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    • 简介:金黄地鼠GOLDENHAMSTERMESOCRICETUSAURATUS又称叙利亚地鼠。金黄地鼠已经作为感染和疾病模型用于许多研究,它经常被用于模拟人疾病在自然条件下的发生过程。金黄地鼠相对于其他啮齿类动物相比自然状态下肿瘤发病比率相对较低,有研究称只有05%17%,因此说金黄地鼠是一个很好的肿瘤模型。重要的是金黄地鼠已经被公认为是一个宝贵的模式动物用于研究由病毒引起的人类疾病。例如布亚病毒BUNYAVIRUSES,沙粒病毒ARENAVIRUSES,虫媒病毒FLAVIVIRUSES,汉尼拔病毒HENIPAVIRUSES和SARS冠状病毒。用金黄地鼠作为一个评价溶肿瘤腺病毒的疗效和毒性的肿瘤动物模型具有小鼠和大鼠无法比拟的先天优势。由于小鼠正常组织不支持人腺病毒复制,因此,小鼠模型无法很好的评价溶肿瘤腺病毒。而金黄地鼠被美国FDA认为是评价溶肿瘤腺病毒标准的动物模型,金黄地鼠正常组织如肺、肝脏都能支持腺病毒的复制。金黄地鼠是近几年才被大家广泛接受的一种模式动物,基于金黄地鼠的转基因动物和抗体还十分的稀少。无法对利用金黄地鼠为动物模型的实验进行深入的探讨限制了金黄地鼠的应用。因此我们围绕金黄地鼠动物模型的两个方面设计了实验。第一,利用新型基因修饰技术类转录激活因子效应因子敲除金黄地鼠RAG1基因制备免疫缺陷的转基因金黄地鼠。第二,运用传统的单克隆抗体技术制备金黄地鼠Γ干扰素的单克隆抗体,用于转基因金黄地鼠的相关实验检测。类转录激活因子效应因子TRANIONACTIVATLIKEEFFECTS,TALE是一种最早在植物病原黄单胞菌中发现的,可以识别特异DNA序列的,天然的DNA结合蛋白。利用其这种特性,通过和相关功能性蛋白FOK1的融合表达,可以实现在体内和体外特异的结合和修饰基因组DNA的目的。FOK1是一个非特异的核酸内切酶,但是只有当它形成二聚体时才能行使内切酶的功能。最近几年,TALEN广泛应用于基因的敲入和敲除,转基因动物模型建立,基因治疗等方面。经过实验,我们通过显微注射把TALEN转录的MRNA打进斑马鱼和大鼠的受精卵中,并对结果进行测序,在斑马鱼和大鼠体内验证了所设计的TALEN的敲除效率,得到了一对高效TALEN,通过将此TALEN转录的MRNA经显微注射进斑马鱼和大鼠受精卵后,在斑马鱼中验证其效率为179%。于此同时我们通过原核表达金黄地鼠Γ干扰素蛋白并用此蛋白免疫小鼠,经过细胞融合和克隆筛选,也已经成功得到5株抗金黄地鼠Γ干扰素的单克隆抗体,并用ELISA和WESTERNBLOT的方法进行了初步验证。该研究为拓展使用金黄地鼠模型用于医学科学研究提供了有力的工具。
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      上传时间:2022-07-26
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    • 简介:目的利用CRISPRCAS9基因编辑技术敲除斑马鱼FAF1基因,并研究FAF1基因对斑马鱼发育的影响。方法针对斑马鱼FAF1基因设计并制备GRNA,通过显微注射技术将GRNA与CAS9MRNA混合注入斑马鱼单细胞胚胎中,酶切和基因测序技术筛选出发生突变的F0代斑马鱼,将其与野生型斑马鱼外交得到F1代杂合体,再将同种突变类型的F1代斑马鱼自交得到F2代纯合子斑马鱼,并用显微镜观察、记录每一代斑马鱼表型。结果成功制备了FAF1GRNA和CAS9MRNA。位于FAF16号外显子的GRNA6和4号外显子的GRNA7能使FAF1基因发生移码突变。筛选出可遗传突变类型(MUTANTTYPE1MU1)并观察到该杂合突变型斑马鱼有体细胞色素沉积延迟、4DPFDAYSPOSTFERTILIZATIONDPF开使尾部肌节出现“结节样”表型以及头颅缩小、舌骨小角角度增大等颅面软骨畸形的变化,并于受精后8~9DPF死亡。结论相对于以往文献报道中在斑马鱼中利用MPHOLINOMO敲低FAF1基因产生颅面软骨变化的表型,本研究中利用CRISPRCAS9敲除该基因产生了新的表型,即色素沉积延迟及尾部肌节部位出现“结节样”变化。为探究FAF1基因功能奠定了基础,也为唇腭裂发病机制的研究提供了新线索。
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      上传时间:2022-07-26
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    • 简介:山东大学硕士学位论文金属硫蛋白在原核生物中的表达及在环境治理中的应用姓名苏郁洁申请学位级别硕士专业微生物学指导教师林建强20070515山东大学硕士论文摘要金属硫蛋白是一类富含半胱氨酸的低分子量,金属结合蛋白。广泛存在于从细菌到哺乳动物的多种生物体内。金属硫蛋白与重金属解毒有关,并且参与真核生物体内许多微量金属元素的代谢。金属硫蛋白的主要特征之一是富含半胱氨酸,约占氨基酸总数的L/3,但是蛋白质结构中并没有二硫键金属硫蛋白的特殊结构及其重要的生理作用,引起许多科学家的研究兴趣。据报道,在已知各种金属硫蛋白中,人类的金属硫蛋白的解毒能力最强,并且能安全的应用于药物,食品,化妆品中。这篇论文选取人肝金属硫蛋白IA进行研究在大肠杆菌中表达人类金属硫蛋白,并研究蛋白质的性质和应用。与其它真核生物的基因相比较,金属硫蛋白在大肠杆菌中表达量很低,目前仍然不知道其原因。传统的金属硫蛋白的生产是从经过重金属诱导的哺乳动物的肝脏中提取的,这种方法成本昂贵并且产量很低。在本研究中,通过用原核生物大肠杆菌工程菌表达金属硫蛋白,从而降低其生产成本,并且研究了工程菌在生物吸附中的作用。本文采用化学法合成人肝金属硫蛋白IA的基因。首先根据GENBAILK中报道的人肝金属硫蛋白IA的氨基酸序列,并根据大肠杆菌对密码子的偏好性设计结构基因序列,然后根据载体上的多克隆位点在合成基因的两端设计酶切位点,C端为SALI和ECORI,N端为BAⅡ埘I。为了便于后续实验中的蛋白质分析纯化,在C端添加了含六个组氨酸的HISTAG。由于金属硫蛋白容易被原核生物中的蛋白水解酶分解,所以经常将金属硫蛋白以融合蛋白的形式表达以增加它的稳定性同时还要确保蛋白的结构和功能不受融合蛋白标签的影响。经常与谷胱甘肽转移酶或者B半乳糖苷酶融合表达。本实验中选用PGEX4T1作为表达载体,通过酶切连接将合成基因插入到表达载体中,构建金属硫蛋白表达质粒PGHM,将其转入到大肠杆菌BL2L和JML09中。实验结果经过琼脂糖凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳,蛋白质印迹分析检测,证实在构建的工程菌株中有金属硫蛋白的表达。通过对所构建的工程菌对砷的吸附量,吸附时间的检测及口H值,诱导物,砷浓度等条件的影响,结果表明,表达MT的工程菌与对照相比吸附砷的能力明显增加,每克干菌体对砷的吸附量由763PG提高到3196烬,提高了3倍以
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      上传时间:2022-07-27
      页数: 61
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    • 简介:中圈料孽教求犬论文题目作者姓名学科专业导师姓名完成时间OFSCIENCEANDTECHNOLOGYOFC蓖藏毒素A链和坛糖体蛋白P2相互作月的研宪及金黄色葡萄球菌中ROL和SAER”’的结均生物学铲竞二_一七年五月■譬一叟燹翁鼙一1O√,Ⅶ攀P‘~KR。≯口ORT_T●J1●●UNIVERSITYOFSCIENCEANDTECHNOLOGYOFCHINAA,DISSERTATIONFORDOCTOR’SDEGREESTRUCTUREBASESOFR伪INTERACTIONWITHP2ANDROTANDSAERDBDINSTAPHYLOCOCCUSAUREUSAUTHOR’SNAMEXIAOJIAOFANSPECIALITYSTRUCTURALBIOLOGYSUPERVISORSPROFMAIKUNTENGPROFLIWENNIUFINISHEDTIMEMAY2017
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      上传时间:2022-07-26
      页数: 433
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    • 简介:厦门大学硕士学位论文基于基因芯片的基因表达模式分析姓名王玉鹏申请学位级别硕士专业细胞生物学指导教师纪志梁20070518厦门大学学位论文著作权使用声明本人完全了解厦门大学有关保留、使用学位论文的规定。厦门大学有权保留并向国家主管部门或其指定机构送交论文的纸质版和电子版,有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅,有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索,有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。本学位论文属于L、保密,在年解密后适用本授权书。2、不保密∽请在以上相应括号内打“4”
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      上传时间:2022-07-26
      页数: 67
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    • 简介:人乳头状瘤病毒HPV是一种非包膜双链DNA病毒是宫颈癌等多种癌症诱发的主要原因。HPV16、18、58是感染70%宫颈癌的HPV基因型以上三型的HPV疫苗生产将对预防我国及东南亚地区宫颈癌的发生具有重要的现实意义。本研究对表达目的蛋白的菌株进行筛选并对菌种质量进行全面检定取得了以下结果。1将表达可溶性HPVL1蛋白的重组质粒转入四种宿主菌BL21DE3、BL21、IGAMI2DE3和XA90经过单克隆初筛、复筛和检测分析XA90菌株在16型、18型和58型蛋白表达量方面均高于其它三种菌。2优化确定了XA90菌株的摇瓶培养条件诱导温度30℃、诱导时间6H、诱导剂(乳糖)浓度2GL1。3通过摇瓶培养制备原始种子批菌液继代培养制备主种子和工作种子批并参照中华人民共和国药典制定种子批菌种的检定项目及质量标准对HPV16、18和58型疫苗种子批菌种质量进行了全面检定结果表明各项质量控制指标均符合标准。4通过连续传代培养检测菌株中质粒稳定性、目的蛋白及基因的表达确定菌种的种子批传代25代仍保持遗传稳定性和疫苗的有效性。本课题研究为实现HPV三价疫苗的规模化生产奠定了坚实的基础。
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      上传时间:2022-07-26
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    • 简介:温州医学院硕士学位论文STNFRⅡGAD融合蛋白聚合体表达、制备及生物学特性研究姓名陆月申请学位级别硕士专业遗传学指导教师高基民;吴小兵201105温州医学院硕士学位论文程度是二聚体融合蛋白的24倍。结论成功构建了PDC316STNFRIIGAD和PRECIRESDHFRSTNFRIIGAD融合基因质粒,并分别对应在腺病毒表达系统及CHO/DHFR’真核细胞表达系统中实现了有生物学活性的融合蛋白的表达。‘建立了比较完善的蛋白纯化系统。从收获细胞培养上清开始,经过硫酸铵沉淀,金属离子亲和层析纯化,分子筛纯化得到相对高纯度,高质量的STNFRIIGAD融合蛋白。并完善了检测手段,通过蛋白点杂交,WESTEMBLOTTING免疫印迹实验,L929细胞测活实验等,检测了融合蛋白的表达情况和比活性。研究了三聚体重组蛋白STNFRIIGAD的一些生物学特性,通过超速分析离心得到三聚体融合蛋白的分子量为165KD,通过BIACORE实验证明三聚体重组蛋白STNFRIIGAD与肿瘤坏死因子的亲和力高于二聚体融合蛋白STNFRIIFC两倍以上。关键词融合蛋白;可溶性肿瘤坏死因子受体II脂联素;真核表达;生物学活性;表达系统4
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      上传时间:2022-07-26
      页数: 53
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    • 简介:第一部分超表达STAT4和STAT6稳定JURKAT细胞系的建立目的构建STAT4及STAT6超表达JURKAT稳定转染细胞系,以便向该细胞系中转染干扰质粒导致STAT4、STAT6和CBP基因沉默,观察转录因子STAT4、STAT6及CBP在JURKAT细胞中的相互效应。方法使用DMRJEC分别将质粒PIRES2EGFP、PIRES2EGFPSTAT4和PIRES2EGFPSTAT6转染入JURKAT细胞,并利用质粒编码蛋白中的NEOKAN酶活性,使用G418筛选出稳定表达STAT4及STAT6的稳定细胞系。结果①质粒与DMRIEC最佳比例随细胞接种密度改变而发生变化。②当接种JURKAT细胞为25105CM2时,G418500MGML为合理的稳定筛选浓度。③在G418筛选下,转染质粒PIRES2EGFP、PIRES2EGFPSTAT4和PIRES2EGFPSTAT6的JURKAT细胞,其GFP表达高峰分别在转染后第3~4天、第6~7天和第9天出现。④使用脂质体DMRIEC转染JURKAT细胞,25105CM2组与15105CM2组转染率相差不大。⑤经G418筛选,15105CM2组筛出稳定转染的细胞克隆,但是25105CM2组未筛出。⑥转染质粒PIRES2EGFPSTAT6的JURKAT细胞经G418筛选,出现稳定转染的细胞克隆,转染质粒PIRES2EGFPSTAT6的JURKAT细胞则未筛选出任何克隆。结论经过DMRIEC转染和G418筛选,发现了质粒表达的一些特点,获得了稳定筛选的一些经验,转染PIRES2EGFPSTAT6质粒的JURKAT细胞出现了稳定表达的细胞克隆,但转染STAT4质粒的JURKAT细胞因转染率过低未能筛选出稳定细胞系。第二部分LIPOFECTAMINERLTX转染JURKAT细胞条件的优化目的优化阳离子脂质体LIPOFECTAMINERLTX转染悬浮细胞JURKAT的条件,以建立更为有效的转染方案。方法把带有绿色荧光蛋白GFP基因的两种质粒PIRES2EGFP和PIRES2EGFPSTAT6作为基因载体,采用LIPOFECTAMINERLTX转染JURKAT细胞,检测细胞转染状态、脂质体与DNA的比例、细胞接种密度、不同量培养基等对转染效果的影响,比较瞬时转染效果。结果JURKAT细胞生长速度与细胞密度密切相关,转染前1D换液,可保证细胞的良好生长状态,培养基新鲜度对细胞状态影响不大。LIPOFECTAMINERLTX体积与质粒质量之比为275ΜL500NG时,其转染效果明显优于其他各组;适当加大转染时JURKAT细胞的铺板密度,可以明显提高转染试剂的利用率;转染48H后,300ΜL孔组的荧光阳性率是600ΜL孔组的(14±02)倍,差异有统计学意义(P<005);转染后24H,各比例组(按照LIPOFECTAMINERLTX体积与质粒质量分组)转染效果差异无统计学意义(P>005);转染48H后,各比例组转染效果差异显著P<005,且LIPOFECTAMINERLTX转染两种质粒效果差异有统计学意义(P<005)。结论对LIPOFECTAMINERLTX转染悬浮细胞JURKAT做出了一些建设性意见,并阐述了转染后基因的一些表达规律,以期对悬浮细胞的转染提供相关参考。第三部分STAT4、STAT6及CBP相应基因沉默在JURKAT细胞中的相互影响观察目的利用基因沉默技术,观察由此引起的效应,并分析转录因子STAT4、STAT6及CBP在基因转录之间的相互关系。方法使用阳离子脂质体LIPOFECTAMINERLTX分别将质粒PGENESIL3SHSTAT4、PGENESIL3SHSTAT6或PGENESIL3SHCBP与检测质粒PGL3IL4R和PCAT3IFNΓ共转染入JURKAT细胞,用IL12和IL4激活JAKSTATS信号通路,利用荧光素酶报告基因检测试剂和氯霉素乙酰转移酶ELISA试剂盒检测,观察靶基因的活性。结果基因CBP的沉默可以导致基因IL4R和IFNG启动子活性的下降,统计学分析有意义(P<005);基因STAT4和STAT6的沉默所得结果没有统计学意义(P>005)。结论①CBP是启动基因IL4R和IFNG转录的重要辅助分子;②CBP在JURKAT细胞中的表达是有限的;③在人和小鼠细胞中的CBP结构可能高度保守。④转录因子STAT4和STAT6之间的相互关系暂时无法确定。
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      上传时间:2022-07-26
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    • 简介:分类号Q三垒密级公珏单位代码QQ昼鱼学号2QQ窆Q墨鱼DLKLDI03印记区域ME98基因及IGDMR在体细胞核移植牛中DNA甲基化状态分析DNAMETHYLATIONSTATUSOFME98GENEANDIGDMRWITHINDLKLDI03IMPRINTEDDOMAININCLONEDBOVINES学位申请人指导教师学科专业学位类别授予单位答辩日期胡嘉祺李世杰教授生物化学与分子生物学理学硕士河北农业大学二。一二年五月二十九日摘要体细胞核移植体细胞克隆技术在医疗、农业及畜牧业等诸多领域有重要的应用价值,而克隆效率低和克隆动物发育异常严重阻碍了该技术的应用。供体核表观遗传修饰的不完全重编程是造成克隆效率低和克隆动物发育异常的主要原因。基因组印记是由等位基因表观遗传修饰的不对称导致的,其中DNA甲基化是调控印记的一种重要方式,许多印记基因上都有差异甲基化区DIFFERENTIALLYMETHYLATEDREGIONS,DMRS,因此,基因组印记和DNA甲基化是研究核移植过程中供体核重编程的重要内容。DLKLDI03印记区域在胚胎发育过程中起非常重要的作用,然而由于缺少基因序列以及多态性信息,DLKLDI03区域在牛中印记的分子机制以及在体细胞核移植牛中的重编程还没有被研究。本研究在建立J下常牛DLKLDI03印记区域中ME98MATEMALLYEXPRESSEDGENE8基因及IGDMRTHEINTERGENICDMR,区域等位基因特异的DNA甲基化状态的基础上,分析其在体细胞核移植牛中的重编程,为揭示牛中DLKLDI03区域印记的分子机制和寻找体细胞核移植牛发育异常的原因提供依据。ME98是位于DLKLDI03印记区域内的一个母源表达的非编码蛋白的RNA基因。对ME98基因序列分析发现,其5’端没有显著的CPG岛,而在内含子3处存在一个CPG岛,为了确定该基因内部CPG岛的甲基化在调控ME98基因印记中的可能作用,应用亚硫酸盐测序法对内含子3上CPG岛内的17个CPG位点等位基因特异的DNA甲基化状态进行了分析发现两条亲本链C链和T链的甲基化程度都比较高,但是T链甲基化程度还是显著高于C链的P005,并且结果显示C链的甲基化模式只有一种。对出生48小时死亡的体细胞核移植牛肺脏中ME98基因内含子3的甲基化状态以及ME98基因印记状态进行分析,结果发现ME98基因内含子3处CPG岛的甲基化程度在正常牛和体细胞核移植牛中都比较高,但是体细胞核移植牛甲基化程度还是显著高于正常牛的甲基化程度PO05,而且甲基化模式在体细胞核移植牛个体中发生明显变化,只有一种完全甲基化的模式,而ME98基因在体细胞核移植牛个体中表达没有紊乱,仍表现为单等位基因表达,初步推测内含子3处CPG岛的甲基化没有参与调控ME98基因的表达。IGDMR是DLKLDI03印记区域上位于DLKL和G比基因间的差异甲基化区,被认为是DLKLD面3印记区域真正的印记调控区ICR,但其如何调控整个印记域的印记状态目前还不是很清楚。分析IGDMR第一个CPG岛处9个CPG位点在自然繁殖牛染色体特异的甲基化状态,发现C链与G链的甲基化程度都很高9022%和87OO%,且差异不显著,说明这几个CPG位点的甲基化不参与印记调控;在体细胞核移植牛肺脏中C链甲基化水平9780%显著高于G链5984%,且甲基化整体水平显著低于正常对照组,说明体细胞核移植牛中该区域DNA甲基化的重编程异常。关键词体细胞核移植;牛;印记基因;ME98;DNA删FIDMR
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      上传时间:2022-07-27
      页数: 62
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      上传时间:2022-07-26
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    • 简介:果糖1,6二磷酸醛缩酶FBA是一类重要的糖代谢酶,该酶既参与了糖酵解和糖异生过程,同时又参与了磷酸戊糖途径和卡尔文循环,对植物体正常的生命活动具有极其重要的作用。此外,动物和细菌中的研究还发现果糖1,6二磷酸醛缩酶能与细胞骨架结合,参与微管的聚合、细胞的内吞和膜泡运输。同时还参与了病原菌的侵染过程。但植物中关于果糖1,6二磷酸醛缩酶的研究相对较落后。目前的研究发现主要集中于果糖1,6二磷酸醛缩酶能够影响植株的生长和生物量的积累,并参与植物体逆境胁迫下的响应。拟南芥基因组中含有8个果糖1,6二磷酸醛缩酶编码基因,但其生物学功能及作用机制尚不清楚。因此本研究以拟南芥为材料,在前期对果糖1,6二磷酸醛缩酶基因家族的系统进化和表达模式分析的基础上,对其中两个胞质定位的果糖1,6二磷酸醛缩酶基因进行了初步功能分析,主要实验结果如下1用ATFBA6基因的全长核苷酸序列构建超表达和GFP融合蛋白的载体,转化拟南芥后获得转基因株系,表达量检测说明转基因植株可用。2激光共聚焦扫描显微镜观察结果表明,ATFBA6编码的蛋白定位于胞质。3从SALK突变体库订购ATFBA6的TDNA插入突变体SALK014964C。对FBA6突变体和多个ATFBA6超表达转基因株系进行表型分析,发现在正常生长条件下,突变体与野生型没有明显差异,而超表达转基因株系比野生型生长速度加快,植株鲜重增加。4显微观察结果表明ATFBA6超表达株系中细胞的数目没有增加,但单个细胞体积明显增大。生化分析结果表明ATFBA6超表达株系中总糖和ATP含量高于野生型。说明,ATFBA6超表达后可以促进植物糖的合成和能量供应,使植株生长加快。5我们前期的研究发现ATFBA8在植物花中的表达量最高。表型分析发现ATFBA8两个TDNA插入突变体FBA81和FBA82的果荚结实率明显低于野生型。6花形态分析表明,FBA81和FBA82突变体的花发育和花形态(包括花瓣、雄蕊、心皮的数目,花丝的长度以及柱头的发育)与野生型一致。FBA8突变体与野生型拟南芥正反交结果表明FBA8果荚结实率降低是由于雄配子体在有性生殖过程中异常导致的。7ALEXER染色和DAPI染色结果表明FBA8突变体的雄配子体花粉的发育、成熟和活性均是正常的。8花粉体外萌发实验结果表明,FBA8突变体的花粉萌发率降低。
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      上传时间:2022-07-26
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    • 简介:MASTERDISSERTATIONPTACIOISINVOLVEDINPEPDEPENDENTCHLOROPLASTGENETRANSCRIPTIONANDEXPRESSIONTUANTUANZHAODIRECTEDBYPROFYANGZHONGNANCOLLEGEOFLIFEANDENVIRONMENTALSCIENCES,SHANGHAINORMALUNIVERSITYSHANGHAI,CHINA,200234APRIL,2013本论文经答辩委员会全体委员审查,确认符合上海师范大学硕博士学位论文质量要求。一黧椭磊砖导师徊怿勰徘一哪擒陂肛偿产参研科研针,如举懈惭
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      上传时间:2022-07-26
      页数: 61
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    • 简介:ATHESISSUBMITTEDTOZHENGZHOUUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFMASTERCLONINGANDANALYSISOFNBSTYPERESISTANCEGENESINSESAMEAGAINSTMACROPHOMINAPHASEOLINAPATHOGENBYMUYUSUPERVISORPROFBAOMINGTIAN,HONGYANLIUCROPGENETICSANDBREEDING1一、●●●BLOENGLNEENNGDEPARTMENTMAY2013摘要摘要芝麻是我国重要的油料作物之一,在芝麻生长过程中芝麻茎点枯病是严重威胁芝麻生产的一种真菌性病害。在芝麻病害防治上,除了化学防治,种植抗病品种是一种安全、有效的防病措施,但芝麻生产中可供利用的抗病品种还很少,所以克隆抗病基因,研究抗病机理,对于加快芝麻抗病育种进程具有重要意义。本研究利用前期获得的芝麻抗茎点枯病NBSRGAS与河南省芝麻研究中心提供的EST序列比对结果设计特异引物,从不同抗性的芝麻品种中克隆抗病相关基因。选择高抗茎点枯病的芝麻品种“商水农家种”,及感病的芝麻品种“冀9014”、“和尚头“,设置接茎点枯病菌及不接菌处理,利用QRTPCR技术分析了已克隆的基因表达模式,结果如下1芝麻抗茎点枯病相关基因的克隆选取1L份对茎点枯病具有不同抗性的芝麻品种为材料,利用PCR技术,得到21个RGA基因,GENBANK登录号分别为KC477692~KC477707、KC771241~KC771243,它们编码的氨基酸序列均具有NBS类型抗病基因编码蛋白的共有特征结构域P100P和NBARC结构。BLASTX分析结果表明,21个RGA的部分编码蛋白序列与已知的含有NBARC信号传导结构域的蛋白质、NBSLRR类型抗病基因等的编码蛋白同源性为35%~52%。利用MEGA40聚类分析发现这21个RGA基因聚为4类,分别命名为SIRGAL、SIRGA2、SIRGA8、SIRGAL2。2芝麻抗茎点枯病相关基因的表达模式分析实时分析已克隆基因在茎点枯病菌诱导下亲和组合与非亲和组合中72H内的表达模式,结果表明叶部组织中,除了SIRGA6只在亲和组合中受到了诱导表达,其余在亲和组合及非亲和组合中均受到了诱导表达,其中SIRGAL、4、11、12基因在亲和组合中的表达量高于非亲和组合中的表达量,SIRGA2、8基因在非亲和组合中的表达量要高于亲和组合,S1RGA7基因在非亲和组合和亲和组合中表达量无明显差异。茎部组织中SIRGAL、2、4、11、12均受茎点枯病菌的诱导表达上调,且在亲和组合中的表达量高于非亲和组合中的表达量,SIRGA6、8基因在非亲和组合中的表达量要显著高于亲和组合。综上所述,1
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    • 简介:山西大学2013届硕士学位论文肽链释放因子与TRNA的协同进化对终止密码子重新分配的影响作者姓名指导教师学科专业研究方向培养单位学习年限郝燕蓉柴宝峰教授生物化学与分子生物学细胞分子生物学生物技术研究所2010年9月至2013年7月二。一三年六月目录JIIIIIIIIIIIIPIIIIPIULPIIIUIIIIILY2317874中文摘要_■_J___IABSTMIII第一章文献综述111第一类肽链释放因子11I1第一类肽链释放因子的结构LII2第一类肽链识别终止密码子的机制112蛋白质合成终止过程中各因子之间相互作用313蛋白质合成终止过程中各因子在进化上存在一定的协同性414蓝氏贾第鞭毛虫、滴虫和八肋游仆虫的特点及本课题的研究意义5141蓝氏贾第鞭毛虫5142滴虫5143八肋游仆虫5144本课题研究的意义6第二章滴虫两类肽链释放因子的相互作用721实验材料7211菌株和质粒7212主要试剂的配制7213主要的酶和生化试剂822实验方法8221酵母双杂交重组质粒的构建8222酵母双杂交重组质粒的共转化9223P一半乳糖苷酶活性分析923实验结果10231酵母双杂交重组质粒的构建10232酵母双杂交实验1024讨论11第三章贾第虫ERFL及突变体识别终止密码子的性质和活性分析1231材料12311实验菌株和质粒12
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