的特定序列的DNA片段，决定转录起始位点和RNA聚合酶的转录效应。2真核表达调控的反式作用因子有哪些其作用特点答反式作用元件主要分为通用转录因子和转录调节因子两大类。作用特点一，同一DNA序列可被不同蛋白质识别；二同一蛋白质因子可与多种不同DNA序列发生联系，多通过蛋白质蛋白质先结合再影响DNA。三蛋白质蛋白质或蛋白质DNA的结合，导致构象上细微的改变，从而发挥调控作用。四反式作用元件在合成过程中有相当大的可变性和可塑性。4常用的真核表达载体有哪些并简述其特点。答主要有一下几种逆转录病毒载体，痘类病毒载体，HSVI单纯疱疹病毒载体。特点一，逆转录病毒载体对细胞的感染效率高，并能表达整合的病毒基因；可以同时感染大量细胞；长时间感染细胞并不会发生毒害作用；宿主范围十分广泛；可以进行DNA的单拷贝整合；但稳定性差，安全性差，重组病毒滴度不高而且局限于感染分裂细胞。二，痘类病毒载体对多种细胞敏感易于培养利于大量生产制备；对外环境相对稳定并易于保存运输；接种途径简单易行；利于多价疫苗的研究开发；利于大片段的外源性基因的插入，且不影响病毒的正常复制和表达，但是基因组分子量大不易操作，没有MRNA的剪切功能故不宜采用基因组DNA，需使用无内含子的CDNA。三，HSVI单纯疱疹病毒载体比较大利于大片段的外源性基因插入提供条件，而且插入容量大；可以感染神经细胞。5简述真核，原核俩大表达系统的优缺点答一，真核生物DNA只有一小部分是裸露的，有核膜包裹；原核生物大部分属于非结合状态，且无核膜的阻隔，转录的MRNA直接在胞质中进行蛋白合成。二，真核生物DNA都有内含子，可以剪接加以去除；原核生物MRNA的剪接加工能力。三，真核生物可以在需要时可以重排某些DNA片段和扩增特定基因的机制，而原核生物没有。四，真核生物有三种MRNA酶，可参与不同类型的RNA分子转录作用，而原核生物只有一种RNA酶。五，真核生物产生的MRNA分子寿命大多比原核生物长。六，真核生物具有对初级转录产物的剪接能力。七，真核生物不存在操纵子结构，原核生物多是。八，真核生物基因多拷贝，而原核生物含有很少的重复序列。第五章第五章名词解释1限制性核酸内切酶是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶。2同尾酶有一些限制性核酸内切酶识别的碱基顺序不完全恒定，即识别顺序不同，但酶切后产生同样黏性末端的两种酶称为同尾酶，如BAMHⅠ和BGLⅡ。3同裂酶识别序列相同，对甲基化切点敏感性不同的两种酶。如MBOⅠ和SAU3AⅠ共同识别序列GATC，但对GMEATC切点,前者不能切，后者能切。4甲基化酶常见的有DAM甲基化酶和DCM甲基化酶，可使相应碱基甲基化。常用于使酶切位点中的碱基甲基化而避免降解，保护酶切位点。5KLENOW酶为DNA聚合酶Ⅰ大片段，分子质量为76KD，是经过枯草杆菌蛋白酶或胰蛋白酶分解DNA聚合酶Ⅰ，切除小亚基，保留的大亚基部分。这种酶只有DNA聚合酶的活性和3/外切酶的活性，但是没有5/外切酶活性。6碱性磷酸酶该酶的功能是以单链或双链的DNA、RNA为基质，将DAN或RNA片段的5’端的磷酸切除，产生5’OH7逆转录酶又称为依赖RNA的DNA聚合酶，可以RNA为模板，逆转录成CDNA第一链，这种酶具有聚合酶活性和3’外切酶活性。8DNA连接酶LIGASE）是一种能够催化在双股DNA链的3′OH和5′P之间形成磷酸二酯键的酶，可连接互补粘性末端或平端以及缺口修复，不能连接单链DNA,被连接的DNA链必须是双螺旋DNA分子的一部分。

简介：最新精品WORD欢迎下载可修改分子生物学知识点（修改）分子生物学知识点（修改）染色体与染色体与DNADNA▲基因基因DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质最小的功能单位。▲基因的分子生物学定义基因的分子生物学定义产生一条多肽链或功能RNA所必需的全部核苷酸序列▲基因组基因组单倍体细胞中含有的整套染色体。▲染色体染色体细胞在有丝分裂（或减数分裂）时遗传物质存在的特定形式，是间期细胞染色质结构紧密组装的结果。▲染色体组成DNA、组蛋白、非组蛋白、部分RNA▲染色体的特征1、分子结构相对稳定2、能够自我复制，使亲子代之间保持连续性3、能够指导蛋白质的合成，掌握整个生命过程4、可以产生可遗传的变异▲组蛋白组蛋白与DNA结合但没有序列特异性的蛋白，是染色体的结构蛋白，与DNA共同组成真核生物染色质的基本结构单位核小体▲组蛋白的特性1、进化上保守，不同生物组蛋白的氨基酸组成和相似2、无组织特异性3、肽链上氨基酸分布不对称4、组蛋白有修饰作用▲非组蛋白非组蛋白与DNA结合但有序列特异性的蛋白▲非组蛋白的特性1、具有多样性和异质性，不同组织细胞中其种类和数量都不相同2、具有识别、结合特异性，能够识别特异的DNA序列，在不同的基因组之间，这些非组识别的DNA序列在进化上是保守的3、具有功能的多样性，包括基因表达的调控和协助染色质高级结构的形成★真核与原核生物基因组的区别★真核与原核生物基因组的区别原核生物基因组真核生物基因组结构简单，几乎所有基因都用来编码蛋白质结构庞大，存在大量重复序列和非编码序列功能相关的RNA和蛋白质基因，往往集中在一起形成功能或转录单位，可以一起被转录为多个MRNA（多顺反子MRNA）基因的转录产物为单顺反子有重叠基因（完全重叠、部分重叠、只有一个碱基对的重叠）基因分布在一个染色体上基因分布在多个染色体上几乎每一个基因都是完整的连续的DNA片段基因是不连续的，中间存在不被翻译的内含子序列基因转录和翻译是同步的基因组转录后的绝大部分前体RNA必须经过剪接过程才能形成成熟的MRNA原核生物的基因组一般是一个复制子基因组的复制起点多，缺少明显的操纵最新精品WORD欢迎下载可修改有关），拓扑异构酶II（切断双链，作用是将负超螺旋引入DNA分子，同复制有关）。◆解旋酶是解开双链的酶蛋白，每解开1对碱基，需要消耗2分子ATP。◆单链结合蛋白（SSB）是一些能够和单链DNA结合的蛋白质因子，用于稳定DNA单链，保护单链DNA，避免核酸酶的降解。◆引发酶参与构成引发体，合成RNA引物，提供复制所需要的3’OH端，引发体由引发酶和引发前体组成。◆DNA聚合酶需DNDP为原料，MG2激活，需模板和3’OH端引物。◆DNA连接酶催化两段DNA之间磷酸二酯键的形成，但不能将两条游离的单链连接起来◆DNA复制的过程起始（DNA母链形成复制叉，DNA合成从复制起始点出沿着两个方向进行，和RNA引物形成的阶段）。延长（复制叉的移动和新生链的延长，包括前导链和后随链的延长）。终止（新生子链和母链形成新生的双链DNA）▲原核生物DNA聚合酶◆DNA聚合酶I5’3’的聚合酶活性，3’5’，5’3’外切酶活性，在切除因紫外线照射而形成嘧啶二聚体中有重要作用，也可用来切除冈崎片段5’端的RNA引物，使冈崎片段间缺口消失，保障连接酶的连接。◆DNA聚合酶II5’3’的聚合酶活性，3’5’外切酶活性，主要是起修复DNA的作用。◆DNA聚合酶III5’3’的聚合酶活性，3’5’外切酶活性提高复制的保真性，是DNA复制中链延长的主导聚合酶。▲真核生物DNA聚合酶◆DNA聚合酶Α（分布在核内，主要作用是引物合成）◆DNA聚合酶Β（分布在核内，主要起对损伤的修复，属高忠实性修复酶）◆DNA聚合酶Γ（分布在线粒体内，对线粒体DNA的复制发挥作用）◆DNA聚合酶Δ（分布在核内，主要负责DNA复制的酶，参与前导和后随链的合成）◆DNA聚合酶Ε（分布在核内，与后随链的合成有关）▲DNA的复制体系DNDP为原料，DNA的两条链为模板链，一段RNA引物，引物酶，聚合酶等多种酶。▲DNA的复制的几种方式◆线性DNA复制（主要是真核生物）◆环状DNA复制（大肠杆菌Θ型，质粒滚环型（不需要RNA引物，只有一个复制叉），线粒体D型）★真核与原核生物★真核与原核生物DNADNA复制的比较复制的比较相同点1、都以DNTP为底物，需要MG激活，需要能量2、聚合时需要模板和引物，都为半保留、半不连续复制3、方向为5’3’不断延长的是3’OH4、复制为高保真、有多种机制不同点真核生物原核生物多复制子，多复制起点，双向为主也有单向单个复制子，单个复制起点，双向一个复制单元一个复制叉，复制叉移动慢一个复制单元有多个复制叉，复制叉移动快DNA聚合酶种类较多，有15种以上DNA聚合酶种类相对较少DNA复制需要起始点识别复合物不需要

简介：最新精品WORD欢迎下载可修改第二章DNA的结构一、选择题单选或多选1．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是肺炎球菌在老鼠体内的毒性和T2噬菌体感染大肠杆菌。这两个实验中主要的论点证据是A从被感染的生物体内重新分离得到DNA，作为疾病的致病剂BDNA突变导致毒性丧失C生物体吸收的外源DNA而并非蛋白质改变了其遗传潜能DDNA是不能在生物体间转移的，因此它一定是一种非常保守的分子E真核生物、原核生物、病毒的DNA能相互混合并彼此替代21953年WATSON和CRICK提出A多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋BDNA的复制是半保留的，常常形成亲本子代双螺旋杂合链C三个连续的核苛酸代表一个遗传密码D遗传物质通常是DNA而非RNAE分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变3双链DNA中的碱基对有AAUBGTCCGDTAECA4DNA双螺旋的解链或变性打断了互补碱基间的氢键，并因此改变了它们的光吸收特性。以下哪些是对DNA的解链温度的正确描述A哺乳动物DNA约为450C，因此发烧时体温高于420C是十分危险的B依赖于AT含量，因为AT含量越高则双链分开所需要的能量越少C是双链DNA中两条单链分开过程中温度变化范围的中间值D可通过碱基在260MM的特征吸收峰的改变来确定E就是单链发生断裂磷酸二醋键断裂时的温度5DNA的变性A包括双螺旋的解链B可以由低温产生C是可逆的D是磷酸二醋键的断裂E包括氢键的断裂6在类似RNA这样的单链核酸所表现出的“二级结构“中，发夹结构的形成A基于各个片段间的互补，形成反向平行双螺旋B依赖于AU含量，因为形成的氢键越少则发生碱基配对所需的能量也越少C仅仅当两配对区段中所有的碱基均互补时才会发生D同样包括有像GU这样的不规则碱基配对E允许存在几个只有提供过量的自由能才能形成碱基对的碱基7．DNA分子中的超螺旋A仅发生于环状DNA中。如果双螺旋在围绕其自身的轴缠绕后即增加缠绕数才闭合，则双螺旋在扭转力的作用下，处于静止B在线性和环状DNA中均有发生。缠绕数的增加可被碱基配对的改变和氢键的增加所抑制C可在一个闭合的DNA分子中形成一个左手双螺旋。负超螺旋是DNA修饰的前提，为酶接触DNA提供了条件D足真核生物DNA有丝分裂过程中固缩的原因E是双螺旋中一条链绕另一条链的旋转数和双螺旋轴的回转数的总和8DNA在10MM纤丝中压缩多少倍长度A6倍B10倍C40倍D240倍E1000倍F10000倍9DNA在3MM纤丝中压缩多少倍A6倍BL0倍C40倍D240倍ELO00倍F10000倍10DNA在染色体的常染色质区压缩多少倍A6倍B10惜C40倍D240倍E1000倍F10000倍11DNA在中期染色体中压缩多少倍A6倍B10倍C40倍D240倍E1000倍F10000倍12组蛋白的净电荷是A正B中性C负13．核小体的电性是A正B中性C负最新精品WORD欢迎下载可修改一选择题1基因组是“A一个生物体内所有基因的分子总量（B）一个二倍体细胞中的染色体数C遗传单位D生物体的一个特定细胞内所有基因的分子的总量2多态性可通过表型或DNA分析检测到是指A在一个单克隆的纯化菌落培养物中存在不同的等位基因B个物种种群中存在至少两个不同的等位基因C个物种种群中存在至少三个不同的等位基因D一个基因影响了一种表型的两个或更多非相关方面的情况E一个细胞含有的两套以上的单倍体基因组3．核基因经常被断开“A反映了真核生物的MRNA是多顺反子B因为编码序列“外显子“被非编码序列“内含子“所分隔C因为真核生物的DNA为线性而且被分开在各个染色体上，所以同一个基因的不同部分可能分布于不同的染色体上D表明初始转录产物必须被加工后才可被翻译E表明真核基因可能有多种表达产物，因为它有可能在MRNA加工的过程中采用不同的外显子重组方式4下面叙述哪些是正确的AC值与生物体的形态复杂性呈正相关BC值与生物体的形态复杂性呈负相关C每个门的最小C值与生物体形态复杂性是大致相关的5选出下列所有正确的叙述。A外显子以相同顺序存在于基因组和CDNA中B内含子经常可以被翻译C人体内所有的细胞具有相同的一套基因D人体内所有的细胞表达相同的一套基因E人体内所有的细胞以相同的一种方式剪接每个基因的MRNA6下列关于酵母和哺乳动物的陈述哪些是正确的A大多数酵母基因没有内含子，而大多数哺乳动物基因有许多内含子B酵母基因组的大部分基因比哺乳动物基因组的大部分基因小C大多数酵母蛋白比哺乳动物相应的蛋白小D尽管酵母基因比哺乳动物基因小，但大多数酵母蛋白与哺乳动物相应的蛋白大小大致相同7下列哪些基因组特性随生物的复杂程度增加而上升A基因组大小B基因数量C基因组中基因的密度D单个基因的平均大小8以下关于假基因的陈述哪些是正确的A它们含有终止子B它们不被转录C它们不被翻译D它们可能因上述任一种原因而失活E它们会由于缺失或其他机理最终从基因组中消失F它们能进化为具有不同功能的新基因9假基因是由于不均等交换后，其中一个拷贝失活导致的。选出下面关于此过程的正确叙述。A失活点可通过比较沉默位点变化的数量和置换位点变化的数量来确定B如果假基因是在基因复制后立即失活，则它在置换位点比沉默位点有更多的变化C如果假基因是在基因复制后经过相当长一段时间才失活，则它在置换位点与沉默位点有相同数量的变化10下列哪些基因以典型的串联形式存在于真核生物基因组A球蛋白基因B组蛋白基因CRRNA基因D肌动蛋白基因11根据外显子改组EXONSHUFFLING假说A蛋白的功能性结构域由单个外显子编码

简介：最新精品WORD欢迎下载可修改一、一、简述DNA二级结级结构的特点构的特点双螺旋双螺旋DNA两条核苷酸两条核苷酸链反向平行，以一定平行距离反向平行，以一定平行距离绕一个轴盘轴盘旋，形成一个右旋的双螺旋体。旋，形成一个右旋的双螺旋体。主链磷酸和核苷酸排列在双螺旋外磷酸和核苷酸排列在双螺旋外侧，彼此通，彼此通过35磷酸二磷酸二脂键相连接，形成主接，形成主链。碱基配碱基配对两条主两条主链相对应对应的碱基按照的碱基按照AT和GC的配的配对原则由氢键氢键相连，其中，其中AT之间由两个由两个氢键氢键相连，GC之间由三个由三个氢键氢键相连。主。主链上碱基排列上碱基排列顺序储藏了藏了遗传遗传密码信息。信息。结构尺寸和大小沟构尺寸和大小沟DNA双螺旋分子直径双螺旋分子直径为2NM，螺距，螺距为34NM，其中包括，其中包括10个碱基个碱基对，碱基与碱基之，碱基与碱基之间距离距离为034NM。螺旋外部有两个凹槽，根据大小分螺旋外部有两个凹槽，根据大小分为大小沟，都能使蛋白大小沟，都能使蛋白质分子分子进入而与碱基相接触。入而与碱基相接触。二、核酸的二、核酸的变性DNA二级结级结构和三构和三级结级结构受到物理化学因素的破坏而解体，构受到物理化学因素的破坏而解体，但其一但其一级结级结构核苷酸构核苷酸间共价共价键并不断裂。并不断裂。DNA分子由分子由稳定的双螺旋定的双螺旋结构松解构松解为无规则线规则线性结构的构的现象。象。变性时维时维持双螺旋持双螺旋稳定性的定性的氢键氢键断裂，碱基断裂，碱基间的堆的堆积力遭到破力遭到破坏，但不涉及到其一坏，但不涉及到其一级结级结构的改构的改变。凡能破坏双螺旋。凡能破坏双螺旋稳定性的因定性的因素，如加素，如加热、极端的、极端的PH、有机、有机试剂试剂甲醇、乙醇、尿素及甲甲醇、乙醇、尿素及甲酰胺等，胺等，最新精品WORD欢迎下载可修改DNA损伤损伤又称前突又称前突变，如果，如果细胞不能将胞不能将损伤损伤完全修复，完全修复，DNA不能恢复不能恢复损伤损伤前的前的结果形果形态，就形成不可逆的永久性、可，就形成不可逆的永久性、可遗传遗传的改的改变，即，即发生了基因突生了基因突变。因此三者之因此三者之间的关系是，的关系是，DNA损伤损伤是突是突变的基的基础，而修复，而修复时阻止阻止损伤变损伤变成突成突变的手段，突的手段，突变时损伤变时损伤无法修复造成的后果。无法修复造成的后果。六、六、DNA损伤损伤主要的修复方式主要的修复方式DNA修复可以在三个水平上修复可以在三个水平上进行行1、DNA复制前水平或非复制复制前水平或非复制DNA的修复如回复修复和切的修复如回复修复和切除修复。除修复。回复修复包括回复修复包括酶学光修复（修复学光修复（修复嘧啶嘧啶二聚体），二聚体），单链单链断裂重断裂重组（连接缺口接缺口5磷酸根和磷酸根和3羟基形成磷酸二基形成磷酸二酯键酯键），），嘌呤直接插入（修呤直接插入（修复无复无嘌呤位点）。切除修复包括碱基切除修复和核苷酸切除修复。呤位点）。切除修复包括碱基切除修复和核苷酸切除修复。步骤为识别骤为识别、切除、修、切除、修补、连接。接。DNA复制水平的修复，如复制水平的修复，如错配修复。配修复。错配修复将配修复将DNA复制复制过程中未得到校正的程中未得到校正的错配碱基配碱基进行二行二次校正。次校正。DNA复制水平后的修复，如重复制水平后的修复，如重组修复及修复及SOS修复。修复。重组修复利用含有正常修复利用含有正常遗传遗传信息的同源姐妹信息的同源姐妹DNA分子分子进行重组修复。修复。这种修复常种修复常发生在修复后，可以生在修复后，可以对发对发生在生在DNA两条两条链

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